YALEPIC^® 通用型示踪高灵敏qPCR预混液（染料法）

• YALEPIC^® Universal Blue SYBR Green qPCR MasterMix是雅礼生物自主研发的 基于SYBR Green I染料法的实时荧光定量PCR预混体系（2×浓度），液体呈蓝色，内置蓝色示踪染料，加样时可直观判断是否漏加，有效避免实验操作失误。
• 本产品核心采用 抗体修饰热启动DNA聚合酶（Hot-Start Taq），搭配专为 低拷贝数模板及高GC含量模板 优化的缓冲液体系，能够有效抑制非特异性扩增与引物二聚体生成，极大提升qPCR扩增效率与检测灵敏度，Ct值更低、重复性更优。
• 产品预混 通用型ROX Reference Dye，无需额外添加，兼容ABI、Bio-Rad、Roche、Agilent、Eppendorf、安捷伦等 全品牌qPCR仪器。使用时仅需加入模板DNA、上下游引物及ddH₂O，稀释至1×工作浓度即可直接上机运行，大幅简化实验流程。

• 蓝色示踪染料：预混液自带蓝色，加样时肉眼可见，有效防止 96/384 孔板加样遗漏或重复，尤其适合高通量手动加样场景。
• 高灵敏度与高特异性：核心组分采用抗体修饰的热启动 DNA 聚合酶，配合针对低拷贝模板优化的专用缓冲体系，常温下聚合酶活性被封闭，有效抑制非特异性扩增和引物二聚体生成，尤其适合高 GC 含量模板和低丰度基因检测。
• 全平台通用：预混液已预混通用 ROX Reference Dye，无需额外添加，兼容 ABI、Bio-Rad、Roche、Agilent 等所有主流 real-time PCR 仪器（ROX 依赖型及非依赖型均适用）。
• 操作极简：2× 预混液，使用时只需加入模板、引物和 ddH₂O 即可上机，大幅减少加样步骤和污染风险。
• dUTP/UDG防污染系统：降低假阳性，确保结果真实可靠。
• 赠送 ddH₂O：产品包装内含配套 ddH₂O，开箱即用，无需额外采购。

-20℃ 避光保存，＜0℃ 运输。

Q1：YALEPIC^® Universal Blue SYBR Green qPCR MasterMix 适用于哪些仪器？

A：本产品已预混通用 ROX Reference Dye，兼容所有主流 real-time PCR 仪器，包括 ABI（如 7500、7900HT、StepOne、QuantStudio 系列）、Bio-Rad（CFX96、iQ5）、Roche（LightCycler 系列）、Agilent 等 ROX 依赖型及非依赖型仪器，无需额外添加 ROX 或调整仪器设置。如果您不确定仪器是否兼容，可联系技术支持确认。

Q2：蓝色示踪染料是否会影响 qPCR 反应的灵敏度和特异性？

A：不会。蓝色示踪染料为惰性染料，不参与 PCR 扩增反应，不影响 DNA 聚合酶活性、荧光信号采集或扩增效率。其作用仅在于加样时提供视觉提示，帮助识别加样位置，防止漏加、错加或重复加样，特别适合手动配制高通量反应板。多家品牌已推出类似染料示踪产品并经过充分验证。

Q3：没有扩增曲线出现，该怎么办？

A：可能的原因及解决方案如下：

1. 循环数不足：检查 PCR 程序是否设置了足够的循环数（建议 40 个循环），并确认程序中是否已在延伸阶段开启荧光信号采集。
2. 引物问题：确认引物是否降解或设计不当，建议重新合成引物或优化引物设计。
3. 模板问题：检查模板是否降解或浓度过低，建议重新制备模板或增加模板投入量。
4. 热启动激活：确认预变性/热启动时间是否足够（本产品抗体修饰热启动酶需足够的初始变性时间以完全释放酶活性）。

Q4：Ct 值出现太晚（＞32），如何提高 qPCR 检测灵敏度？

A：Ct 值偏大通常与模板量低、扩增效率低或体系中存在抑制剂有关。建议尝试以下方案：

1. 增加模板投入量：可适当提高 cDNA 模板占比（不超过总体积的 20%）。
2. 优化反转录步骤：提高 RNA 投入量或更换效率更高的反转录试剂盒。
3. 优化引物设计：确保扩增产物长度在 80–200 bp 之间，避免高 GC 含量或连续重复结构。
4. 排除 PCR 抑制剂：模板带入的抑制剂（如乙醇、苯酚）会影响扩增效率，可尝试梯度稀释模板或重新纯化模板。
5. 检查反应条件：通过标准曲线确认扩增效率是否在 90%–110% 范围内，若非，优化退火温度或改用三步法程序。

Q5：阴性对照（NTC）出现扩增，是什么原因？

A： NTC（No Template Control）出现扩增信号，通常有以下两种情况：

1. 引物二聚体（Ct > 35，Tm < 80℃）：引物二聚体导致的非特异性扩增较为常见。建议优化引物设计、降低引物浓度（如从 500 nM 降至 200–300 nM）或提高退火温度。
2. 试剂/水污染（Ct < 35）：表明反应体系已被外源 DNA 污染。建议更换新的试剂和去离子水，在超净工作台上配制反应体系，并使用带滤芯的枪头。
3. 气溶胶污染：若此前在实验室进行过大量 qPCR 或克隆实验，可能存在扩增产物的气溶胶污染。

Q6：熔解曲线出现双峰，如何解决？

A： 熔解曲线双峰通常表示存在非特异性扩增或引物二聚体。解决方案：

1. 杂峰 Tm < 80℃：多为引物二聚体。建议降低引物浓度、重新设计引物或提高退火温度。
2. 杂峰 Tm > 80℃：可能为非特异性产物扩增。建议用 BLAST 检查引物特异性，若仍有问题则重新设计引物。同时通过 NRC（No RT Control）排除 gDNA 污染的可能。
3. 电泳验证：必要时通过高分辨率琼脂糖电泳确认 PCR 产物大小是否与预期一致。

Q7：实验重复性差（复孔间 Ct 值偏差大），是什么原因？

A： 重复性差通常与加样误差或仪器状态有关：

1. 加样误差：定期校准移液器，建议使用性能稳定的移液枪。可扩大反应体系（如将 20 μl 扩大到 25–30 μl）或将模板做高倍稀释后以大体积加入，以减少相对加样误差。配制预混液后再分装到各孔也可有效降低误差。
2. 仪器问题：定期校准 real-time PCR 仪，确保各孔温度控制一致。
3. 模板量过低：模板浓度过低时随机误差增大，建议提高模板量使 Ct 值落在 15–30 之间。

Q8：高 GC 含量模板扩增效果差，有什么建议？

A：本产品已针对高 GC 含量模板进行缓冲体系优化，能够有效提升扩增效率。如仍面临扩增困难，建议：

1. 优化退火温度：尝试通过温度梯度 PCR 确定最佳退火温度，必要时可适当降低退火温度 2–4℃。
2. 使用三步法程序：在退火和延伸之间增加温度梯度，有助于高 GC 模板的变性。
3. 添加 PCR 增强剂：可考虑使用 DMSO 或甜菜碱等辅助试剂帮助打开高 GC 区域的二级结构。
4. 设计更短的扩增子：将扩增片段长度控制在 100–150 bp 以内。

Q9：产品的保存和运输条件是什么？

A：本产品应在 -20℃ 避光保存，尽量避免反复冻融。建议分装保存以减少冻融次数。运输条件为 <0℃（冰袋/干冰）。产品在 -20℃ 长期保存后如有微量沉淀属正常现象，室温融化后颠倒混匀即可恢复使用，请勿涡旋振荡以免产生气泡。

Q10：这款 Mix 与国内外同类产品相比有什么优势？

A10： 雅礼生物 YALEPIC^® Universal Blue 在多个维度具有显著优势：

1. 性价比更优：相比 Thermo Fisher Power SYBR Green Master Mix 和 Bio-Rad iTaq Universal SYBR Green Supermix 等进口品牌，本产品提供同类性能但更具竞争力的价格。
2. 示踪设计：独特的蓝色示踪体系在加样准确性上优于大多数进口产品，尤其适合高通量手动加样场景，有效降低操作失误率。
3. 全平台兼容：预混通用 ROX，相比部分需要用户自行添加 ROX 或区分 ROX 型号的产品，本产品使用更加简便。
4. 本土技术支持：国内生产，技术支持响应更快，供货周期更短，售后更便捷。
5. 核心性能：基于抗体法热启动 DNA 聚合酶和专用优化缓冲体系，可有效抑制非特异性扩增，显著提高扩增效率和检测灵敏度，适用于低拷贝模板检测和高 GC 含量模板扩增。