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YALEPIC® All-in-Mix cDNA 第一链合成试剂盒(gDNA off)

新一代逆转录酶 | 全程仅需2步操作 | 产物直用于RT-PCR与RT-qPCR

引物预混,双mix组分,一步法去qDNA,产物用于PCR及qPCR

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YPM51361 100rxns 1100.00+

产品简介

YALEPIC® All-in-Mix第一链合成试剂盒(gDNA off)是雅礼生物最新研发的一步法cDNA第一链合成及基因组DNA去除试剂盒。该产品采用创新性的“All-in-Mix”双预混液设计,将逆转录所需的全部组分与基因组去除模块整合为两个预混组分,用户仅需加入模板RNA和水即可启动反应,真正实现“加样即用”的实验体验。

本试剂盒的核心组分——YALEPIC® Script Reverse Transcriptase是雅礼生物自主研发的新一代逆转录酶,经过多轮蛋白质工程改造,在逆转录活性、热稳定性和模板适应性方面均达到行业领先水平。该酶在50~55℃温度区间内保持高效活性,可有效破解RNA模板的复杂二级结构,大幅提升高GC含量基因和高级结构RNA模板的逆转录成功率。

产品优势

  • 一步法原位去除 gDNA:集成 gDNA 消解体系,逆转录同步骤除基因组污染,无需单独 DNase 处理,减少 RNA 降解损耗,是 qPCR 实验首选反转录试剂;
  • All in 2 Mix 双组分全预混:Oligo dT + 随机引物预先配比混合,省去引物分装,减少人为加样误差,新手也可轻松操作;
  • 高热稳定性无 RNase H 活性:耐受高温逆转录条件,针对高二级结构 RNA 逆转录效率显著优于传统 AMV、M-MLV 酶体系;
  • 产物兼容性广:合成 cDNA 可直接用于常规 PCR、荧光定量 qPCR、基因表达谱检测,无需纯化。

操作流程

步去gDNA,组分预混,All in 2 mix!

YPM51361 操作流程示意图

适用范围

  • 第一链cDNA合成:以总RNA或mRNA为模板,高效合成cDNA第一链。

  • RT-PCR检测:合成的cDNA适用于常规PCR扩增,支持基因克隆与验证。

  • RT-qPCR定量分析:完美兼容SYBR Green法和TaqMan探针法荧光定量PCR,用于基因表达水平精确定量。

  • 文库构建:适用于RNA-seq测序文库构建和转录组学分析。

  • 基因表达分析:广泛用于分子生物学研究中的基因表达谱分析、药物靶点验证等。

  • 特殊RNA模板:特别适用于高GC含量、含复杂二级结构或低丰度RNA模板的逆转录。

保存及运输条件

-20℃ 保存,< 0℃ 运输。

FAQ

Q1:这款试剂盒一步去 gDNA 原理是什么?处理后的 RNA 还需要单独 DNase I 消化吗?

A:试剂盒 Mix 内置优化型 gDNA 去除组分,在逆转录预孵育阶段原位降解基因组 DNA,常规总 RNA 样本无需额外 DNase 单独处理;高 gDNA 污染粗提 RNA 可适当延长预孵育时间,即可彻底除杂,规避 qPCR 基因组非特异扩增。

Q2:试剂盒合成 cDNA 最长片段能达到多少?适合长片段基因克隆吗?

A:搭配自研无 RNase H 逆转录酶,最优条件下可合成15kb 全长 cDNA,常规条件下可合成8~10kb,无 RNA 水解副作用,适配大片段目的基因克隆、全长 cDNA 文库构建实验。

Q3:试剂盒自带引物是什么类型?可以替换基因特异性 GSP 引物吗?

A:试剂盒预混 Oligo dT + 随机六聚体混合引物,通用绝大多数 mRNA 反转录;如需做特异性基因反转录,可替换自备基因特异性引物,不影响 gDNA 去除与逆转录酶活性。

Q4:产物 cDNA 可以同时用于普通 PCR 和荧光定量 qPCR 吗?

A:可以,本试剂盒产物经过 gDNA 彻底去除,兼容常规琼脂糖 PCR 扩增与 SYBR Green 法 qPCR 定量,是一管 cDNA 多用的科研反转录试剂。

Q5:试剂盒 100rxns 规格的单反应体系是多少 μL?

A:标准单反应体系为 20μL,100rxns 可完成 100 次标准 20μL 反转录实验,可按实验需求按比例放大反应体系。

Q6:RNA 样本降解还能用这款试剂盒做逆转录吗?

A:产品逆转录酶热稳定性强,对轻微降解 RNA 仍有不错反转录效率;严重降解 RNA 建议重新提取合格总 RNA,保障 cDNA 得率与 qPCR 重复性。

Q7:试剂盒 – 20℃保存有效期多久?反复冻融会失效吗?

A:原装未开封 – 20℃避光保存有效期 12 个月;试剂反复冻融会造成酶活下降,建议收到后分装小规格冻存,减少冻融次数。

Q8:可以用于细菌、真菌原核生物 RNA 反转录吗?

A:适配动植物细胞、细菌、真菌、昆虫等多物种总 RNA,原核 RNA 无 polyA 尾样本依靠预混随机引物高效完成 cDNA 合成。

Q9:做完逆转录的 cDNA 如何保存?

A:新鲜产物短期 4℃存放 1–3 天,长期分装后 – 20℃或 – 80℃冷冻保存,避免反复冻融降解。

Q10:低浓度微量 RNA(ng 级)能用本试剂盒吗?

A:试剂盒配方优化,低至几十 ng 总 RNA 即可高效合成 cDNA,适配单细胞微量 RNA 反转录、低丰度基因 qPCR 检测。

Q11:运输途中冷链断裂,试剂解冻后还能正常使用吗?

A:短期常温解冻 ,及时放回 – 20℃不影响活性;长时间室温放置超过 12h 建议小样做预实验验证酶活。

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