YALEPIC^® 磁珠法动物细胞/组织总RNA提取试剂盒

YALEPIC^® MagEVO Animal Cell & Tissue Total RNA Extraction Kit是一款专为生命科学研究打造的高性能磁珠法RNA提取试剂盒。该产品采用雅礼生物自主研发的独特裂解与结合缓冲体系，能够从动物组织（10~20 mg）或培养细胞（≤1×10⁷个）中快速、高效地释放并纯化总RNA。与传统柱式法相比，本试剂盒利用超顺磁性纳米磁珠对核酸进行特异性吸附，有效去除蛋白质、基因组DNA及其他杂质干扰。提取的RNA完整性好、纯度高（OD260/280稳定在1.9-2.1之间），可直接用于RT-qPCR、荧光定量PCR、Northern Blot、RNA-Seq文库构建等高灵敏度分子生物学实验。产品提供手动操作与预装版两种规格，无缝对接市面上主流全自动核酸提取仪，满足从少量样本验证到大规模高通量筛选的多样化需求。

• 高纯度与高得率： 优化的磁珠表面修饰技术，确保RNA特异性结合，有效排除多糖、多酚及蛋白污染，A260/A280比值稳定。
• 广泛的样本兼容性： 经充分验证，适用于肝脏、肾脏、肌肉、脑组织等多种难提动物组织及各类贴壁/悬浮培养细胞。
• 自动化高通量适配： 提供32T/48T/96T预装板规格，完美匹配雅礼及其他品牌全自动核酸提取仪，显著降低人工误差，提升实验通量。
• 安全便捷： 全程无需苯酚/氯仿等有毒试剂，室温保存运输（酶组分除外），操作流程简化，40分钟内即可完成批量提取。
• 下游应用无忧： 内置高效DNase I消化步骤，彻底去除gDNA残留，确保qPCR与测序数据的准确性。

• 动物组织：15~25 mg（推荐用量），适用于肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏、脑组织、皮肤、肌肉、脂肪组织等常见哺乳动物组织样本。

• 培养细胞：≤1×10⁷个，适用于贴壁细胞（如HEK293、HeLa、A549等）及悬浮细胞（如Jurkat、K562等）的总RNA提取。

• 特殊样本提示：对于脂肪含量较高或RNase含量丰富的组织（如胰腺、脾脏），建议适当增加裂解液用量或使用RNase抑制剂辅助处理，以确保RNA完整性和得率。

• DNase I+10×DN Buffer：低温冷链运输，长期 – 20℃避光保存，避免反复冻融；
• 其余缓冲液、磁珠、预装板等全组分：常温（10~30℃）运输，室温避光存放，无需冷藏，储存有效期 18 个月。

Q1：使用MagEVO RNA提取试剂盒提取的总RNA出现降解，电泳显示条带弥散或无清晰条带，可能是什么原因？如何解决？

A：RNA降解通常由以下原因引起：

1. 样本保存不当：动物组织离体后未及时冷冻或加入裂解液，导致内源性RNase被激活。建议取样后立即置于液氮中速冻，或直接加入试剂盒提供的裂解液中进行匀浆处理。

2. RNase污染：实验过程中使用的枪头、离心管、移液器、工作台面等可能引入外源性RNase。建议使用无RNase认证的实验耗材，操作时佩戴手套并经常更换，使用DEPC处理水配制相关试剂。

3. 样品反复冻融：样本多次冻融会破坏RNA完整性。建议将样品分装保存，避免反复冻融。

4. 操作剧烈：涡旋震荡或吹打过于剧烈可能导致RNA机械断裂。建议裂解后轻弹混匀，吹打时保持温和。

Q2：RNA提取后得率偏低（Nanodrop检测浓度<50 ng/μL），如何提高RNA产量？

A：RNA得率偏低可从以下几个方面排查和优化：

1. 样品用量不足：请确认动物组织用量在15~25 mg范围内，培养细胞在1×10⁶~1×10⁷个范围内。过少的样本量会导致RNA总量偏低。

2. 裂解不充分：动物组织样本建议液氮研磨至粉末状再加入裂解液，或用电动匀浆器充分匀浆；培养细胞加入裂解液后应充分吹打至细胞完全裂解，无明显团块。

3. 磁珠洗涤损失：磁分离洗涤过程中，应确保磁珠充分被磁力架吸附后再弃去上清，避免磁珠被误吸走。弃上清时使用移液器小心吸取，避免扰动磁珠。

4. 洗脱条件优化：加入洗脱液后，建议在室温孵育2~5分钟，必要时可于55~65℃加热2~3分钟以增强洗脱效率。必要时可进行二次洗脱以提高回收率。

Q3：提取的RNA经Nanodrop检测A260/A280比值偏低（<1.8）或偏高（>2.1），表示什么？如何改善RNA纯度？

A：A260/A280比值是评估RNA纯度的重要指标：

• 比值<1.8：通常表示存在蛋白质、多糖或苯酚污染。建议措施：①确保裂解完全后再进行磁珠结合；②适当增加洗涤次数（使用试剂盒提供的洗涤液I和洗涤液II）；③避免在磁分离时吸入蛋白沉淀层。

• 比值>2.1：通常表示RNA已发生降解，或存在盐离子残留。建议措施：①遵循Q1中的RNA降解解决方案；②确保洗涤后磁珠充分干燥（可短暂离心后用移液器吸净残留洗涤液），避免乙醇残留影响读数。

理想情况下，高品质RNA的A260/A280比值应在1.9~2.1之间。

Q4：进行qRT-PCR实验时，无模板阴性对照出现扩增信号，可能是DNA污染所致。MagEVO试剂盒如何去除基因组DNA？

A：MagEVO动物细胞/组织总RNA提取试剂盒内置了DNase I消化步骤，可有效去除残留的基因组DNA。具体建议如下：

1. DNase I消化：按照说明书操作，在磁珠结合RNA后，加入DNase I反应液进行柱上/磁珠上消化，确保消化时间充分（通常为15分钟，室温）。

2. DNase I失活：消化后需彻底洗涤以去除DNase I及其反应产物，避免其对后续反转录酶产生抑制。

3. 引物设计策略：若实验对DNA残留极其敏感（如检测低丰度基因或内含子跨越设计受限），建议设计跨内含子引物或使用DNase I处理后的RNA作为模板设置“无反转录酶（No-RT）”对照组，以监控DNA残留情况。

Q5：使用自动化核酸提取仪时，MagEVO预装型试剂板（YMR91001-A/B/C）如何操作？适配哪些型号的仪器？

A：MagEVO预装型试剂板为用户提供了即开即用的便捷体验：

1. 产品形式：预装型A/B/C分别为32T/48T/96T规格的预分装板式试剂，磁珠、裂解液、洗涤液、洗脱液均已按程序排布于96孔板中，用户仅需加入预处理后的样本即可上机运行。

2. 适配仪器：本产品经过广泛验证，兼容市面上主流的自动化核酸提取仪，包括但不限于：雅礼生物YALEPIC Pure 系列自动化提取仪、Thermo Scientific KingFisher系列、天隆、博日、奥盛等品牌的磁棒式核酸提取仪。具体运行程序可联系雅礼生物技术支持获取。

3. 操作要点：使用预装型试剂板前，请撕除板封膜，检查各孔试剂量是否完好。样本裂解后转移至样本孔中，按照仪器程序设置运行。运行结束后，收集洗脱孔中的RNA溶液，分装保存于-80℃或直接用于下游实验。

Q6：MagEVO磁珠法RNA提取试剂盒与传统的TRIzol/氯仿法相比，有何优势？

A：与传统TRIzol/氯仿法相比，MagEVO磁珠法具有以下显著优势：

因此，对于追求操作效率、实验安全性及高通量处理的实验室，MagEVO磁珠法RNA提取试剂盒是更理想的选择。

Q7：MagEVO RNA提取试剂盒的保存条件是什么？不同组分是否可以长期常温保存？

A：本试剂盒各组分保存条件存在差异，请严格按照以下要求执行：

1. -20℃保存组分：DNase I 及10× DN Buffer。上述组分低温运输到达后，若无立即使用计划，请置于-20℃冰箱保存。DNase I溶解后建议分装成单次用量，避免反复冻融导致酶活下降。

2. 室温保存组分：磁珠悬液、裂解液、洗涤液、洗脱液等其他所有组分，可在10~30℃室温条件下长期保存。请避免高温（>40℃）或阳光直射环境。

3. 特别提示：试剂盒开封后，请按上述条件分类保存各组分，并在标签标注的有效期内使用完毕。长期未使用的DNase I若出现沉淀或活性下降，建议更换新批次。

Q8：对于脂肪含量较高的动物组织（如脂肪组织、脑组织等），MagEVO试剂盒是否适用？有何特殊操作建议？

A：MagEVO动物细胞/组织总RNA提取试剂盒对常规组织样本均具有良好的提取效果。对于脂肪含量较高的特殊样本，建议采取以下优化措施：

1. 增加裂解液用量：脂肪组织中的脂质成分可能干扰磁珠对核酸的结合效率。建议在15~25 mg脂肪组织中，将裂解液用量增加至500~600 μL（常规为400 μL）。

2. 加强裂解操作：脂肪组织建议在液氮中充分研磨至粉末状，或使用手持匀浆器在裂解液中高速匀浆30~60秒，确保组织完全分散。

3. 增加洗涤次数：磁分离后，可额外增加一次洗涤液I洗涤步骤，以更彻底地去除残留脂质成分。

4. 确保裂解液充分浸润：裂解时确保裂解液完全覆盖组织粉末，充分混匀后室温裂解5~10分钟，必要时可于65℃加热5分钟辅助裂解。

Q9：提取的RNA用于NGS（二代测序）文库构建时，对RNA质量有哪些要求？MagEVO产品能否满足？

A：二代测序对RNA起始质量有较高要求，主要体现在以下方面：

1. 纯度要求：A260/A280比值应在1.9~2.1之间，A260/A230比值≥2.0，无胍盐、乙醇、洗涤剂等残留。MagEVO试剂盒提取的RNA经严格洗涤后，无上述污染物残留，完全符合NGS文库构建要求。

2. 完整性要求：RIN值（RNA Integrity Number）应≥8，电泳图中28S条带亮度约为18S条带的2倍。MagEVO产品提取RNA的RIN值经Agilent Bioanalyzer检测可达8.5以上。

3. 无DNA残留：微量DNA残留可能被错误计入转录本定量结果。本产品内置DNase I消化，可有效消除gDNA污染。

4. 推荐用量：NGS建库通常需要100 ng~1 μg的总RNA，对应于本产品推荐的细胞/组织用量范围。请根据具体建库试剂盒要求调整样本起始量。

Q10：使用MagEVO RNA提取试剂盒时，磁珠的长期保存和使用稳定性如何？磁珠是否容易聚集沉淀？

A：MagEVO系列产品使用的超顺磁性纳米磁珠经过特殊表面修饰和悬浮配方优化，具有以下特性：

1. 长期稳定性：在推荐的10~30℃室温保存条件下，磁珠悬液可稳定保存12个月以上。使用前请充分涡旋震荡或颠倒混匀，确保磁珠均匀分散后取用。

2. 抗聚集性能：本产品使用的磁珠表面亲水性修饰与悬浮稳定剂配方，可有效防止磁珠在长期静置后的不可逆聚集。如发现轻微沉降，混匀后即可恢复均一悬浮状态。

3. 使用注意事项：请勿将磁珠悬液置于冷冻环境，冷冻会破坏磁珠悬浮稳定性，导致磁珠聚集。每次取用前必须充分混匀，取用后立即盖紧瓶盖，避免灰尘和RNase污染。