YALEPIC^® U+ One Step qRT-PCR Probe MasterMix

• YALEPIC^® U+ One Step qRT-PCR Probe MasterMix是雅礼生物专为 RNA病毒定量PCR检测 而研发的一步法荧光定量RT-PCR预混液。产品整合了 YALEPIC^®Script III 逆转录酶、RNase抑制剂 及 YALEPIC^®热启动Taq DNA聚合酶 的三重核心酶系优势，配合经过深度优化的缓冲体系，逆转录与qPCR扩增在同一反应管内一步完成，无需开管或额外移液操作，大幅提升检测通量并有效降低气溶胶污染风险。
• 本产品特别引入 dUTP/UDG防污染系统，可有效降解残留扩增产物，杜绝假阳性结果，尤其适用于 TaqMan荧光探针法 等高特异性检测平台。产品浓度为 2×即用型预混液，使用时仅需加入模板RNA/DNA、上下游引物、ROX Reference Dye（根据仪器选择）及ddH₂O即可上机反应，操作便捷、重复性优异。

• RNA病毒检测：适用于新冠病毒、流感病毒、HBV、HCV、HIV等RNA病毒的定量检测与载量监测
• 病原微生物检测：适用于细菌、真菌等病原体的RNA检测
• 融合基因检测：适用于肿瘤相关融合基因的定量检测
• DNA/RNA共检：支持同一样本中DNA和RNA的同步检测
• 基因表达分析：适用于mRNA、lncRNA、circRNA等各类RNA的表达量定量分析
• 药物残留检测：适用于生物制品中的药物残留核酸检测
• 高通量筛查：适用于大规模样本的快速筛查场景

-20℃ 保存，＜ 0℃ 运输。

Q1：一步法qRT-PCR与两步法qRT-PCR有什么区别？如何选择？

A： 一步法qRT-PCR将逆转录和qPCR扩增在同一反应管中连续完成，操作简便、减少移液步骤和污染风险，适合高通量样本检测和单基因快速检测。两步法则将逆转录和qPCR分步进行，可以获得更多cDNA用于多个基因检测，灵活性更高，但操作更繁琐––。YALEPIC U+ One Step qRT-PCR MasterMix采用优化的缓冲体系，可有效降低逆转录酶对后续PCR步骤的抑制，在保持一步法操作便捷优势的同时实现高灵敏度检测。

Q2：YALEPIC U+ One Step qRT-PCR MasterMix的灵敏度是多少？可以检测到多低浓度的RNA模板？

A： 本产品灵敏度可达0.1 pg RNA模板，可精准捕捉低载量病毒感染样本和低丰度基因的表达信号。

Q3：dUTP/UDG防污染系统是如何工作的？能完全避免假阳性吗？

A： dUTP/UDG防污染系统的原理是：在PCR扩增过程中用dUTP替代部分dTTP，使扩增产物中掺入dUTP。在下一轮反应开始前，UDG酶会特异性识别并切割含dUTP的DNA片段，使其无法作为模板被扩增，从而有效预防PCR产物的气溶胶污染导致的假阳性结果。该系统能够大幅降低假阳性风险，但仍建议配合规范实验操作（如分区操作、使用带滤芯枪头等）以获得最佳防污染效果。

Q4：本产品可以用于多重基因的同时检测吗？

A： 可以。YALEPIC U+ One Step qRT-PCR Probe MasterMix兼容TaqMan等荧光标记探针的高特异性检测系统，支持单管多重qPCR检测，只需在反应体系中加入对应的多组引物和不同荧光标记的TaqMan探针即可，适用于高通量筛查和多重病原检测等场景。

Q5：本产品是否需要添加ROX参比染料？

A： 视您的qPCR仪器型号而定。本产品提供单独的ROX Reference Dye，用户可根据所使用的qPCR仪选择是否添加。ABI系列（如7500、7900HT、QuantStudio等）通常需要ROX参比染料进行荧光信号归一化；罗氏LightCycler、Bio-Rad CFX等多数机型则不需要添加ROX。建议参考仪器说明书确认。

Q6：本产品的有效期是多久？如何正确保存？

A： 本产品在-20℃避光条件下可稳定保存24个月，建议避免反复冻融。首次解冻后，建议按单次实验用量分装保存，以减少反复冻融对酶活性的影响。运输条件为＜0℃（冰袋或干冰运输），收货后请立即置于-20℃保存。

Q7：本产品是否适用于RNA病毒检测？

A： 适用。本产品专为以RNA为模板的定量PCR检测而设计，特别适用于RNA病毒的定量检测，包括新冠病毒、流感病毒、HBV、HCV、HIV等RNA病毒的载量监测和病原检测。

Q8：本产品与同类竞品相比有什么优势？

A： YALEPIC U+ One Step qRT-PCR Probe MasterMix在灵敏度（0.1 pg RNA模板）、防污染设计（dUTP/UDG系统）、操作便捷性（2×预混液，即用型）等方面达到行业主流水平。产品经过深度优化的缓冲体系可有效降低逆转录酶对PCR步骤的抑制，在保持高灵敏度的同时提升检测特异性。同时，雅礼生物提供专业技术支持和快速响应的售后服务，可根据客户需求进行个性化定制和批量供应。

Q9：使用本产品进行qRT-PCR时，引物和探针的推荐浓度是多少？

A： 建议引物的终浓度为100-500 nM，TaqMan探针的终浓度为100-500 nM，用户可根据具体靶基因的表达丰度进行优化调整。反应体系构建时，建议首先使用推荐的浓度范围进行预实验，根据扩增曲线Ct值和荧光信号强度确定最佳使用浓度。

Q10：本产品是否可以用于DNA/RNA混合样本的共检？

A： 可以。本产品支持DNA/RNA混合样本的同步检测，适用于同时含有DNA和RNA模板的样本类型，无需分别处理。这一特性在病原检测、融合基因检测等场景中具有重要应用价值。

Q11：如果qRT-PCR结果出现非特异性扩增或引物二聚体，该如何优化？

A： 如出现非特异性扩增，建议尝试以下优化措施：（1）提高退火温度（以2-3℃为梯度递增）；（2）重新设计特异性更高的引物；（3）减少引物使用浓度（尝试降至100-200 nM）。YALEPIC U+ One Step qRT-PCR MasterMix采用热启动Taq DNA Polymerase，常温下酶活性被封闭，已有效降低了非特异性扩增的风险。

Q12：本产品的包装规格有哪些？是否支持大包装定制？

A： 目前产品包装规格为200 rxns（货号YPQ42003-01）。雅礼生物支持大包装定制和OEM服务，具体需求可联系销售部门（电话：0512-66256010，邮箱：info@yalibiotech.com）进一步沟通。

Q13：使用本产品时，RNA模板的质量有什么要求？

A： 建议使用高纯度、无基因组DNA污染的RNA模板。模板的完整性对qRT-PCR结果有显著影响，推荐使用经DNase I处理去除基因组DNA污染的RNA样本。模板总RNA的推荐起始量为1 pg – 1 μg，可根据靶基因的表达丰度适当调整。