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裂解液（Tryzol Reagent）在低温保存后出现结晶或沉淀，还能继续使用吗？

 可以正常使用。裂解液在2~8℃保存时，部分盐类成分可能会析出形成结晶。使用前请将试剂取出，在室温（15-25℃）下静置或37℃水浴使其完全溶解，充分摇匀后即可恢复原有性能，不影响RNA提取效果。

这款试剂盒可以直接去除 DNA 污染吗？

可以。试剂盒内置 DNase I与配套缓冲液，可在纯化流程中原位酶解去除基因组 DNA，无需额外处理，有效避免 DNA 干扰下游实验。

是否需要使用氯仿？操作是否安全？

不需要。本试剂盒采用TryCOM 专用组分替代氯仿，无有毒有机溶剂，操作更安全，适合常规实验室与教学场景使用。

可用于哪些样本的总 RNA 提取？

适用于动物组织、培养细胞、微生物、低次生代谢植物材料、病毒、体液等多种样本，通用性强。

提取的 RNA 可直接用于哪些实验？

可直接用于RT‑PCR、荧光定量 PCR、基因芯片、Northern Blot、Poly (A) 筛选、体外翻译、分子克隆等下游分子实验。

试剂盒不同组分如何保存？有效期多久？

DNase I 及 10×DN Buffer‑20℃保存；Tryzol Reagent 2–8℃避光保存；其余组分室温保存。严格按条件储存可保障稳定效期。

多糖多酚植物样本能用这款试剂盒吗？

本试剂盒更适合次生代谢较少的植物材料；高多糖多酚复杂植物样本建议选用雅礼生物专用植物 RNA 提取试剂盒。

柱式法相比传统 Trizol 法有哪些优势？

柱式法操作更简便、耗时更短、重复性更好，RNA 纯度与得率更稳定，无需异丙醇沉淀，减少损失与污染风险。

样本起始量建议多少？

常规动物组织约 50–100mg，培养细胞约 10⁶–10⁷个，植物组织≤100mg，具体可参考产品说明书优化。

一步法qRT-PCR与两步法qRT-PCR有什么区别？如何选择？

 一步法qRT-PCR将逆转录和qPCR扩增在同一反应管中连续完成，操作简便、减少移液步骤和污染风险，适合高通量样本检测和单基因快速检测。两步法则将逆转录和qPCR分步进行，可以获得更多cDNA用于多个基因检测，灵活性更高，但操作更繁琐––。YALEPIC U+ One Step qRT-PCR MasterMix采用优化的缓冲体系，可有效降低逆转录酶对后续PCR步骤的抑制，在保持一步法操作便捷优势的同时实现高灵敏度检测。

YALEPIC U+ One Step qRT-PCR MasterMix的灵敏度是多少？可以检测到多低浓度的RNA模板？

 本产品灵敏度可达0.1 pg RNA模板，可精准捕捉低载量病毒感染样本和低丰度基因的表达信号。

dUTP/UDG防污染系统是如何工作的？能完全避免假阳性吗？

 dUTP/UDG防污染系统的原理是：在PCR扩增过程中用dUTP替代部分dTTP，使扩增产物中掺入dUTP。在下一轮反应开始前，UDG酶会特异性识别并切割含dUTP的DNA片段，使其无法作为模板被扩增，从而有效预防PCR产物的气溶胶污染导致的假阳性结果。该系统能够大幅降低假阳性风险，但仍建议配合规范实验操作（如分区操作、使用带滤芯枪头等）以获得最佳防污染效果。

本产品可以用于多重基因的同时检测吗？

可以。YALEPIC U+ One Step qRT-PCR Probe MasterMix兼容TaqMan等荧光标记探针的高特异性检测系统，支持单管多重qPCR检测，只需在反应体系中加入对应的多组引物和不同荧光标记的TaqMan探针即可，适用于高通量筛查和多重病原检测等场景。

本产品是否需要添加ROX参比染料？

视您的qPCR仪器型号而定。本产品提供单独的ROX Reference Dye，用户可根据所使用的qPCR仪选择是否添加。ABI系列（如7500、7900HT、QuantStudio等）通常需要ROX参比染料进行荧光信号归一化；罗氏LightCycler、Bio-Rad CFX等多数机型则不需要添加ROX。建议参考仪器说明书确认。

本产品的有效期是多久？如何正确保存？

本产品在-20℃避光条件下可稳定保存24个月，建议避免反复冻融。首次解冻后，建议按单次实验用量分装保存，以减少反复冻融对酶活性的影响。运输条件为＜0℃（冰袋或干冰运输），收货后请立即置于-20℃保存。

本产品是否适用于RNA病毒检测？

适用。本产品专为以RNA为模板的定量PCR检测而设计，特别适用于RNA病毒的定量检测，包括新冠病毒、流感病毒、HBV、HCV、HIV等RNA病毒的载量监测和病原检测。

本产品与同类竞品相比有什么优势？

 YALEPIC U+ One Step qRT-PCR Probe MasterMix在灵敏度（0.1 pg RNA模板）、防污染设计（dUTP/UDG系统）、操作便捷性（2×预混液，即用型）等方面达到行业主流水平。产品经过深度优化的缓冲体系可有效降低逆转录酶对PCR步骤的抑制，在保持高灵敏度的同时提升检测特异性。同时，雅礼生物提供专业技术支持和快速响应的售后服务，可根据客户需求进行个性化定制和批量供应。

使用本产品进行qRT-PCR时，引物和探针的推荐浓度是多少？

建议引物的终浓度为100-500 nM，TaqMan探针的终浓度为100-500 nM，用户可根据具体靶基因的表达丰度进行优化调整。反应体系构建时，建议首先使用推荐的浓度范围进行预实验，根据扩增曲线Ct值和荧光信号强度确定最佳使用浓度。

本产品是否可以用于DNA/RNA混合样本的共检？

可以。本产品支持DNA/RNA混合样本的同步检测，适用于同时含有DNA和RNA模板的样本类型，无需分别处理。这一特性在病原检测、融合基因检测等场景中具有重要应用价值。

如果qRT-PCR结果出现非特异性扩增或引物二聚体，该如何优化？

 如出现非特异性扩增，建议尝试以下优化措施：（1）提高退火温度（以2-3℃为梯度递增）；（2）重新设计特异性更高的引物；（3）减少引物使用浓度（尝试降至100-200 nM）。YALEPIC U+ One Step qRT-PCR MasterMix采用热启动Taq DNA Polymerase，常温下酶活性被封闭，已有效降低了非特异性扩增的风险。