YALEPIC® 一步法第一链cDNA合成试剂盒for PCR（gDNA off）
PCR专用款：热敏dsDNase同管去gDNA，引物独立分装，可合成≤15kb
| 产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
|---|---|---|---|
| YPM51811 | 100rxns | 1500.00 | — |
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- COA
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产品简介
YALEPIC® One step 1st Strand cDNA Synthesis Kit for PCR (gDNA off) 是专用于PCR的一步法第一链cDNA合成及gDNA去除的逆转录试剂盒。YALEPIC® Script RT MasterMix for PCR含有新一代逆转录酶YALEPIC® Script Reverse Transcriptase Plus 和优化的逆转录缓冲液，具有无RNase H活性、热稳定性高等优点，非常适合具有复杂二级结构RNA模板的逆转录实验，可在 50 ~ 60℃（55℃ 最佳）条件下合成 ≤15 kb 的第一链cDNA。预混的新型dsDNase能够特异性去除双链DNA，可在 55℃ 快速失活，实现去除gDNA污染与逆转录反应同步进行。试剂盒中包含单组分逆转录引物Oligo(dT)20 和Random Hexamers，可灵活选择逆转录引物进行后续实验。合成的第一链cDNA适用于RT-PCR，基因表达的高效分析等。
适用范围
– 动物、植物组织及细胞总RNA的第一链cDNA合成；
– RT-PCR 半定量基因表达检测与目的基因片段扩增；
– 复杂二级结构 RNA（高GC、发夹结构）模板的逆转录实验；
– 微量RNA样本反转录，低丰度基因扩增场景；
– 需去除内源gDNA污染的全转录组小样本制备；
– 原核/真核样本cDNA文库前期构建与基因表达分析。
产品组分
| 序号 | 产品组分 | 100 rxns（20 μl 体系） |
| ① | YALEPIC® Script RT MasterMix for PCR | 100 μl |
| ② | 5 × YALEPIC® Script RT Reaction Mix for PCR | 2 × 1 mL |
| ③ | Oligo(dT)20 Primer（100 μM） | 100 μl |
| ④ | Random Hexamer Primer（100 μM） | 100 μl |
| ⑤ | Nuclease-Free ddH2O | 2 × 1 mL |
保存及运输条件
-20℃ 保存，＜ 0℃ 运输。
FAQ
Q1：这款试剂盒和通用款（YPM51311）有什么区别？我该选哪一款？
A1：两者都是一步法同步去gDNA + 第一链cDNA合成试剂盒。本款（YPM51811）为 PCR 专用款，缓冲体系与酶配比针对常规PCR与RT-PCR场景深度优化，可合成 ≤15 kb 的第一链cDNA，适合以基因片段扩增、半定量表达分析为主要目的的实验；通用款（YPM51311）则在 PCR 与 qPCR（荧光定量）之间做了双向兼容。若你的下游主要是 RT-PCR 扩增目的基因，选本款即可，性价比更高。
Q2：什么是”一步法”？与传统两步法相比优势在哪？
A2：传统两步法需先用 DNase I 处理去除 gDNA，再纯化 RNA，最后单独做逆转录——三次操作、三次移液，RNA 反复暴露极易降解和交叉污染。本产品采用具 DNA 分解活性的热敏 dsDNase 与新一代逆转录酶协同工作，一步加样即可在同一反应管内同步完成 gDNA 去除与 cDNA 合成，大幅缩短流程、降低污染风险，尤其适合微量样本和高通量实验。
Q3：本试剂盒最长能合成多长的cDNA片段？
A3：本试剂盒采用新一代 YALEPIC® Script Reverse Transcriptase Plus 逆转录酶，在 50~60℃（最佳 55℃）温度区间内，最长可合成 ≤15 kb 的第一链cDNA，能够满足绝大多数全长基因克隆与文库构建对片段长度的需求。相比常规 37℃/42℃ 逆转录酶，高温反应条件可有效打开 RNA 二级结构，复杂模板的全长比例更高。
Q4：gDNA去除组分会不会干扰后续的cDNA合成或PCR？
A4：不会。热敏 dsDNase 特异性降解双链 DNA（即基因组 DNA），对单链 RNA 和单链 cDNA 无活性影响，且该酶在 55℃ 反应条件下会快速不可逆失活，完成去 gDNA 任务后自动失去活性。反应结束仅需 85℃ 加热 2~5 分钟即可彻底灭活全部酶组分，不会对 cDNA 产物稳定性与后续 PCR 检测产生任何干扰。经本产品处理的 cDNA 可长久稳定保存，因此 PCR 引物设计也无需跨外显子设计，简化了实验设计流程。
Q5：试剂盒提供哪些逆转录引物？可以自己搭配或换成GSP吗？
A5：可以。本试剂盒以单组分形式独立提供 Oligo(dT)20 与 Random Hexamers（N6 随机引物），你可根据实验需求灵活选择、自由搭配比例，甚至替换为基因特异性引物（GSP） 进行靶向逆转录——灵活度显著高于竞品的预混模式。
- Oligo(dT)20：特异性结合 mRNA 的 poly(A) 尾，适合真核生物 mRNA 检测；
- Random Hexamers：随机结合 RNA 各区域，适合总RNA、原核RNA、病毒RNA及非编码RNA 逆转录。
若用于 RT-PCR 扩增，推荐 Oligo(dT) 与 Random 引物混合使用，可获得更全面的 cDNA 覆盖率。
Q6：RNA模板的推荐用量是多少？微量样本能用吗？
A6：20 μl 反应体系中，推荐总RNA 用量为 50 ng ~ 2 μg；若投入量超过 2 μg，请按比例扩大反应体系。本产品对低浓度 RNA 模板兼容性极佳——RNA 模板体积可加至总反应体积的 75%~80%，仍能保持稳定的逆转录效率，因此特别适合激光显微切割样本、稀有组织、少量细胞等微量 RNA 的基因表达分析。
Q7：哪些下游实验可以使用本产品合成的cDNA？
A7：合成的第一链cDNA 适用范围广泛：
- RT-PCR：常规 PCR 扩增目的基因片段、半定量基因表达检测；
- 基因表达分析：高拷贝与低拷贝基因检测；
- cDNA文库构建：合成长达 15 kb 的片段，适合文库前期构建；
- 引物延伸 / SAGE：转录起始位点分析、基因表达连续分析。
Q8：如何保存和运输？反复冻融有影响吗？
A8：产品在 -20℃ 条件下长期保存，运输条件为 ＜0℃（干冰/冰袋）。反复冻融会降低酶活性，建议初次解冻后充分混匀离心，并按次分装为小份（如按 10 次反应用量分装），每次取用一份，避免整管反复冻融。
Q9：PCR/RT-PCR 结果不理想（Ct偏高、条带弱或无扩增）怎么排查？
A9：常见原因及解决方案：
| 可能原因 | 解决方案 |
| RNA模板质量差（降解或纯度低） | 检测 A260/A280、A260/A230 比值，确保RNA完整性 |
| RNA模板用量过低 | 调整至 50 ng ~ 2 μg 推荐范围 |
| RNA模板用量过高（＞2 μg） | 按比例扩大反应体系，或适当稀释模板 |
| 逆转录温度/时间不当 | 采用推荐条件：55℃ 孵育 30min |
| 引物特异性不足或Tm不匹配 | 重新设计或验证引物特异性 |
| 反应体系未充分混匀 | 轻弹混匀或短时涡旋，短暂离心收集反应液 |
若问题持续，建议设置 不含逆转录酶的阴性对照（No-RT Control），排除 gDNA 残留导致的假阳性。
Q10：产品含RNase抑制剂吗？如何确保RNA不被降解？
A10：含。 本产品逆转录 MasterMix 中已预加高效 RNase 抑制剂，可在整个反应过程保护 RNA 模板不被降解，确保 cDNA 合成的完整性与产量。为进一步保障 RNA 稳定性，建议：
- 全程冰上操作，低温抑制 RNase 活性；
- 使用 RNase-free 枪头、离心管等耗材；
- 操作时佩戴口罩与手套，避免外源 RNase 污染；
- RNA 样品避免反复冻融，建议分装保存。
