YALEPIC^® 1×dsDNA高灵敏检测试剂盒

• YALEPIC^® 1×dsDNA HS Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的双链DNA（dsDNA）荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含即用型预混工作液（已预混荧光染料）和dsDNA标准品，使用时只需将1~20 µL待测样本与工作液混合，即可使用Qubit荧光仪或荧光酶标仪进行检测，操作极其简便，5分钟内即可获得定量结果。
• 本试剂盒对dsDNA具有高度的选择性，RNA干扰极小。在dsDNA样本浓度0.1~100 ng区间具有良好的线性关系（R² > 0.99），可对浓度100 pg/µl~100 ng/µl范围的dsDNA样本进行精确定量。对于常规的污染物，如RNA、盐、游离核苷酸、蛋白质、溶剂、去污剂等，均具有良好的耐受性，可直接对PCR扩增产物和NGS文库进行定量，无需额外纯化步骤。

定量范围： 100 pg/µl ~ 100 ng/µl（dsDNA），适用于低至100 pg/µl的高灵敏度检测需求。

样本要求： 本试剂盒可检测含有常规污染物（盐、蛋白质、RNA、去污剂、游离核苷酸等）的dsDNA样本，无需额外纯化。

2 ~ 8℃ 避光运输保存。

Q1：YALEPIC^® 1×dsDNA HS Assay Kit与传统的紫外分光光度法（如NanoDrop）相比有何优势？

A： 本试剂盒采用荧光染料法特异性结合dsDNA，相比紫外分光光度法具有三大优势：（1）高选择性——只检测dsDNA，不受RNA、游离核苷酸、蛋白质等杂质干扰；（2）高灵敏度——可检测低至100 pg/µl的dsDNA样本，优于紫外法的检测下限；（3）宽动态范围——在100 pg/µl~100 ng/µl范围内保持良好线性，无需多次稀释即可准确定量。

Q2：本试剂盒是否兼容所有型号的Qubit荧光仪？

A： 是的。本试剂盒可完美适配Qubit 1.0、Qubit 2.0、Qubit 3.0和Qubit 4.0等全系列Qubit荧光仪。同时也可兼容具备荧光检测模块的各品牌荧光酶标仪。使用Qubit时请选择检测程序中的“1×dsDNA High Sensitivity”模式进行仪器校正和样品测定。

Q3：试剂盒中的标准品如何正确使用？

A： 本试剂盒提供两种标准品：Standard S1（0 ng/µl）和Standard S2（10 ng/µl）。正确使用步骤：（1）使用前上下颠倒混匀后瞬时离心数秒，请勿涡旋振荡；（2）分别吸取190 µL工作液至Qubit专用管中；（3）各加入10 µL Standard S1和Standard S2至相应管中；（4）涡旋混匀2~3秒后瞬时离心，避光孵育2分钟后再进行仪器校正。每次使用Qubit荧光仪检测时，必须使用配套试剂的标准品重新标定。

Q4：本试剂盒对哪些常见污染物具有良好的耐受性？

A： 本试剂盒对以下常规污染物均具有良好的耐受性：（1）盐类——NaCl、KCl等；（2）蛋白质——BSA、酶类等；（3）RNA——细胞总RNA、rRNA等；（4）游离核苷酸——dNTPs、NTPs等；（5）去污剂——Triton X-100、Tween-20、SDS等；（6）有机溶剂——乙醇、DMSO等。这一特性使得用户可以直接对PCR扩增产物和未经纯化的DNA样本进行定量，无需额外纯化步骤。

Q5：试剂如何正确保存？拆封后是否需要特殊处理？

A： 完整试剂盒保存于2~8℃，避光。拆封后：（1）Working Solution（预混工作液）建议2~8℃避光保存，避免反复冻融；（2）Standard S1和Standard S2请2~8℃避光存放；（3）荧光染料均存在淬灭问题，所有组分使用前后均需注意避光操作，使用后立即盖紧管盖放回冰箱；（4）请务必在规定时间内完成样品检测，避免因荧光淬灭导致结果偏差。

Q6：待测样本的体积和用量有什么要求？

A： 本试剂盒每管反应体系的终体积为200 µL，其中工作液体积为180~199 µL，待测样本体积为1~20 µL。建议样本用量为1~10 µL，可根据样本预估浓度灵活调整。使用前请校准移液器，确保取样准确。检测完成后，请根据以下公式计算样本原始浓度：（仪器读数浓度）×（工作液体积+样本体积）/ 样本体积。

Q7：本试剂盒与Thermo Fisher的Qubit dsDNA HS Assay Kit性能对比如何？

A： YALEPIC^® 1×dsDNA HS Assay Kit在核心性能指标上与Thermo Fisher Qubit dsDNA HS Kit具有高度可比性：在0.1~100 ng dsDNA范围内均保持良好的线性关系（R² > 0.99）；对RNA的选择性高，RNA干扰极小；对盐、蛋白质、去污剂等常见污染物的耐受性相当。本试剂盒提供500次检测规格，单次检测成本更具优势，是Qubit dsDNA HS Kit的高性价比替代方案。

Q8：荧光强度随时间变化吗？检测结果是否稳定？

A： 荧光染料存在天然的淬灭现象，荧光强度会随孵育时间延长而缓慢衰减。为获得稳定可靠的结果，建议：（1）标准品与待测样品加入后统一避光孵育2分钟，然后在30分钟内完成所有检测；（2）尽量避免样品和标准品之间温度差异过大；（3）检测过程中不要长时间暴露在强光下。严格按照上述条件操作，批间和批内的检测结果具有良好的稳定性和可重复性。

Q9：试剂盒可以检测哪些类型的dsDNA样本？

A： 本试剂盒适用于各类来源的双链DNA样本的定量检测，包括但不限于：（1）NGS文库——高通量测序的input DNA文库定量；（2）PCR/qPCR产物——扩增产物的dsDNA定量；（3）基因组DNA——提取自细胞、组织、血液等样本的gDNA；（4）质粒DNA——质粒提取产物及酶切产物；（5）cDNA——反转录获得的cDNA产物；（6）DNA标准品——各类型dsDNA标准品。试剂盒对样本的来源物种（人、动物、植物、微生物、病毒等）无选择性，均可适用。

Q10：为什么我的标准品出现了“标准品错误”或负值？如何解决？

A： 出现标准品错误或负荧光值通常有以下原因及解决方法：（1）标准品准备不充分——使用前未充分混匀，请上下颠倒后瞬时离心；（2）温度影响——检测对温度敏感，请确保标准品和样品在室温下平衡后再进行检测；（3）移液误差——请使用已校准的移液器操作；（4）气泡干扰——混匀后请瞬时离心去除气泡；（5）标准品变质——检查标准品是否在有效期内，是否有反复冻融或污染。如果问题持续，请检查标准品的原始荧光值（RFU），确认待测样品的荧光值落在标准品的荧光值之间。