粪便 RNA 保存管如何在采样瞬间抑制 RNase?4–37℃ 常温保存方案
YALEPIC® 样本采集与稳定化系列 · 粪便 RNA 篇
粪便RNA保存管:抢在降解前按下暂停键
DNA 记录的是”有谁“,RNA 记录的是”谁在干活、干得多快“——后者只有几十分钟的窗口期。粪便中的 RNase 含量高、mRNA 半衰期短,一旦离体,表达谱就开始被改写。YALEPIC® YS21062 粪便RNA保存管采用水溶性 RNA 保护配方,采样即刻抑制 RNase 活性,在 4~37℃ 常温稳定保存粪便 RNA 达 7 天,无需液氮与干冰,让居家采样与大规模队列研究真正可行。
⏱ 60 秒速览:它解决的是什么问题
✅ 常温宽温稳定:4~37℃ 无需冷链、无需干冰,粪便 RNA 常温稳定保存 7 天(验证条件下可达 14 天,以说明书为准);
✅ 水溶性 RNA 保护配方,采样后即刻渗透并抑制粪便中高浓度 RNase 的降解活性,锁定菌群 RNA 与宿主脱落细胞 RNA 的原始表达谱;
✅ RNA 完整性 RIN 一般不低于 7,达到宏转录组研究常用的质量门槛,电泳可见清晰 18S/28S(真核)或 23S/16S(原核)条带;
✅ 抑菌灭活双重防护:抑制杂菌与真菌生长、快速灭活病毒,样本符合 UN3373 B 类生物物质运输要求;
✅ 独立无菌包装、开箱即采,螺旋加厚密封管体防渗漏、防外源污染,便携适合野外采样与异地送检;
✅ 下游兼容广:RT-qPCR、RNA-seq、宏转录组学、基因芯片与微生物多样性分析;
✅ 提供 5 ml 与 30 ml 即用型采集管(货号 YS21062,25 支/盒),附带采样勺,支持定制标签与包装。
🧬 先分清一件事:保存 DNA 和保存 RNA,不是一回事
很多实验室把”粪便 DNA 保存”的经验直接套到 RNA 上,结果在转录组环节翻车。根本原因在于,两者要保的东西性质完全不同:
| 维度 | 粪便 DNA 保存 | 粪便 RNA 保存 |
|---|---|---|
| 记录的信息 | “有谁”——群落的物种组成与比例 | “谁在干活”——此刻的基因表达活性 |
| 时间尺度 | 相对稳定,变化以天计 | 瞬时状态,mRNA 半衰期以分钟计 |
| 主要风险 | 发酵与需氧暴露导致组成比例漂移 | RNase 降解 + 离体应激,导致完整性崩溃与表达谱改写 |
| 失败的典型表现 | 某些菌门相对丰度虚高或虚低 | RIN 掉到 7 以下、rRNA 占比飙升、差异表达结果不可重复 |
| 质控核心指标 | 得率、OD260/280、群落结构一致性 | RIN、OD260/230(反映共提取抑制物)、表达谱相关性 |
一句话概括:DNA 保存要防的是”比例漂移”,RNA 保存要防的是”完整性崩溃 + 表达谱改写”的双重风险——后者的容错空间要小得多。
⚠ 粪便转录组的四道技术关卡
宏转录组(metatranscriptomics)能告诉你菌群”正在表达哪些功能”,是理解宿主-菌群互作的关键手段,但它的技术门槛远高于宏基因组。学界公认的四大障碍中,前两项都直接指向样本保存:
⏳
关卡 1 · mRNA 半衰期极短
细菌 mRNA 的半衰期以分钟计,是典型的”瞬时快照”。采样动作本身就会改变条件,若不在第一时间稳定化,测到的就不是体内的真实转录状态。
✂️
关卡 2 · 核酸酶含量高
粪便中富含核酸酶,且 RNase 结构稳定、耐热、不易失活。样本一旦离体而未加保护,降解即刻开始,这也是传统方案必须依赖液氮速冻或 -80℃ 冻存的原因。
🧪
关卡 3 · 抑制物共提取
胆盐、腐殖酸、多糖等抑制物会与 RNA 共提取,直接抑制逆转录与文库构建。质检时 OD260/230 偏低往往就是这类残留的信号。
🎯
关卡 4 · 细菌 mRNA 富集难
粪便总 RNA 中 rRNA 占比极高,mRNA 富集效率低会直接损失低丰度转录本。样本质量越差,rRNA 去除后的有效 reads 比例越低。
🕐 一条清晰的时间线:你到底有多少时间
综合已有研究:立即冷冻的样本 RIN 通常可保持在 7 以上;样本在室温放置 3~24 小时内,RNA 完整性尚可维持;但超过 24~48 小时,完整性会出现显著下降;更值得注意的是,冻存样本解冻 1 小时即可检测到明显降解。这意味着——转录组实验的胜负,往往在样本离体的头几个小时内就已决定,而”保存液是否在采样瞬间介入”,正是这条时间线上唯一可控的变量。
⚗ YS21062 的”化学速冻”:四层作用叠加
液氮速冻是转录组保存的金标准,但它需要设备、需要干冰、对居家采样几乎不可行。YS21062 的思路是用化学方式在采样瞬间”替代”速冻这一步:
💧
① 快速渗透
低粘度水溶性配方,可快速包覆各种性状粪便,包括稀便与水样便
🛑
② 抑制 RNase
即刻抑制粪便中高浓度 RNase 的降解活性,固定 RNA 分子
🦠
③ 抑菌 + 灭活
抑制杂菌真菌生长,快速灭活包膜病毒与部分无包膜病毒
🌡
④ 常温稳定
4~37℃ 稳定 7 天,抵实验室后转 -20℃ / -70℃ 可长期锁定
✅ 相比液氮 / 干冰方案
省去液氮罐、干冰与冷链物流成本,居家自采与普通快递即可完成交付,多中心队列与社区筛查的可行性显著提升。
✅ 相比”先冻存再解冻”的老流程
冻融本身就是降解高发环节,研究显示解冻 1 小时即可造成显著降解。常温稳定保存 + 一次成型的处理路径,反而更容易保住完整性。
📦 关键参数一览
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 货号 / 规格 | YS21062,25 支/盒(目录价 850 元,以实时报价为准);另提供 5 ml、30 ml 即用型采集管 |
| 保存原理 | 水溶性 RNA 保护配方,采样后即刻渗透并抑制高浓度 RNase 降解活性 |
| 保存温度与期限 | 加入样本后 4~37℃ 常温保存 7 天;抵达实验室后建议转 -20℃ 或 -70℃ 长期保存 |
| 稀便处理比例 | 建议保存液与粪便比例提高至 1:4 或 1:5(w/v),充分涡旋混匀 |
| RNA 质量 | RIN 一般 ≥ 7;电泳可见清晰 18S/28S(真核)或 23S/16S(原核)条带 |
| 运输合规 | 常温运输保存,符合 UN3373 B 类生物物质运输要求(须使用密封防漏管并规范标识) |
| 兼容下游 | RT-qPCR、RNA-seq、宏转录组学、基因芯片、微生物多样性分析;兼容主流粪便 RNA 提取试剂盒 |
🖐 五个决定 RNA 质量的操作细节
1️⃣
立即入管
采样后尽快投入保存液,缩短常温暴露窗口
2️⃣
比例恰当
稀便/水样便提高至 1:4~1:5(w/v),充分涡旋混匀
3️⃣
一次分装
混匀后即分装为单次用量管,避免反复开盖与冻融
4️⃣
及时转冻
抵达实验室后转 -20℃ 或 -70℃,长期锁定完整性
5️⃣
抑制物控制
关注 OD260/230,必要时增加洗涤以去除胆盐等共提取物
🎯 哪些研究最需要它
🧬
宏转录组学
菌群原位功能活性
🤝
宿主-菌群互作
脱落细胞 RNA 分析
🧪
RT-qPCR
功能基因表达定量
🏥
早筛标志物
结直肠癌相关研究
🔋
菌群代谢功能
通路与酶活表达
🐁
模式动物
小鼠/大鼠粪便样本
🏠
居家自采
队列研究与随访
🦠
肠道病毒研究
RNA 病毒检测分析
❓ 关于 YS21062 的高频问题(FAQ)
Q1:粪便 RNA 保存液和直接用液氮速冻有什么区别?
液氮速冻能瞬间停止酶活性,被视为转录组保存的金标准,但运输必须全程干冰,成本高且对居家采样不友好。本保存液在室温实现”化学速冻”效果:稳定保存 7 天(验证条件下可达 14 天,以说明书为准),可直接快递至中心实验室再转入 -80℃。宏转录组数据显示两种方式的下游表达谱高度相似,但物流便利性差异显著。
Q2:稀便或水样便如何处理才能保证 RNA 不降解?
稀便含水量高,建议适当提高保存液与粪便的比例,如 1:4 或 1:5(w/v),并充分涡旋混匀。若样本量较少,可直接收集到预装保存液的采集管中,液体保护剂能快速包裹并保护游离 RNA。水样便同样可在室温条件下稳定保存。
Q3:采集后长时间放置会诱导细菌基因表达变化吗?
通过比较新鲜冻存样本与室温放置 7 天的保存液样本进行宏转录组测序,PCoA 与差异表达基因分析均显示两组高度相似(相关性 >0.95),表明保存液能有效抑制菌群体外转录,避免”离体应激”造成的表达偏移。
Q4:保存液对下游 TRIzol 法提取的兼容性如何?
兼容。建议将粪便-保存液混悬物离心、弃上清后再用 TRIzol 试剂裂解;若直接加入 TRIzol,高含量保存液成分可能轻微影响相分离效率,增加一次 PBS 洗涤即可消除影响。更推荐使用硅胶柱或磁珠法粪便 RNA 提取试剂盒,可获得更高纯度与产量的 RNA。
Q5:提取的 RNA 质量有保证吗?能做测序吗?
常规电泳可见清晰的 18S 与 28S rRNA 条带(真核样本)或 23S/16S 条带(原核样本),RIN 值一般不低于 7,达到宏转录组研究常用的质量门槛。已有多个粪便宏转录组建库测序项目应用,rRNA 去除后有效 reads 比例与基因覆盖度可满足高水平研究需求。
Q6:保存液能否灭活病毒?运输是否合规?
保存液可快速灭活大部分包膜病毒与部分无包膜病毒,显著降低生物安全风险,样本符合 UN3373 B 类生物物质运输要求。须使用密封防漏采集管,外包装按生物安全规范标识;常温快递寄送无特殊要求。
Q7:可以反复从同一管保存液中取部分样本提取 RNA 吗?
不建议。反复开盖与冻融会引入水分、氧化及微生物污染,物理扰动还可能激活残留核酸酶。建议在第一次混匀后即分装为单次用量管,-80℃ 密封冻存,随用随取。
Q8:提供哪些规格的采集管?
提供 5 ml 与 30 ml 即用型采集管,内装已灭菌过滤的保存液,附带采样勺,适用于不同体积的粪便样本,并支持定制标签与包装,具体可咨询销售或授权经销商。
Q9:与常规的粪便 RNA 稳定剂相比,优势在哪里?
市面上部分产品为高粘度凝胶状,不易浸润稀便;另一些需 -20℃ 保存与运输。本产品为低粘度液体,对各种性状粪便均能快速包覆,真正实现常温运输,且更具成本优势;对比实验显示其对宏转录组的转录诱导效应更低,RNA 产量与完整性表现良好。
🧾 数据声明
文中保存期限、RIN、比例与规格等数值引自官网产品说明与官方 FAQ,属参考口径;实际性能请以产品随附 COA、说明书及第三方检测报告为准。目录价以官网及渠道实时报价为准。
🧪 使用边界
本产品为科研用样本采集与保存耗材,不用于疾病诊断或治疗。涉及人体样本的研究应通过伦理审查并取得知情同意;感染性样本的操作与运输须遵守所在机构的生物安全规范及相关要求。
把”此刻正在表达什么”,原样带进实验室
YALEPIC® 粪便RNA样本保存管 · 货号 YS21062 · 25 支/盒(另有 5 ml / 30 ml 规格)
适配宏转录组、宿主-菌群互作研究、队列随访与居家自采项目
雅礼(江苏)生物科技有限公司 · 国家高新技术企业 · YALEPIC®
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