血液直扩PCR裂解液选购指南|YEM41030 全血直扩方案
YALEPIC® 核酸前处理系列 · 血液直扩篇
血液直扩PCR裂解液:删掉提取这一步之后
全血里躺着血红素、IgG、乳铁蛋白与抗凝剂,它们不会因为你不做提取就消失。YALEPIC® 血液直扩PCR/qPCR裂解液(YEM41030)用自研配方把抑制剂就地中和,让裂解后的全血原液直接作为 PCR / qPCR 模板——本文讲清它省掉了什么、又留下了什么。
⏱ 60 秒速览:它解决的是什么问题
✅ 免 DNA 纯化:全血裂解后裂解产物直接作为 PCR / qPCR 模板,省去抽提、沉淀、纯化全流程耗材与工时;
✅ 操作步骤从十余步压缩至 2~3 步,样本处理时间从 1~2 小时缩短到 5~15 分钟;
✅ 针对性中和血红素、抗凝剂残留等抑制物,降低因抑制剂残留导致的假阴性风险;
✅ 四类血液样本通用:新鲜抗凝血(2 小时内)、4℃ 短期储存(≤7 天)、-20℃/-80℃ 冻存血、商用干血斑卡干血渍;
✅ 双体系兼容:SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法均可;
✅ 推荐模板比例为反应体积的 5%~10%(50 μL 体系加 2.5~5 μL 全血),可优化至 5%~20%,不建议超过 30%;
✅ 适配 96 孔板与自动化移液工作站,可对接高通量流程;
✅ 规格:YEM41030-20(20 mL)/ YEM41030-100(100 mL),室温 15~25℃ 避光保存,未开封有效期 12 个月。
🩸 全血里到底有什么在拦着 PCR
做直扩之前,得先知道对手是谁。血液是公认最难直接扩增的样本之一,因为里面同时存在五六种作用机制不同的抑制物,它们不从同一个方向攻击反应体系:
🟥
血红素 / 血红蛋白
来源:红细胞裂解释放
机制:直接抑制聚合酶活性;部分荧光基团还会被淬灭,导致信号偏低。
🟡
免疫球蛋白 IgG
来源:血浆
机制:结合单链 DNA 或聚合酶本身,典型表现是 Ct 值整体后移——这在 qPCR 里最容易被误读成”模板太少”。
🔵
乳铁蛋白
来源:中性粒细胞及分泌物
机制:螯合 Mg²⁺ 并直接抑制聚合酶。用能竞争金属离子的添加物可以削弱它的影响。
🟣
抗凝剂残留
来源:采血管
机制:EDTA、柠檬酸钠会螯合 Mg²⁺;肝素则是公认抑制 PCR 的抗凝剂,采血时能避则避。
🟢
细胞碎片与多糖
来源:裂解后的细胞残骸
机制:物理阻碍聚合酶推进,同时抬高体系黏度。裂解后离心取上清就是冲它去的。
⚪️
白细胞 DNA 背景
来源:有核血细胞
机制:本身不是毒物,但会稀释靶标比例——检测低频靶标时,背景基因组越多越吃亏。
一个让人清醒的数字
< 0.004%
公开研究显示:某些常规 Taq 聚合酶在全血浓度低于 0.004%、或存在微量血红素时,就可能被完全抑制。换算一下——25 μL 反应体系里只要混进不足 1 nL 的全血,反应就可能完全不工作。
这就是为什么”把血直接加进去”从来不是一件顺手的事,也是直扩裂解液存在的理由。
🧭 说”免提取”之前,先看清它是哪一种
“直接扩增”不是一个动作,而是一组做法。它们的稀释倍数、可投入体积、抑制物处理能力相差很大,用错了就会觉得”直扩不稳定”:
上表为公开文献与行业资料的整理,用于说明策略分层,具体参数随体系而异。
⚖️ 删掉提取,省掉了什么、又留下了什么
这是全篇最该想清楚的一件事。免提取不是一个”更快”的选项,而是一次代价交换。
省掉的,不只是时间
① 一整类失败模式。提取环节的移液损失、洗脱不完全、柱子堵塞、批间差异——这些不确定性随步骤一起被删掉了。步骤越少,变量越少。
② 交叉污染的机会。开盖、转管、洗脱都是气溶胶污染的入口。直扩把样本始终留在同一个管里。
③ 对操作者的技术要求。2~3 步的操作,让不同人、不同批次的重复性更容易对齐,这对多中心项目尤其重要。
留下的,是抑制物负荷
① 抑制物守恒。血红素、IgG、乳铁蛋白、抗凝剂不会因为跳过提取就消失,它们只是从”被柱子截留”变成”跟着模板一起进反应管”。
② 灵敏度天花板。投入体积受抑制物约束(一般不超过反应体积 30%),可用的模板量比纯化 DNA 少,低拷贝靶标检出会吃亏。
③ 定量精度打折。Ct 值受抑制程度影响,做绝对定量或需要严格比较表达量时,纯化模板仍更可靠。
顺带说一句反面观点:行业内也有资料指出,一些免提取流程为了补齐裂解效果,会追加离心、高温加热甚至珠磨等步骤,实际动手时间可能并不比自动化提取短,而灵敏度与重复性的收益也有限。这不是要否定直扩——而是提醒你:选直扩的理由应该是”这类样本本来就适合”,而不是”它听起来更快”。
📦 YALEPIC® 血液直扩 PCR/qPCR 裂解液(YEM41030)
规格与储运
货号:YEM41030-20(20 mL)/ YEM41030-100(100 mL)
目录价:620 元(20 mL)/ 1800 元(100 mL)
保存条件:室温 15~25℃ 避光,避免反复开盖与长时间高温暴露
有效期:未开封 12 个月;开封后室温避光,可 4℃ 长期存放,用前回温混匀
运输:室温运输,无需冰袋或干冰
性能与兼容
原理:化学裂解血细胞并释放基因组 DNA,配方内中和血液内源与抗凝剂残留抑制物
操作步骤:2~3 步;处理时间 5~15 分钟(原流程 1~2 小时、十余步)
模板比例:推荐反应体积的 5%~10%,可优化至 5%~20%,不超过 30%
qPCR 体系:兼容 SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法
自动化:支持 96 孔板与自动化移液工作站
价格以官网实时报价为准;性能数据以产品随附 COA 或第三方检测报告为准。
🧪 四类血液样本,一套流程
实际项目里,样本到手的形态往往不统一。这四类都能直接进流程,是它比较实用的一点:
🩸
新鲜抗凝血
采血后 2 小时内处理;EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝均可
🧊
4℃ 短期储存血
4℃ 存放不超过 7 天的样本,裂解效果稳定
❄️
-20℃ / -80℃ 冻存血
避免反复冻融,以免 DNA 片段化影响长片段扩增
📄
干血斑卡
商用干血斑采集卡上的干血渍样本,适合邮寄与人群筛查
⚙️ 操作:真的只有几步
1️⃣
加样裂解
按推荐比例将全血加入裂解液,充分混匀并孵育完成裂解。
2️⃣
短离心去碎片
3000~5000 rpm 离心 2~3 分钟,取上清,避免细胞碎片干扰扩增体系。
3️⃣
取上清作模板
按 5%~10% 比例加入 PCR/qPCR 体系,无需再纯化。
4️⃣
上机扩增
按常规程序运行;首次使用某体系时建议先做预实验确定最佳投入量。
🔧 Ct 值飘高或扩增不出来,先查这五条
🎯 哪些场景最划算
🧬 基因分型与 SNP 检测:样本量大、靶标明确,直扩优势最直接
🧫 转基因与品系鉴定:鼠尾、耳组织等替代场景,快速出结果
🦠 病原体核酸检测:载体筛查、快速初筛的常规手段
👶 遗传病筛查与人群研究:干血斑邮寄 + 常温运输,现场采样友好
🔍 法医与身份鉴定:微量、降解样本的快速初步分析
⚡ 高通量筛查中心:96 孔板并行裂解,对接自动化全流程
🚧 什么时候,建议你还是做提取
这部分同样重要。直扩是一件好工具,但它有明确的能力边界:
🚫 低拷贝靶标检测——例如血液中痕量病原体载量监测。投入体积被抑制物约束,模板量不够就是不够。
🚫 需要绝对定量或严格比较表达量——残留抑制物会让 Ct 值产生偏移,定量精度不如纯化模板。
🚫 长片段扩增与建库类应用——纯化过程能去掉的部分干扰,直扩无法替代。
🚫 需要长期留存核酸样本——裂解产物适合当场扩增,不适合作为长期归档的核酸来源。
🚫 多重 PCR 中靶标数量很多——体系对抑制物更敏感,需要更谨慎地验证。
一句话判断:靶标”够多、够短、只需定性” → 直扩合适;靶标”很少、很长、需要定量” → 老实做提取。
❓ 常见问题
Q1:什么是血液直扩 PCR 裂解液?和传统 DNA 提取有什么不同?
它是一种专门用于全血样本的化学裂解试剂,可在不进行 DNA 纯化的前提下裂解血细胞并释放基因组 DNA,裂解产物直接作为 PCR/qPCR 模板。相比硅胶膜离心柱法、酚氯仿抽提法,它不需要有机溶剂和离心柱耗材,操作步骤从十余步减少至 2~3 步,样本处理时间从 1~2 小时缩短至 5~15 分钟,同时降低了样本交叉污染风险。
Q2:可以用于哪些类型的血液样本?
兼容新鲜采集的抗凝血(EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝均可)、4℃ 短期储存(不超过 7 天)的血液、-20℃ 或 -80℃ 长期冻存的血液,以及商用干血斑采集卡上的干血渍样本。
Q3:裂解后的样品还需要进一步处理吗?
不需要额外纯化。建议裂解后短暂离心(3000~5000 rpm,2~3 分钟)取上清用于扩增,以避免血细胞碎片对扩增体系造成物理干扰。
Q4:血液样本用量应该怎么控制?
推荐血液模板用量为 PCR 总反应体积的 5%~10%,例如 50 μL 体系中加入 2.5~5 μL 全血。难扩增靶标或低拷贝模板可在 5%~20% 范围内优化,但建议不超过总反应体积的 30%——比例过高会引入过多抑制剂,反而降低扩增效率。
Q5:怎么保存和运输?常温能放多久?
可在室温 15~25℃ 条件下保存和运输,无需冷链,未开封有效期 12 个月。开封后建议避光保存于室温,取用后及时旋紧瓶盖,避免污染与水分挥发。如需长期储存可置于 4℃,使用前恢复至室温并充分混匀。
Q6:能用于 qPCR 实时荧光定量吗?
可以。裂解产物可直接用作 qPCR 模板,兼容 SYBR Green 染料法与 TaqMan 探针法两种主流体系,可用于基因表达定量、病原体载量检测与 SNP 基因分型。建议首次使用某一特定体系时做预实验,确定最佳裂解条件与模板加入量。
Q7:为什么有时候扩增不出来或 Ct 值偏高?
常见原因有四类:① 血液抑制剂负荷过高,可适当降低血液模板比例;② 裂解不充分,需按推荐比例加入裂解液并保证充分孵育;③ 引物未经直扩体系验证,粗样本中的残留成分可能干扰引物结合;④ 靶标拷贝数过低,可增加模板投入量或优化循环参数。建议按此顺序逐一排查。
Q8:裂解液和血液直扩 PCR 试剂盒有什么区别?
裂解液只提供血液样本裂解功能,裂解后需配合常规 PCR Mix 或 qPCR Mix 完成扩增;血液直扩 PCR 试剂盒是一体化方案。已有成熟扩增体系的用户可单独购买裂解液;希望获得最优直扩效果,建议使用整套试剂盒。
Q9:兼容自动化高通量处理吗?
兼容。支持 96 孔板等自动化移液工作站,裂解步骤可在多孔板中并行处理,配合自动化 PCR/qPCR 系统可实现从样本裂解到结果检测的全流程自动化,适用于需要日处理成百上千份样本的高通量场景。
Q10:可以用于临床诊断吗?
本产品仅供科研使用,不可直接用于临床诊断。产品按医疗器械生产管理体系生产,每批次经质检放行。临床诊断用途需由客户自行完成相关注册与验证工作;雅礼生物可提供 OEM 定制与临床报证技术支持。
📋 数据声明
文中引用的文献数据(如抑制剂种类、抑制阈值、策略分层参数)整理自公开研究资料,用于说明技术原理;产品性能以随附 COA 或第三方检测报告为准;价格以官网实时报价为准。不同样本与扩增体系的表现存在差异,建议首次使用前进行预实验验证。
⚠️ 使用边界
本产品仅供科研使用,不用于疾病的诊断或治疗。涉及临床检测须遵守相关法规与注册要求。处理血液样本请遵循实验室生物安全规范,佩戴手套与实验服,按标准规程处理潜在感染性样本。
把提取这一步,换成更少的不确定性
YALEPIC® 血液直扩 PCR/qPCR 裂解液 · 货号 YEM41030
20 mL / 100 mL 两种规格 · 室温储运 12 个月 · 支持 96 孔自动化
雅礼(江苏)生物科技有限公司 · 国家高新技术企业 · YALEPIC®
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