YALEPIC® 植物直扩PCR鉴定试剂盒
叶片种子直扩 | 免核酸提取 | 耐多糖多酚 | 15kb多重PCR | 植物转基因鉴定专用
| 产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
|---|---|---|---|
| YEM41028 | 250rxns | 650.00 | — |
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产品简介
YALEPIC® Plant Direct PCR Kit采用特殊修饰的DNA Polymerase、高度优化的粗样本裂解液及PCR缓冲体系，对不同类型的植物叶片、种子简单裂解后进行PCR扩增，扩增产物为平末端。无需进行基因组提取等步骤，极大缩短了实验耗时，操作简单快速。本试剂盒对植物中的PCR抑制物有极强的耐受性，本试剂盒可适用于15 kb以内片段的多重 PCR 反应，反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开盖、移液等操作，显著降低样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的可重复性。体系中预混有电泳缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。
适用范围
– 转基因植株鉴定与转基因阳性苗批量筛查；
– 植物基因型鉴定 / 植物基因分型（Plant Genotyping）；
– 分子标记辅助选择育种（MAS）与品种纯度、种质资源鉴定；
– CRISPR/Cas9 基因编辑植株突变位点检测与编辑效率评估；
– T-DNA / 转座子插入突变体鉴定与插入位点验证；
– 高通量植物样本 PCR 筛查（育种群体、突变体库、回交后代等）。
产品组分
| 组分 | 规格 |
| YLS Lysis Buffer | 15 ml |
| YDS Buffer | 15 ml |
| 2 × YALEPIC® Plant Direct PCR MasterMix (Dye) | 2 × 1.25 ml |
| Nuclease-free ddH2O | 5 ml |
实验案例
以YEM41028裂解所获得的拟南芥叶片粗提液、水稻叶片粗提液、玉米叶片粗提液以及烟草叶片粗提液为模板，同时以上述四种植物基因组DNA为正对照，无模板的扩增体系为负对照，分别扩增不同长度的目的片段，均可成功扩增。说明YEM41028有较强的样本兼容性以及粗提和扩增的能力。
保存及运输条件
2 × YALEPIC® Plant Direct PCR MasterMix (Dye) 需 -20℃ 避光保存，≤ 0℃ 运输；其余组分 2~8℃ 保存，长期 -20℃ 保存，避免反复冻融。
Q1：什么是”植物直扩PCR”？和传统先提基因组再做PCR有什么区别？
A1：传统流程需先用 CTAB 法或试剂盒提取植物基因组 DNA，经酚氯仿抽提或柱式纯化、乙醇沉淀后，方能作为 PCR 模板，整个前处理往往耗时长且核酸损失可观。植物直扩 PCR 则是跳过 DNA 纯化步骤——植物叶片或种子经裂解液快速裂解后，释放出的基因组 DNA 直接用作 PCR 模板。这一改变把前处理从数小时压缩到数分钟，尤其适合大批量样本筛查（如转基因阳性苗鉴定、育种群体分型），同时避免了多次移液带来的样本交叉污染与 RNA/核酸损失。
Q2：本试剂盒可用于哪些植物？难扩增的植物能用吗？
A2：本试剂盒适用于多种常见植物的叶片与种子，包括水稻、小麦、玉米、大豆、烟草、番茄、拟南芥等。针对传统直扩中常见的”提不纯就扩不动”问题，试剂盒对植物组织中的多糖、多酚及其他次生代谢产物等 PCR 抑制物具有极强耐受性，因此对多数难扩增物种（如果树、林木、中药材等富含次生代谢物的植物）也能保持较稳定的扩增表现。
Q3：新鲜样本和冻存样本都能用吗？-80℃ 保存的老样本呢？
A3：均可使用。推荐使用新鲜植物组织，扩增效率最佳；若为 -80℃ 冻存样本或液氮研磨后冻存的样本，取出后按说明书条件裂解同样可以进行直扩。需注意：长期冻存的样本应尽量避免反复冻融，以减少模板降解对 PCR 效率的影响；建议采集后立即分装保存。
Q4：YLS Lysis Buffer 和 YDS Buffer 分别起什么作用？为什么要两个缓冲液？
A4：这是一个两步裂解-中和体系，也是植物直扩能稳定进行的关键设计：
- YLS Lysis Buffer：负责快速裂解植物组织、释放基因组 DNA；
- YDS Buffer：对裂解产物进行中和与稳定处理，降低裂解液中残留抑制物对后续 PCR 的干扰。
两步法是植物直扩产品的主流设计。相比单一裂解液设计，它能显著降低粗裂解产物对聚合酶的抑制，提升扩增成功率与重复性。
Q5：裂解产物加入 PCR 体系的量该怎么把握？加多少合适？
A5：裂解产物用量是影响直扩成败的关键变量之一，具体推荐体积请参照随货说明书。一般原则是：
- 用量过少：模板浓度不足，目标条带偏弱甚至无扩增；
- 用量过多：带入的裂解液成分与植物内源抑制物浓度升高，反而抑制聚合酶活性，导致扩增失败。
若多次尝试后仍无扩增，可将裂解产物按适当倍数稀释后再加入 PCR 体系，通常能有效缓解抑制现象。
Q6：为什么我的直扩 PCR 无条带或条带很弱？怎么排查？
A6：常见原因及处理思路：
| 可能原因 | 解决方案 |
| 组织未充分裂解 | 将叶片尽量剪碎或用枪头/研磨杵充分捣碎，确保组织完全浸没于裂解液中 |
| 裂解产物用量不当 | 按说明书调整用量；抑制明显时可将裂解产物适当稀释后再加 |
| 退火温度设置过高 | 逐步降低退火温度（每次约 2~3℃）进行优化 |
| 循环数不足 | 适当增加 PCR 循环数以提升产物量 |
| 引物特异性差 | 重新设计引物，并通过 BLAST 核对特异性 |
| 模板质量差（陈旧/反复冻融） | 优先使用新鲜组织，避免反复冻融 |
| Plant MasterMix 反复冻融失活 | 按次分装保存，避免整管反复冻融 |
建议同时设置阳性对照（已知可扩增的模板），用于快速区分是”样本/模板问题”还是”体系/操作问题”。
Q7：出现非特异性扩增或杂带怎么办？
A7：非特异扩增通常由以下因素导致：退火温度偏低、循环数过多、引物或模板浓度过高、未在冰上配制体系、配制后放置过久。对应的处理措施为：升高退火温度、减少循环数、降低引物与模板浓度、全程冰上操作并缩短配制后在室温的放置时间；若引物本身特异性不佳，建议重新设计并 BLAST 验证。
Q8：本试剂盒可以做多重 PCR 吗？最长能扩多少 kb？
A8：可以。本试剂盒支持多重 PCR 反应，适用于多位点同时检测、多基因联合鉴定的场景，常用于转基因元件多片段同步筛查与分子标记组合分型。试剂盒适用于 15 kb 以内靶标片段的扩增。需提醒的是，多重 PCR 中各引物对之间的竞争性会随着重数上升而加剧，建议先分别验证单重扩增效果，再逐步提高重数，并根据需要调整各引物的终浓度配比。
Q9：扩增产物可以直接电泳吗？下游还能做什么？
A9：可以直接电泳。 2 × Plant Direct PCR MasterMix (Dye) 中已预混电泳缓冲液与染料，PCR 结束后无需额外添加 Loading Dye，直接取样点样进行琼脂糖凝胶电泳即可观察结果，简化了操作步骤。
本试剂盒扩增产物为平末端（Blunt End），因此下游可进一步用于：
- 平末端克隆：直接连入平末端载体；
- 测序分析：常规 Sanger 测序或扩增子测序；
- 酶切鉴定、dHPLC 分析等常规下游操作。
Q10：试剂盒该怎么保存？反复冻融有影响吗？
A10：试剂盒组分需分区保存：
- 2 × Plant Direct PCR MasterMix (Dye)：-20℃ 避光保存，运输条件 ≤ 0℃；
- YLS Lysis Buffer、YDS Buffer、Nuclease-free ddH2O：2~8℃ 保存，长期存放建议置于 -20℃。
反复冻融会导致酶活性下降，影响扩增效率。建议首次解冻后充分混匀、短暂离心，并按使用频次进行小份分装（如按 10 次反应用量一管），每次取用一份，避免整管反复冻融。若 MasterMix 出现明显活性衰减，建议更换新批次。
