YALEPIC® 快速小鼠直扩PCR鉴定试剂盒
特殊修饰DNA聚合酶+优化粗样本裂解液+PCR缓冲体系，可直接对小鼠组织（鼠尾、鼠耳、鼠趾等）进行PCR扩增。无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提或柱式纯化，扩增产物为平末端，预混电泳染料。
| 产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 | 购物车 |
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| YEM41007 | 250rxns | 650.00 | — | + |
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产品简介
YALEPIC® 快速小鼠直扩PCR鉴定试剂盒采用特殊修饰的DNA聚合酶、高度优化的粗样本裂解液及PCR缓冲体系，可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾等）样本进行PCR扩增，扩增产物为平末端。无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，5分钟极速裂解，极大缩短了实验耗时。本试剂盒可适用于15kb以内片段的多重PCR反应，反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，体系中预混有电泳缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳。是转基因小鼠基因型鉴定、基因敲除验证、品系筛选等小鼠遗传学实验的理想选择。雅礼生物YALEPIC®品牌，国家高新技术企业。
产品优势
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5 min裂解，免DNA提取 —— 采用特殊修饰的DNA Polymerase及高度优化的粗样本裂解液，仅需取1~2 mm²鼠尾/鼠耳/鼠趾组织，加入裂解液于95℃孵育5 min，即可直接作为PCR模板，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化，极大缩短实验耗时。
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预混体系，即开即用 —— 2 × MasterMix中已预混电泳缓冲液及染料，PCR扩增结束后可直接点样电泳，无需额外加入Loading Dye。
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高灵敏度，多重兼容 —— 可适用于15 kb以内靶标片段的扩增，支持多重PCR反应，满足多基因同时鉴定的需求。
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平末端产物，下游无忧 —— 扩增产物为平末端，可直接用于平末端克隆、测序等下游实验。
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防污染设计 —— 体系为预混型，仅需加入引物和模板，减少开盖与移液操作，显著降低样品交叉污染，提高检测通量与结果可重复性。
适用范围
小鼠基因型鉴定（Mouse Genotyping）、转基因阳性筛选、基因敲除/敲入分析、Cas9/gRNA靶点验证等。
实验流程
保存及运输条件
2 × YALEPIC® Mouse Direct PCR MasterMix (Dye) 需 -20℃ 避光保存，≤ 0℃ 运输；其余组分 2~8℃ 保存，长期 -20℃ 保存，避免反复冻融。
FAQ
Q1：什么是”小鼠直扩PCR”？和先提取基因组再PCR有什么区别？
A1：常规流程需先对鼠尾等组织进行过夜蛋白酶 K 消化，再经酚氯仿抽提或柱式纯化获得基因组 DNA，前处理往往要数小时甚至隔夜。小鼠直扩 PCR 跳过 DNA 纯化环节——组织经裂解液短时间裂解后，释放出的基因组 DNA 直接用作 PCR 模板。本试剂盒仅需 95℃ 孵育 5 min 即可完成裂解，把前处理压缩到分钟级。对于基因型鉴定、转基因筛查这类样本量极大的常规检测，直扩方案能显著缩短周期、降低耗材成本，同时减少多次移液带来的交叉污染风险。
Q2：可以用哪些小鼠组织？每次需要取多少？
A2：本试剂盒适用于鼠尾、鼠耳、鼠趾、肝脏等多种小鼠组织。每次取样量推荐 1~2 mm²（约米粒大小），这一用量已能释放足够的基因组 DNA 用于常规基因型鉴定 PCR。取样过多并不会提升成功率，反而可能带入更多抑制物；取样器械应保持洁净，避免交叉污染。
Q3：裂解的具体条件是什么？为什么是 95℃？
A3：将 1~2 mm² 组织加入裂解液后，于 95℃ 孵育 5 min 即可完成裂解并释放基因组 DNA。高温加热一方面破坏组织结构与细胞膜，使 DNA 释放到溶液中；另一方面高温也能使蛋白变性失活，避免残留核酸酶对模板的降解。裂解完成后短暂离心，取上清即可作为 PCR 模板使用。
Q4：本试剂盒能扩多长的片段？可以做多重 PCR 吗？
A4：本试剂盒可适用于 15 kb 以内靶标片段的扩增，并支持多重 PCR 反应，满足多基因位点同时鉴定的需求，常用于在一管反应中同步检测多个转基因元件或内参基因。需注意的是，多重体系中各引物对之间存在竞争，重数越高对引物设计要求越严格，建议先分别验证单重扩增，再逐步提高重数，并按需调整各对引物的终浓度配比。
Q5：裂解产物加多少到 PCR 体系合适？加多了会怎样？
A5：裂解产物用量是直扩成败的关键变量，具体推荐体积请参照随货说明书。一般原则：用量过少则模板不足，目标条带偏弱甚至无扩增；用量过多则会带入过量裂解液成分，抑制聚合酶活性，同样导致扩增失败。若反复出现无扩增或条带很弱，可将裂解产物适当稀释后再加入 PCR 体系，通常能有效缓解抑制。
Q6：为什么没有扩增出条带？怎么排查？
A6：常见原因与处理措施：
| 可能原因 | 解决方案 |
| 取样量过少或组织未完全浸没 | 调整至 1~2 mm²，确保组织充分接触裂解液 |
| 裂解不充分 | 确认裂解时间与温度，必要时延长裂解时间 |
| 裂解产物加入量过高（抑制） | 减少加入量，或将裂解产物稀释后再加 |
| 退火温度过高 | 逐步降低退火温度（每次约 2~3℃）优化 |
| 循环数不足 | 适当增加 PCR 循环数 |
| 引物特异性差或设计不佳 | 重新设计引物，BLAST 核对特异性 |
| MasterMix 反复冻融致酶活下降 | 按次分装保存，避免反复冻融 |
| 模板降解 | 使用新鲜组织，避免样本反复冻融 |
建议每次实验均设置阳性对照与阴性对照——阳性对照用于验证体系与引物正常，阴性对照（无模板）用于排除外源污染。
Q7：出现非特异性扩增或杂带怎么办？
A7：非特异扩增通常由退火温度偏低、循环数过多、引物或模板浓度过高、未在冰上配制反应体系、配制后放置过久等因素引起。对应处理：升高退火温度、减少循环数、降低引物与模板浓度、全程冰上操作并缩短室温放置时间。若引物本身特异性不佳，建议重新设计并通过 BLAST 验证；多重 PCR 中还应检查各引物对之间是否形成引物二聚体。
Q8：为什么要同时设置阳性对照和阴性对照？
A8：阳性对照（已知基因型模板）用于确认 PCR 体系、引物与操作均无问题——若阳性对照正常而样品无扩增，问题通常在模板环节；若阳性对照也无扩增，则应检查试剂活性与 PCR 程序。阴性对照（无模板对照，NTC）用于监测是否存在外源核酸污染——本试剂盒虽为预混体系、开盖次数少、污染风险较低，但在高通量小鼠基因型鉴定的批量检测中，NTC 依然是判断结果可信度的必要一环。
Q9：PCR 产物除了电泳，还能做什么下游实验？
A9：本试剂盒扩增产物为平末端（Blunt End），下游可进一步用于：
- 平末端克隆：直接连入平末端载体进行 TA 之外的克隆策略；
- 测序分析：Sanger 测序验证突变位点、sgRNA 靶点序列等；
- 酶切鉴定：对含限制性位点的扩增产物进行酶切分型；
- 高分辨率分型：配合特异性引物进行等位基因鉴别。
需说明的是，直扩获得的裂解上清未经纯化，其纯度低于常规基因组提取产物，因此不适用于对模板纯度要求较高的实验。若下游为 NGS 文库构建、Southern blot 等对 DNA 纯度敏感的应用，建议仍使用标准基因组提取方案。
Q10：试剂盒如何保存和运输？反复冻融有影响吗？
A10：试剂盒需分区保存：
- 2 × Mouse Direct PCR MasterMix (Dye)：-20℃ 避光保存，运输条件 ≤ 0℃；
- 粗样本裂解液等其他组分：2~8℃ 保存，长期存放建议置于 -20℃。
反复冻融会导致酶活性下降，影响扩增效率。建议首次解冻后充分混匀、短暂离心，并按使用频次小份分装（如按 10 次反应用量一管），每次取用一份，避免整管反复冻融。若 MasterMix 出现明显活性衰减，建议更换新批次。
