磁珠法 cfDNA 大量提取试剂盒如何处理大体积样本？1–5 mL 上样方案
YALEPIC® MagEvo 核酸提取系列 · 游离 DNA 篇
cfDNA大量提取试剂盒：体积，就是灵敏度
血浆里的 cfDNA 少到什么程度？健康人通常只有每毫升几纳克——1 ng 人类基因组 DNA 约等于 300 个单倍体基因组当量，这意味着上样体积直接决定你能”数到多少分子”，也就直接决定了低频突变能不能被看见。YALEPIC® YM26005 磁珠法游离 DNA 大量提取试剂盒专为 1~5 ml 大体积血浆、血清、羊水、尿液设计，改性纳米超顺磁珠定向优化低分子量核酸吸附，高效捕获 100~300 bp 短片段。
⏱ 60 秒速览：它解决的是什么问题
✅ 大体积专用：标准适配 1~5 ml 血浆、血清、羊水、尿液等无细胞体液，满足大样本量富集需求；
✅ 定向捕获 100~300 bp 短片段 cfDNA，覆盖度好，官方资料称测序无偏好性（以实际验证数据为准）；
✅ 改性纳米超顺磁珠 + 定制化缓冲液系统，提高 cfDNA 回收率，A260/A280 接近 1.8~2.0，下游抑制物残留少；
✅ 产物无基因组 DNA 污染，纯度达标、批次差异小；
✅ 全程无酚 / 氯仿 / β-巯基乙醇等有毒有机溶剂，温和裂解、操作安全；
✅ 常温运输、10~30℃ 室温避光保存，无需冷链；
✅ 手动与自动化双模式，另提供 A/B/C 三款预装型即用试剂，可直接上机；
✅ 下游覆盖 qPCR、NGS 建库、无创产前筛查、液体活检、肿瘤突变检测与甲基化分析。
🧮 液体活检的第一道数学题：体积决定灵敏度
做 cfDNA 检测，很多人先纠结”用什么测序深度”，却忽略了更上游的约束——你手里到底有多少个模板分子。这个数字由两个量相乘决定：血浆体积 × cfDNA 浓度。
📉
浓度低是常态
文献报道，健康人与患者血浆 cfDNA 浓度多在每毫升数纳克量级（不同肿瘤类型差异显著，可从低个位数到数十 ng/ml）。浓度越低，同样体积能”数到的分子”越少。
⚖️
换算关系很关键
单倍体人类基因组约 3.3 pg，1 ng 基因组 DNA ≈ 300 个单倍体基因组当量（GEq）。所谓”低频检出”，本质是在成千上万个野生型分子里找出那几个突变分子。
⚠️
体积不足＝假阴性
已有研究指出，上样体积不足是假阴性结果的主要来源之一；若体积太小，突变分子数低于检测阈值，即使患者肿瘤分数理论上可检出也会被漏掉。
| 上样体积 | cfDNA 总量* （按 5 ng/ml 估） |
约合单倍体基因组当量 | 理论检出下限（单分子计） |
|---|---|---|---|
| 1 ml | 约 5 ng | 约 1,500 GEq | 约 1/1500 ≈ 0.07% |
| 2 ml | 约 10 ng | 约 3,000 GEq | 约 1/3000 ≈ 0.03% |
| 5 ml | 约 25 ng | 约 7,500 GEq | 约 1/7500 ≈ 0.013% |
* 表中为按”单倍体基因组约 3.3 pg、1 ng ≈ 300 GEq”换算的理论估算值，用于说明量级关系；实际回收受个体浓度、提取效率与洗脱体积影响，且真实检出限还取决于测序深度与错误率（例如要以高概率检出 0.1% VAF，通常需要极高的有效覆盖深度）。请以实际验证数据为准。
🎯 结论：Maxi 不是”多提一点”，而是把检出下限往下推
把上样体积从 1 ml 提到 5 ml，可供分析的模板分子数理论上变成 5 倍，低频突变的理论检出下限随之下降近一个数量级。这正是”大量提取”类试剂盒存在的意义——在肿瘤早筛、MRD（微小残留病灶）监测、NIPT 这些”分子数极少、错不起”的场景里，体积就是灵敏度本身。
🧬 cfDNA 的两个特殊性：又短又少
除了浓度极低，cfDNA 还有第二个让人头疼的属性——碎片化。它主要来源于细胞凋亡，被核小体单位切割，因此长度集中在几百 bp 以内（主峰约在核小体单位附近），呈典型的短片段分布。
✂️
短片段更容易在纯化中”走失”
常规的醇沉淀或部分硅胶体系对超短片段的结合效率会明显下降，越短的片段越容易在洗涤与洗脱环节流失。结果是：总量看着够，但短片段占比失真，直接影响文库转化效率与片段分布分析。
🎣
YM26005 的应对：定向优化低分子量吸附
依托改性纳米超顺磁珠与定制化缓冲液系统，针对 cfDNA 短片段特性深度优化吸附与洗脱体系，高效捕获 100~300 bp 区间的短片段，覆盖度好、测序无偏好性，最大程度保留小片段完整性。
⚙ 把体积放大到 5 ml，会撞上四个工程问题
“多加点样本”听起来简单，但把 1 ml 流程等比放大到 5 ml，几乎每个环节都要重新平衡。这也是为什么大体积 cfDNA 提取不能拿常规试剂盒硬套：
🧪
① 裂解与结合体系要同步放大
缓冲液配比、磁珠用量、孵育时间都需要与样本体积匹配；配比失衡会导致结合不充分或磁珠浪费，表现为得率不升反降。
💧
② 洗脱体积与终浓度的两难
增大洗脱体积能提高回收量，却稀释终浓度；体积太小则回收不全。对低浓度 cfDNA 而言，终浓度往往比总量更关键，需要按下游要求权衡。
🩸
③ 基因组 DNA 污染会被放大
采血后若放置过久，白细胞裂解释放的 gDNA 会稀释 cfDNA 比例，样本体积越大、累积影响越明显。专用采血管 + 及时分离血浆是前提。
⏱
④ 操作时长与批间一致性
大体积手工操作耗时更长、个体差异更大；这也是预装型试剂 + 自动化工作站的价值——把”人”这个变量从流程里拿掉。
🧊 前处理：两步离心是被低估的一步
行业常用做法是先低速离心（约 800~1,600 × g、10 分钟、4℃）去除血细胞，再取上清高速离心（约 14,000~16,000 × g、10 分钟、4℃）进一步去除残余细胞与碎片，确保血浆真正”无细胞”。采血后应尽快处理（通常建议数小时内），若无法及时分离，应使用细胞稳定型专用采血管以延缓白细胞裂解。
📋 参数与四档规格
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 样本体积 | 1~5 ml 血浆、血清、羊水、尿液等无细胞体液 |
| 目标片段 | 高效捕获 100~300 bp 短片段 cfDNA |
| 纯度 | A260/A280 接近 1.8~2.0，无基因组 DNA 污染 |
| 安全性 | 无酚、氯仿、β-巯基乙醇等有毒有机溶剂 |
| 保存运输 | 常温运输；10~30℃ 室温避光密封，避免高温暴晒与冷冻 |
| 主要组分 | CDL Buffer、Wash Buffer CDZ、Wash Buffer CFGB、Magbeads MN、Proteinase K、Nuclease-free ddH₂O |
| 货号 | 规格 | 形态 | 推荐场景 | 目录价 |
|---|---|---|---|---|
| YM26005-A | 24T（预装 A 型） | 预装 | 小体量试用、方法验证 | 910 元 |
| YM26005 | 48T | 散装 | 常规手动提取 | 1540 元 |
| YM26005-B | 48T（预装 B 型） | 预装 | 中等通量自动化 | 1785 元 |
| YM26005-C | 96T（预装 C 型） | 预装 | 高通量批量上机 | 3500 元 |
💧 适用样本与注意点
🩸
血浆
液体活检首选
需及时分离
🧴
血清
注意凝血带来的
细胞来源 DNA
🤰
羊水
去蛋白干扰
产前检测场景
🧪
尿液
无创取样
需去尿杂质
🧠
脑脊液
中枢肿瘤
体积常较有限
🦠
病原游离核酸
微生物 cfDNA
感染检测
不同体液的 cfDNA 浓度差异很大，所需体积也随之变化：浓度越低，越需要更大的上样体积；部分体液（如某些中枢神经系统肿瘤的脑脊液）中肿瘤来源 DNA 相对富集，所需体积可能小于血浆——这正是”体积—浓度—灵敏度”三者需要一起算的原因。
🔬 下游适配哪些实验
📚
NGS 建库测序
短片段友好、无扩增偏好
📈
qPCR 荧光定量
特定序列定量
🤰
无创产前筛查
胎儿游离 DNA 分析
🎯
肿瘤突变检测
低频突变与 MRD
🧩
甲基化分析
组织溯源与早筛
🧬
基因分型
SNP 与拷贝数分析
📈 得率优化与产物保存
1. 用对采血管并尽快分离。建议使用 cfDNA 专用采血管，采血后尽快分离血浆，避免白细胞裂解释放 gDNA 污染——这是”产量低”最常见的隐性原因，也是纯度虚高的来源。
2. 把体积提上去。起始体积可适当提升至 3~5 ml；在浓度偏低或追求低频检出时，这是最直接有效的手段。
3. 严格按步骤操作。裂解与结合步骤按说明书执行，磁珠充分混匀孵育，避免磁珠残留或结合不充分。
4. 洗脱体积要权衡。小幅增加洗脱体积可提升回收量，但会稀释终浓度，需按下游要求决定。
5. 产物保存分场景。洗脱后的 cfDNA 建议短期 4℃ 保存，长期 -20℃ 分装冻存，避免反复冻融，以最大程度维持核酸完整性。
6. 定量方法要选对。低浓度 cfDNA 建议采用荧光法等更灵敏的定量方式评估投入量，而非仅依赖紫外吸光度。
❓ 关于 YM26005 的高频问题（FAQ）
Q1：本试剂盒最大支持多少体积的样本起始量？
标准适配 1~5 ml 血浆、血清、羊水、尿液等无细胞体液，是大体积 cfDNA 提取专用试剂盒，满足大样本量富集需求。
Q2：试剂盒提取的 cfDNA 适合做 NGS 建库测序吗？
完全适配。产品针对短片段 cfDNA 定向优化，小片段占比高、无扩增偏好、核酸纯度高、无基因组 DNA 污染，可直接用于 NGS 文库构建、高通量测序及液体活检实验。
Q3：可以用于全自动核酸提取仪吗？有适配方案吗？
支持手动提取与全自动高通量工作站双模式；同时提供 A/B/C 三款预装型试剂，无需手动配置体系，直接适配主流自动化提取设备，批量处理更高效。
Q4：尿液、羊水样本可以用这款试剂盒提取 cfDNA 吗？
可以。试剂盒缓冲液体系兼容血浆、血清、羊水、尿液等多种无细胞体液，能有效去除尿液杂质、羊水蛋白干扰，稳定纯化高质量游离 DNA。
Q5：试剂盒运输和保存需要冷藏冷冻吗？
无需冷链。支持常温运输，日常 10~30℃ 室温避光密封保存即可，避免高温暴晒与冷冻，仓储和使用更便捷。
Q6：提取 cfDNA 产量偏低是什么原因？如何提升得率？
① 建议使用 cfDNA 专用采血管，采血后尽快分离血浆，避免白细胞裂解释放 gDNA 污染；② 可适当提升样本起始体积至 3~5 ml；③ 严格按说明书进行裂解与结合步骤，磁珠充分混匀孵育；④ 可小幅增加洗脱体积以提升回收量。
Q7：洗脱后的 cfDNA 可以长期保存吗？
洗脱后的 cfDNA 建议短期 4℃ 保存，长期需置于 -20℃ 分装冻存，避免反复冻融，以最大程度维持核酸完整性。
Q8：预装型和普通款试剂盒有什么区别？
普通款为散装试剂，需自行配置体系；A/B/C 预装型为即用型预制试剂，孔板预分装，直接上机使用，节省实验准备时间，更适合高通量自动化实验。
Q9：提取过程会用到酚、氯仿等有毒试剂吗？
不会。试剂盒采用温和裂解磁珠纯化法，全程无酚、氯仿、β-巯基乙醇等有毒有机溶剂，实验安全无污染。
Q10：与普通 cfDNA 提取试剂盒相比，大量提取版适合什么场景？
cfDNA 在血浆中浓度很低，健康人通常仅每毫升数纳克量级，而低频突变的检出能力取决于可供分析的总模板分子数。因此当目标是低频突变、MRD 监测、NIPT，或起始样本浓度偏低时，应尽量提高上样体积（如 3~5 ml）；若仅需常规 qPCR 定量，或样本浓度较高、体积充足，普通版即可胜任。
🧾 数据声明
文中样本体积、片段范围、纯度与保存条件引自官网产品说明与官方 FAQ；基因组当量换算表为按公开换算关系的理论估算，用于说明量级，实际回收与检出限受个体浓度、提取效率、测序深度与错误率影响。实际性能请以产品随附 COA、说明书及第三方检测报告为准，目录价以实时报价为准。
⚠ 使用边界
本产品为科研用核酸提取试剂，不用于疾病的诊断或治疗；用于临床检测须遵守所在国家与地区关于体外诊断试剂的法规与注册要求。涉及人体样本的研究应通过伦理审查并取得知情同意。
把能数到的分子数，提到检测需要的水位
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