🌿 棉花松针茶叶都能提:YALEPIC® 多糖多酚植物DNA提取,30分钟攻克最难提的植物样本
专为富含多糖多酚的复杂植物设计 · 硅胶膜离心柱法 · 含RNase A · 无需酚氯仿 · 50kb大片段
多糖多酚植物DNA提取试剂盒是指专为棉花、松针、银杏、茶叶、马铃薯、甘薯、香蕉果肉、葡萄果肉、花生种子等富含多糖和多酚类次生代谢物的复杂植物样本设计的基因组DNA提取产品。YALEPIC®多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒(含RNase A,货号YC22015)采用先进硅胶膜离心柱技术与优化缓冲体系,在30分钟内高效分离高纯度植物总DNA(基因组DNA、线粒体DNA及叶绿体DNA),有效去除多糖、多酚及PCR抑制物,提取产物可直接用于PCR、qPCR、酶切、文库构建、Southern Blot、分子标记(SSR/SNP/AFLP)及NGS高通量测序等下游实验。
📋 本文导读
🔬 为什么多糖多酚植物DNA这么难提?
植物分子生物学研究中,基因组DNA提取是所有下游实验的基础。然而,富含多糖和多酚的植物样本(如棉花、松针、茶叶、银杏等)一直是DNA提取的”硬骨头”,困扰着无数科研工作者:
多糖共沉淀
多糖与DNA共沉淀,形成难以溶解的胶状杂质,DNA溶液呈粘稠状,严重影响核酸释放和后续移液操作。
多酚氧化褐变
多酚类物质在细胞破碎后被氧化为醌类,与核酸共价结合,DNA溶液呈褐色,同时抑制PCR酶活性。
CTAB法耗时耗毒
传统CTAB法需2-3小时,必须使用氯仿、苯酚等有毒有机试剂,操作繁琐、重复性差,对实验人员和环境均有危害。
PCR抑制残留
多糖、多酚及色素等PCR抑制物残留,导致下游扩增效率低下甚至完全失败,A260/A230比值偏低。
💡 核心矛盾:多糖的化学性质与DNA相似(均为高分子聚合物),在常规裂解和沉淀步骤中极易与DNA共沉淀;多酚氧化后形成的醌类可与核酸共价结合——这两类次生代谢物是植物DNA提取纯度不达标的元凶。
⚙️ 提取原理与操作流程
YALEPIC®多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒采用硅胶膜离心柱技术配合专属性缓冲体系,通过”裂解→吸附→漂洗→洗脱”四步法,30分钟内完成从植物组织到高纯DNA的全流程:
液氮研磨
取≤100mg新鲜或≤20mg干燥样本,液氮研磨至细粉
裂解灭活
加YPA Buffer + RNase A,65℃水浴裂解,灭活核酸酶并消化RNA
柱吸附
加YPB Buffer调节结合条件,上柱离心,DNA选择性吸附于硅胶膜
漂洗洗脱
Wash Buffer GB去杂质,YGE Buffer(65℃预热)洗脱高纯DNA
技术原理:试剂盒独特的YPA/YPB缓冲液含有针对植物多糖多酚的特异性去除组分,在裂解阶段即将多糖和多酚与核酸有效分离;随后在高离序盐状态下,基因组DNA选择性吸附于硅基质膜,而多糖、多酚、蛋白质及色素等杂质随流出液被去除;经Wash Buffer GB漂洗进一步清除残留抑制物后,低盐YGE Buffer将纯净DNA从膜上洗脱。整个流程无需苯酚/氯仿,无需异丙醇沉淀,避免了多糖共沉淀问题。
✅ 六大核心优势
30分钟快速提取
从植物组织到高纯DNA全程仅需30分钟,相比传统CTAB法的2-3小时,效率提升4-6倍,尤其适合大批量样本并行处理。
无酚氯仿·安全无毒
全程无需苯酚、氯仿等有毒有机试剂,无需通风橱操作,消除了对实验人员健康和环境的危害,实验室安全等级大幅提升。
高效去多糖多酚
独特沉淀溶液+硅基质膜双重去杂,有效沉淀去除蛋白质、多糖及酚类杂质,提取DNA纯度高、A260/A280达1.7-1.9、A260/A230≥2.0。
50kb大片段·完整性好
纯化获得最大50kb的DNA片段,涵盖基因组DNA、线粒体DNA及叶绿体DNA,完整性好,可直接用于Southern Blot等对DNA完整性要求高的实验。
广谱适用·通吃难提样本
专为棉花、松针、银杏、茶叶、马铃薯、甘薯、香蕉果肉、葡萄果肉、花生种子等高多糖多酚植物设计,同时也适用于常规植物样本。
预含RNase A·即用型
试剂盒预含RNase A(10 mg/ml),裂解同步去除RNA干扰,无需额外配制;室温运输、10-30℃保存,有效期一年,开箱即用。
🌱 适用样本与检测场景
本试剂盒适用于新鲜或干燥的富含多糖多酚植物样本,最大处理量≤100mg新鲜样本或≤20mg干燥样本,覆盖以下典型样本类型:
木本植物
松针·银杏叶·茶叶
种子类
花生·小麦·大豆
果实类
香蕉·葡萄·草莓
块茎根茎
马铃薯·甘薯
蔷薇科
苹果·梨·桃
真菌类
菇类真菌
🔬 下游应用一览
Real-Time PCR
限制性内切酶酶切
文库构建
Southern Blot
SSR分子标记
SNP基因分型
AFLP/RAPD
NGS高通量测序
📊 典型多糖多酚植物样本DNA提取参考
| 植物样本 | 样本类型 | 建议用量 | 多糖多酚等级 | 下游适配 |
|---|---|---|---|---|
| 棉花叶片 | 新鲜叶片 | ≤100mg | ★★★★★ | PCR/qPCR/NGS |
| 松针/银杏 | 新鲜/干燥 | ≤20mg(干) | ★★★★★ | PCR/SSR/SNP |
| 茶叶 | 新鲜/干燥 | ≤50mg(鲜) | ★★★★☆ | qPCR/NGS |
| 马铃薯/甘薯 | 块茎 | ≤100mg | ★★★★☆ | PCR/酶切 |
| 香蕉/葡萄果肉 | 果实 | ≤100mg | ★★★★★ | PCR/文库/NGS |
| 花生/小麦种子 | 种子 | ≤50mg | ★★★★☆ | PCR/SSR/AFLP |
| 蔷薇科(苹果/梨/桃) | 叶片 | ≤100mg | ★★★★★ | PCR/酶切/NGS |
| 菇类真菌 | 子实体/菌丝 | ≤100mg | ★★★☆☆ | PCR/ITS测序 |
* 多糖多酚等级:★越多表示样本提取难度越高,★★★★★为极高难度样本
📦 产品规格与组分明细
🧪 试剂盒组分
| 序号 | 产品组分 | YC22015(50T) | 用途说明 |
|---|---|---|---|
| ① | YPA Buffer | 26 ml | 细胞裂解液,含多糖多酚去除组分,65℃使用前检查结晶 |
| ② | YPB Buffer | 11 ml | 调节DNA结合条件,含特异性去多糖多酚沉淀组分 |
| ③ | YPC Buffer | 22 ml | 过柱前杂质沉淀液,首次使用前加无水乙醇 |
| ④ | Wash Buffer GB | 18 ml | 漂洗液,去除残余多糖、多酚和盐类,首次使用前加无水乙醇 |
| ⑤ | YGE Buffer | 15 ml | 洗脱缓冲液,建议65℃预热提高洗脱效率 |
| ⑥ | RNase A(10 mg/ml) | 300 μl | 去除RNA干扰,裂解时加入YPA Buffer中同步处理 |
| ⑦ | Pure Columns YM with Collection tubes | 50 T | 硅胶膜离心吸附柱 + 收集管,高一致性吸附膜 |
⚖️ CTAB法 vs 硅胶膜柱法:植物DNA提取方法怎么选?
CTAB法和商业化硅胶膜离心柱法是植物基因组DNA提取的两大主流路径。下表从多个维度进行系统性对比,帮助科研人员根据实际需求做出最优选择:
| 对比维度 | 传统CTAB法 | YALEPIC® 硅胶膜柱法 |
|---|---|---|
| 操作时间 | 2-3小时 | 约30分钟 ✅ |
| 有机试剂 | 需苯酚/氯仿/异戊醇 ❌ | 无需有机试剂 ✅ |
| 多糖去除 | 依赖CTAB沉淀+多次抽提,高多糖样本需改良 | 特异性沉淀组分+硅胶膜双效去多糖 ✅ |
| 多酚去除 | 需额外添加PVP/β-巯基乙醇,效果不稳定 | 内置多酚去除组分,DNA无色 ✅ |
| 操作复杂度 | 步骤多、技术要求高、需通风橱 | 标准化流程、普通实验台即可操作 ✅ |
| DNA纯度 | 批次间差异大,A260/230波动明显 | A260/A280 1.7-1.9,A260/A230≥2.0 ✅ |
| 批量处理 | 可处理大批量,但需大量通风橱空间 | 标准化批处理,离心机并行操作 ✅ |
| DNA片段大小 | 50-100kb(优化后可获大片段) | 最高50kb |
| RNase A处理 | 需单独购买和添加 | 已预含RNase A,裂解同步去除RNA ✅ |
| 单次成本 | 试剂成本低 | 约¥6/样本(¥300/50T) |
| 储存条件 | 多种试剂需4℃冷藏或现配现用 | 室温10-30℃,有效期1年 ✅ |
💡 选型建议:如果您的实验追求高效、标准化、无毒性,且样本为多糖多酚含量高的植物组织,YALEPIC®硅胶膜柱法试剂盒是最优选择;如果样本量大、预算有限且对实验环境要求不高,传统CTAB法仍可作为备选方案。需要注意的是,对于超长片段测序(>50kb)的特殊需求,CTAB法的DNA片段优势更明显。
❓ 常见问题FAQ
Q1:为什么多糖多酚植物样本的DNA提取比普通植物困难?
第一,多糖与DNA共沉淀,形成胶状杂质,使DNA溶液粘稠,影响操作;第二,多酚氧化为醌类后与核酸共价结合,DNA呈褐色且抑制PCR酶活性。本试剂盒采用独特沉淀溶液和硅基质膜双重去杂,针对性解决这两大难题。
Q2:该试剂盒适用于哪些多糖多酚植物样本?
典型样本包括:木本植物(松针、银杏、茶叶)、种子类(花生、小麦、大豆)、果实类(香蕉、葡萄、草莓)、块茎类(马铃薯、甘薯)、蔷薇科(苹果、梨、桃)、真菌类(菇类真菌)以及棉花。普通植物样本同样适用。
Q3:提取的DNA产量低,可能是什么原因?
可能原因:①样本不新鲜或反复冻融导致DNA降解;②液氮研磨不充分,细胞未完全裂解;③样本量过少或过多(建议新鲜≤100mg,干燥≤20mg);④洗脱液未预热至65℃或洗脱体积过小。建议用新鲜材料、充分研磨、YGE Buffer预热后洗脱。
Q4:DNA出现降解(跑胶弥散)怎么办?
降解原因:①材料反复冻融——应避免;②液氮研磨后操作过于剧烈——后续步骤应轻柔操作;③外源RNase/DNase污染——建议DNA和RNA电泳槽分开使用,规范RNase A用量。
Q5:离心柱出现堵塞,无法顺利过柱怎么办?
堵塞通常由研磨不充分或裂解物中粘稠多糖过多引起。解决方案:①确保裂解液清亮,去除粘稠不溶物后再过柱;②减少样本用量,高多糖样本按下限取样;③确保YPC Buffer和Wash Buffer GB已加无水乙醇;④所有离心在室温下进行。
Q6:洗脱下来的DNA溶液带有颜色(褐色/黄色)怎么办?
DNA带颜色说明多酚未被充分去除。原因:样本用量过高。解决方案:减少初始样本量,按说明书推荐范围取样;裂解后适当增加漂洗次数以彻底去除氧化多酚。
Q7:DNA A260/A280比值偏低(<1.8)说明什么?
表示蛋白质或多酚残留。改善方法:确保裂解后充分离心,转移上清时避免吸入沉淀;Wash Buffer GB漂洗步骤务必彻底;最后空管离心1-2分钟确保乙醇完全挥发。
Q8:DNA A260/A230比值偏低(<2.0)怎么办?
通常表示多糖或盐类残留。改善方法:YPC Buffer按1.5倍样本体积加入并充分混匀静置;Wash Buffer GB充分洗涤离心柱;对于多糖极高的样本(如香蕉果肉),适当减少样本用量。
让最难提的植物样本,也变得简单从容
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