DNA / siRNA / mRNA 通用,操作简单,重复性优异
| 产品货号 | 产品规格 | 目录价 |
|---|---|---|
| YJ52011-01 | 1ml | 2800.00 |
细胞类型:
多种贴壁细胞系(HEK293、Hela、CHO-K1、COS-7、A549)、悬浮细胞系(K562、Jurkat)以及原代细胞和难转染细胞系。难转染细胞经验证包括:树突状细胞(DC)、BMDC、4T1、CT26、DC2.4、HepG2、NIH3T3等。
核酸类型:
DNA质粒(建议使用无内毒素质粒,A260/A280比值1.8-2.0)、siRNA(建议使用高质量化学合成siRNA)、mRNA(建议使用带帽和polyA加尾的体外转录mRNA)。
下游应用:
基因过表达研究、siRNA基因沉默/RNAi干扰、mRNA瞬时蛋白表达、CRISPR/Cas9基因编辑共转染、病毒包装(慢病毒、逆转录病毒包装质粒共转染)、稳定细胞系筛选。
常温运输;2 ~ 8℃ 保存,不可冷冻。
A:试剂需 2~8℃冷藏保存,绝对不可冷冻;产品支持常温运输,取用前颠倒混匀即可。
Q2:试剂开盖后能使用多久?有哪些注意事项?
A:规范 2~8℃密封冷藏,开盖后建议 3 个月内用完;减少长时间开盖,避免试剂氧化影响转染效果。
Q3:转染增强缓冲液需要和转染试剂分开保存吗?
A:无需分开,两种组分统一 2~8℃冷藏保存,配套使用即可。
Q4:这款转染试剂可以同时转染 DNA 和 siRNA 吗?
A:可以,产品支持 DNA/siRNA 共转染,文档内附有专属优化实验方案与用量配比。
Q5:LFDR3 + 能用于悬浮细胞和难转染细胞吗?
A:支持,本试剂专为贴壁细胞、悬浮细胞及各类难转染细胞系设计,转染表现优异。
Q6:转染过程中培养基可以添加抗生素吗?
A:不建议,细胞铺板及转染全程请使用无抗生素培养基,抗生素会降低转染效率。
Q7:配制转染复合物必须使用 Opti-MEM 吗?
A:优先使用 Opti-MEM,也可选用其他无血清、无双抗细胞培养基,禁止使用完全培养基配制复合物。
Q8:转染复合物的室温静置时间需要严格遵守吗?
A:需要。DNA、siRNA、mRNA 单转染静置 15min,DNA/siRNA 共转染静置 10min,时间偏差会影响复合物形成。
Q9:转染完成后一定要更换培养基吗?
A:非强制。质粒、siRNA 转染可在 4~8h 换液;mRNA 转染建议 6~8h 换液,可进一步降低细胞毒性。
Q10:24 孔板细胞铺板密度有标准要求吗?
A:贴壁细胞融合度控制 60%~90%(根据核酸类型调整);悬浮细胞统一建议铺板密度 4~8×10⁵cells/ml。
Q11:配制复合物时操作力度有要求吗?
A:全程轻柔操作,剧烈吹打会破坏核酸 – 试剂复合物,同时损伤细胞,导致转染失败。
A:可以,96 孔、12 孔、6 孔板、培养皿均可按照 24 孔板标准用量等比例缩放。
Q13:如何调整试剂与核酸的比例,提升转染效率?
A:可参考优化区间调整:试剂:DNA 为 2:1~2:4:1;试剂:siRNA 为 0.02:1~0.15:1;试剂:mRNA 为 0.5:1~5:1。
Q14:转染试剂用量越多,转染效果越好吗?
A:不是。试剂过量会大幅提升细胞毒性,造成细胞死亡,需严格按照推荐用量或优化区间使用。
Q15:转染后细胞大量死亡,是什么原因?
A:常见原因:试剂用量过大、转染时间过长、培养基添加抗生素、细胞密度过低;可减少试剂用量、按时换液排查。
Q16:转染后检测不到目标表达,转染效率偏低怎么办?
A:① 检查细胞融合度是否达标;② 优化试剂与核酸配比;③ 确认复合物静置时间充足;④ 保证核酸纯度(推荐无内毒素质粒)。
Q17:不同批次试剂转染效果不一致如何解决?
A:试剂常温运输、2~8℃密封保存,每次使用前充分混匀;新批次可先做小试,微调用量适配细胞。
Q18:该转染试剂可以用于临床实验或人体相关研究吗?
A:本产品仅适用于实验室科学研究,严禁用于临床诊断、人体治疗及活体临床实验。