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血液直扩PCR裂解液选购指南|YEM41030 全血直扩方案

发布时间:2026-09-22

YALEPIC® 核酸前处理系列 · 血液直扩篇

血液直扩PCR裂解液:删掉提取这一步之后

全血里躺着血红素、IgG、乳铁蛋白与抗凝剂,它们不会因为你不做提取就消失。YALEPIC® 血液直扩PCR/qPCR裂解液(YEM41030)用自研配方把抑制剂就地中和,让裂解后的全血原液直接作为 PCR / qPCR 模板——本文讲清它省掉了什么、又留下了什么。

⚡ 2~3 步操作
⏱ 5~15 分钟
🧬 免 DNA 纯化
🌡 常温储运 12 个月

⏱ 60 秒速览:它解决的是什么问题

免 DNA 纯化:全血裂解后裂解产物直接作为 PCR / qPCR 模板,省去抽提、沉淀、纯化全流程耗材与工时;
操作步骤从十余步压缩至 2~3 步,样本处理时间从 1~2 小时缩短到 5~15 分钟
针对性中和血红素、抗凝剂残留等抑制物,降低因抑制剂残留导致的假阴性风险;
四类血液样本通用:新鲜抗凝血(2 小时内)、4℃ 短期储存(≤7 天)、-20℃/-80℃ 冻存血、商用干血斑卡干血渍;
✅ 双体系兼容:SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法均可;
推荐模板比例为反应体积的 5%~10%(50 μL 体系加 2.5~5 μL 全血),可优化至 5%~20%,不建议超过 30%;
✅ 适配 96 孔板与自动化移液工作站,可对接高通量流程;
✅ 规格:YEM41030-20(20 mL)/ YEM41030-100(100 mL),室温 15~25℃ 避光保存,未开封有效期 12 个月。

🩸 全血里到底有什么在拦着 PCR

做直扩之前,得先知道对手是谁。血液是公认最难直接扩增的样本之一,因为里面同时存在五六种作用机制不同的抑制物,它们不从同一个方向攻击反应体系:

🟥

血红素 / 血红蛋白

来源:红细胞裂解释放

机制:直接抑制聚合酶活性;部分荧光基团还会被淬灭,导致信号偏低。

🟡

免疫球蛋白 IgG

来源:血浆

机制:结合单链 DNA 或聚合酶本身,典型表现是 Ct 值整体后移——这在 qPCR 里最容易被误读成”模板太少”。

🔵

乳铁蛋白

来源:中性粒细胞及分泌物

机制:螯合 Mg²⁺ 并直接抑制聚合酶。用能竞争金属离子的添加物可以削弱它的影响。

🟣

抗凝剂残留

来源:采血管

机制:EDTA、柠檬酸钠会螯合 Mg²⁺;肝素则是公认抑制 PCR 的抗凝剂,采血时能避则避。

🟢

细胞碎片与多糖

来源:裂解后的细胞残骸

机制:物理阻碍聚合酶推进,同时抬高体系黏度。裂解后离心取上清就是冲它去的。

⚪️

白细胞 DNA 背景

来源:有核血细胞

机制:本身不是毒物,但会稀释靶标比例——检测低频靶标时,背景基因组越多越吃亏。

一个让人清醒的数字

< 0.004%

公开研究显示:某些常规 Taq 聚合酶在全血浓度低于 0.004%、或存在微量血红素时,就可能被完全抑制。换算一下——25 μL 反应体系里只要混进不足 1 nL 的全血,反应就可能完全不工作。
这就是为什么”把血直接加进去”从来不是一件顺手的事,也是直扩裂解液存在的理由。

🧭 说”免提取”之前,先看清它是哪一种

“直接扩增”不是一个动作,而是一组做法。它们的稀释倍数、可投入体积、抑制物处理能力相差很大,用错了就会觉得”直扩不稳定”:

策略 稀释倍数 典型最大投入量 抑制物处理
简单稀释 1:10 ~ 1:40 2~5 μL 几乎不处理,只靠稀释把抑制物降到阈值以下
热裂解 + 稀释 1:20 ~ 1:50 1~2 μL 加热变性部分蛋白,比纯稀释稳一些
化学裂解 + 稀释(本产品思路) 1:10 ~ 1:30 1~5 μL 配方内针对性中和抑制物,兼顾简便与稳定
裂解 + 结合洗涤 1:1 ~ 1:5 10~50 μL 去除更充分,但已经相当于一次微型提取

上表为公开文献与行业资料的整理,用于说明策略分层,具体参数随体系而异。

⚖️ 删掉提取,省掉了什么、又留下了什么

这是全篇最该想清楚的一件事。免提取不是一个”更快”的选项,而是一次代价交换

省掉的,不只是时间

① 一整类失败模式。提取环节的移液损失、洗脱不完全、柱子堵塞、批间差异——这些不确定性随步骤一起被删掉了。步骤越少,变量越少。

② 交叉污染的机会。开盖、转管、洗脱都是气溶胶污染的入口。直扩把样本始终留在同一个管里。

③ 对操作者的技术要求。2~3 步的操作,让不同人、不同批次的重复性更容易对齐,这对多中心项目尤其重要。

留下的,是抑制物负荷

① 抑制物守恒。血红素、IgG、乳铁蛋白、抗凝剂不会因为跳过提取就消失,它们只是从”被柱子截留”变成”跟着模板一起进反应管”。

② 灵敏度天花板。投入体积受抑制物约束(一般不超过反应体积 30%),可用的模板量比纯化 DNA 少,低拷贝靶标检出会吃亏。

③ 定量精度打折。Ct 值受抑制程度影响,做绝对定量或需要严格比较表达量时,纯化模板仍更可靠。

顺带说一句反面观点:行业内也有资料指出,一些免提取流程为了补齐裂解效果,会追加离心、高温加热甚至珠磨等步骤,实际动手时间可能并不比自动化提取短,而灵敏度与重复性的收益也有限。这不是要否定直扩——而是提醒你:选直扩的理由应该是”这类样本本来就适合”,而不是”它听起来更快”。

📦 YALEPIC® 血液直扩 PCR/qPCR 裂解液(YEM41030)

规格与储运

货号:YEM41030-20(20 mL)/ YEM41030-100(100 mL)

目录价:620 元(20 mL)/ 1800 元(100 mL)

保存条件:室温 15~25℃ 避光,避免反复开盖与长时间高温暴露

有效期:未开封 12 个月;开封后室温避光,可 4℃ 长期存放,用前回温混匀

运输:室温运输,无需冰袋或干冰

性能与兼容

原理:化学裂解血细胞并释放基因组 DNA,配方内中和血液内源与抗凝剂残留抑制物

操作步骤:2~3 步;处理时间 5~15 分钟(原流程 1~2 小时、十余步)

模板比例:推荐反应体积的 5%~10%,可优化至 5%~20%,不超过 30%

qPCR 体系:兼容 SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法

自动化:支持 96 孔板与自动化移液工作站

价格以官网实时报价为准;性能数据以产品随附 COA 或第三方检测报告为准。E8

🧪 四类血液样本,一套流程

实际项目里,样本到手的形态往往不统一。这四类都能直接进流程,是它比较实用的一点:

🩸

新鲜抗凝血

采血后 2 小时内处理;EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝均可

🧊

4℃ 短期储存血

4℃ 存放不超过 7 天的样本,裂解效果稳定

❄️

-20℃ / -80℃ 冻存血

避免反复冻融,以免 DNA 片段化影响长片段扩增

📄

干血斑卡

商用干血斑采集卡上的干血渍样本,适合邮寄与人群筛查

⚙️ 操作:真的只有几步

1️⃣

加样裂解

按推荐比例将全血加入裂解液,充分混匀并孵育完成裂解。

2️⃣

短离心去碎片

3000~5000 rpm 离心 2~3 分钟,取上清,避免细胞碎片干扰扩增体系。

3️⃣

取上清作模板

按 5%~10% 比例加入 PCR/qPCR 体系,无需再纯化。

4️⃣

上机扩增

按常规程序运行;首次使用某体系时建议先做预实验确定最佳投入量。

🔧 Ct 值飘高或扩增不出来,先查这五条

现象 可能原因 处理方向
整体 Ct 后移 抑制剂负荷偏高(溶血严重、保存不当的样本最常见) 降低血液模板比例,例如从 10% 降到 5%
扩增效率低、曲线抬头晚 裂解不充分:血样量偏大或孵育时间不足 按推荐比例加入裂解液,确保充分孵育与混匀
非特异性条带增多 引物按纯化模板设计,未考虑粗样本中的残留抑制物 换用经直扩体系验证的引物
低丰度靶标检出不到 模板投入量偏低、靶标拷贝数少 适当增加投入量并优化循环参数;若仍不足,考虑改用纯化模板
长片段扩增失败 冻存样本反复冻融导致 DNA 片段化 冻存血分装保存、避免反复冻融;长片段优先用新鲜样本

🎯 哪些场景最划算

🧬 基因分型与 SNP 检测:样本量大、靶标明确,直扩优势最直接

🧫 转基因与品系鉴定:鼠尾、耳组织等替代场景,快速出结果

🦠 病原体核酸检测:载体筛查、快速初筛的常规手段

👶 遗传病筛查与人群研究:干血斑邮寄 + 常温运输,现场采样友好

🔍 法医与身份鉴定:微量、降解样本的快速初步分析

高通量筛查中心:96 孔板并行裂解,对接自动化全流程

🚧 什么时候,建议你还是做提取

这部分同样重要。直扩是一件好工具,但它有明确的能力边界:

🚫 低拷贝靶标检测——例如血液中痕量病原体载量监测。投入体积被抑制物约束,模板量不够就是不够。

🚫 需要绝对定量或严格比较表达量——残留抑制物会让 Ct 值产生偏移,定量精度不如纯化模板。

🚫 长片段扩增与建库类应用——纯化过程能去掉的部分干扰,直扩无法替代。

🚫 需要长期留存核酸样本——裂解产物适合当场扩增,不适合作为长期归档的核酸来源。

🚫 多重 PCR 中靶标数量很多——体系对抑制物更敏感,需要更谨慎地验证。

一句话判断:靶标”够多、够短、只需定性” → 直扩合适;靶标”很少、很长、需要定量” → 老实做提取。

❓ 常见问题

Q1:什么是血液直扩 PCR 裂解液?和传统 DNA 提取有什么不同?

它是一种专门用于全血样本的化学裂解试剂,可在不进行 DNA 纯化的前提下裂解血细胞并释放基因组 DNA,裂解产物直接作为 PCR/qPCR 模板。相比硅胶膜离心柱法、酚氯仿抽提法,它不需要有机溶剂和离心柱耗材,操作步骤从十余步减少至 2~3 步,样本处理时间从 1~2 小时缩短至 5~15 分钟,同时降低了样本交叉污染风险。

Q2:可以用于哪些类型的血液样本?

兼容新鲜采集的抗凝血(EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝均可)、4℃ 短期储存(不超过 7 天)的血液、-20℃ 或 -80℃ 长期冻存的血液,以及商用干血斑采集卡上的干血渍样本。

Q3:裂解后的样品还需要进一步处理吗?

不需要额外纯化。建议裂解后短暂离心(3000~5000 rpm,2~3 分钟)取上清用于扩增,以避免血细胞碎片对扩增体系造成物理干扰。

Q4:血液样本用量应该怎么控制?

推荐血液模板用量为 PCR 总反应体积的 5%~10%,例如 50 μL 体系中加入 2.5~5 μL 全血。难扩增靶标或低拷贝模板可在 5%~20% 范围内优化,但建议不超过总反应体积的 30%——比例过高会引入过多抑制剂,反而降低扩增效率。

Q5:怎么保存和运输?常温能放多久?

可在室温 15~25℃ 条件下保存和运输,无需冷链,未开封有效期 12 个月。开封后建议避光保存于室温,取用后及时旋紧瓶盖,避免污染与水分挥发。如需长期储存可置于 4℃,使用前恢复至室温并充分混匀。

Q6:能用于 qPCR 实时荧光定量吗?

可以。裂解产物可直接用作 qPCR 模板,兼容 SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法两种主流体系,可用于基因表达定量、病原体载量检测与 SNP 基因分型。建议首次使用某一特定体系时做预实验,确定最佳裂解条件与模板加入量。

Q7:为什么有时候扩增不出来或 Ct 值偏高?

常见原因有四类:① 血液抑制剂负荷过高,可适当降低血液模板比例;② 裂解不充分,需按推荐比例加入裂解液并保证充分孵育;③ 引物未经直扩体系验证,粗样本中的残留成分可能干扰引物结合;④ 靶标拷贝数过低,可增加模板投入量或优化循环参数。建议按此顺序逐一排查。

Q8:裂解液和血液直扩 PCR 试剂盒有什么区别?

裂解液只提供血液样本裂解功能,裂解后需配合常规 PCR Mix 或 qPCR Mix 完成扩增;血液直扩 PCR 试剂盒是一体化方案。已有成熟扩增体系的用户可单独购买裂解液;希望获得最优直扩效果,建议使用整套试剂盒。

Q9:兼容自动化高通量处理吗?

兼容。支持 96 孔板等自动化移液工作站,裂解步骤可在多孔板中并行处理,配合自动化 PCR/qPCR 系统可实现从样本裂解到结果检测的全流程自动化,适用于需要日处理成百上千份样本的高通量场景。

Q10:可以用于临床诊断吗?

本产品仅供科研使用,不可直接用于临床诊断。产品按医疗器械生产管理体系生产,每批次经质检放行。临床诊断用途需由客户自行完成相关注册与验证工作;雅礼生物可提供 OEM 定制与临床报证技术支持。

📋 数据声明

文中引用的文献数据(如抑制剂种类、抑制阈值、策略分层参数)整理自公开研究资料,用于说明技术原理;产品性能以随附 COA 或第三方检测报告为准;价格以官网实时报价为准。不同样本与扩增体系的表现存在差异,建议首次使用前进行预实验验证。

⚠️ 使用边界

本产品仅供科研使用,不用于疾病的诊断或治疗。涉及临床检测须遵守相关法规与注册要求。处理血液样本请遵循实验室生物安全规范,佩戴手套与实验服,按标准规程处理潜在感染性样本。

把提取这一步,换成更少的不确定性

YALEPIC® 血液直扩 PCR/qPCR 裂解液 · 货号 YEM41030
20 mL / 100 mL 两种规格 · 室温储运 12 个月 · 支持 96 孔自动化

👉 前往官网了解更多:www.yalibiotech.com

雅礼(江苏)生物科技有限公司 · 国家高新技术企业 · YALEPIC®

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