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人血与禽血能否用同一盒试剂提取 DNA?1 小时免酚氯仿方案

发布时间:2026-07-28

🩸 从人血到鸟血·1小时免酚氯仿:YALEPIC® 血液基因组DNA提取,基因组+线粒体+病毒DNA一步回收

雅礼生物 YALEPIC · 国家高新技术企业 · 硅胶膜离心柱法 · 货号 YC22004 · ¥300/50T

血液基因组DNA提取试剂盒是指利用硅胶膜离心柱纯化技术,从0.1~1ml新鲜或冷冻抗凝全血、血浆、血清等样本中快速分离高纯度基因组DNA(gDNA)、线粒体DNA(mtDNA)及病毒DNA的专用试剂组合。YALEPIC® YC22004 采用专用硅胶膜吸附技术,全程无苯酚/氯仿,1小时内完成提取(手动操作<20分钟),同时兼容禽类、鸟类、两栖类有核红细胞等特殊样本,是临床分子诊断、遗传筛查、法医DNA分型、兽医病原检测及基础科研的优选方案。

🔬 血样DNA提取的四大痛点

☠️

酚氯仿毒性大

传统酚氯仿抽提法需接触有毒有机溶剂,长期操作损伤呼吸道和神经系统,废液处理成本高,实验室安全隐患突出。

⏳

流程冗长耗时

传统方法裂解→酚抽→氯仿抽→异丙醇沉淀→乙醇洗涤,全程3~5小时,操作步骤多、转移次数多,DNA损耗大。

🩸

血红蛋白残留

血液中丰富的血红蛋白和血红素是强PCR抑制剂,去除不彻底会直接导致扩增失败、Ct值漂移或假阴性结果。

🐔

有核红细胞难提

禽类、鸟类、两栖类血液含成熟有核红细胞,常规人血试剂盒裂解不完全,DNA产率极低,需专用裂解体系适配。

⚙️ 硅胶膜离心柱法:四步完成提取

YALEPIC® 血液基因组DNA小量提取试剂盒基于硅胶膜可逆吸附原理:在高离液盐条件下,DNA选择性结合于硅胶膜表面,蛋白质、脂类、色素等杂质穿膜去除;经两次洗涤后,低盐洗脱液将纯净DNA从膜上释放。全程无需酚氯仿,操作仅四步:

1

裂解消化

血液样本+RCL Buffer+蛋白酶K,56℃孵育10分钟,彻底裂解细胞膜、消化蛋白质,释放基因组DNA。

2

结合吸附

加入YR Buffer(含离液盐),转移至Pure Columns YM硅胶膜柱,离心使DNA选择性吸附于膜上。

3

洗涤去杂

Wash Buffer GA和GB依次洗涤,去除血红蛋白、盐离子、脂质等PCR抑制物,空离心干燥膜1分钟。

4

洗脱收集

加YGE Buffer(50-200μl)于膜中央,室温孵育1-5分钟后离心,收集高纯度基因组DNA溶液。

💡 技术亮点:专用硅胶膜对核酸的吸附力远超普通滤膜,洗脱回收率>85%;裂解体系优化了离液盐浓度和pH,同时兼容人源无核红细胞和禽源有核红细胞,一盒通吃人血+禽血+两栖类血液。

✅ 六大核心优势

⏱️

1小时全流程·手动<20分钟

裂解10min+结合2min+洗涤4min+洗脱5min,全程不足1小时,手动操作时间<20分钟,日处理量可达50+样本。

🚫

全程无苯酚/氯仿

摒弃传统有机溶剂抽提,无毒无害,废液可直接排入下水道,无需专用通风橱和危废处理,实验室安全等级大幅提升。

🐔

兼容有核红细胞

独创裂解体系可高效裂解禽类、鸟类、两栖类成熟有核红细胞,5~20μl禽血即可获得高质量DNA,填补市场空白。

🧬

三重DNA一步回收

同一流程同时富集基因组DNA、线粒体DNA和病毒DNA,一份血样即可满足遗传分析、线粒体病研究和病原检测多重需求。

📊

高纯度·高得率

OD260/280稳定在1.7~1.9,200μl人全血可提取3~6μg DNA,无血红蛋白残留,直接上PCR/qPCR/NGS无需额外纯化。

📦

室温保存·免冷链

10~30℃室温保存,常温运输,保质期内无需-20℃储存,实验室备货便捷,野外采样现场提取也成为可能。

🎯 应用场景全景:从临床诊断到禽类研究

血液是临床和科研中最易获取的体液样本之一,从中提取的基因组DNA广泛应用于以下六大方向。YALEPIC® YC22004 凭借广谱样本兼容性和高纯度产出,可在同一平台上覆盖多领域需求:

🏥

临床分子诊断

从EDTA抗凝全血提取DNA,用于SNP基因分型、HLA配型、药物代谢酶多态性检测(如CYP2C19、CYP2D6)、遗传病筛查(如地中海贫血、苯丙酮尿症基因检测)。高纯度DNA确保qPCR扩增效率稳定,Ct值重复性好。

→ 适配:PCR / qPCR / 多重PCR / ARMS-PCR

🦠

病原核酸检测

血液中游离的病毒DNA(如HBV、EBV、CMV、B19)可被同步富集。提取后直接用于病毒载量定量、耐药突变检测和脓毒症病原体NGS检测。一步回收gDNA+病毒DNA,无需额外购买病毒DNA提取试剂盒。

→ 适配:qPCR / 数字PCR / 宏基因组NGS

🔬

肿瘤液体活检

从外周血中提取白细胞基因组DNA作为胚系对照,同时富集ctDNA进行体细胞突变分析。高纯度DNA保障靶向测序文库构建质量,低起始量样本(100μl)亦可获得有效DNA产出。

→ 适配:靶向面板测序 / 全外显子测序

⚖️

法医DNA分型

从血痕、血凝块、陈旧血样中提取DNA,用于STR分型、亲子鉴定、个体识别。试剂盒兼容EDTA/肝素/枸橼酸钠多种抗凝剂,冻存血样经缓慢解冻后仍可获得完整大片段DNA,满足法医STR扩增的片段完整性要求。

→ 适配:STR复合扩增 / 毛细管电泳

🐔

禽类/兽医研究

禽类、鸟类、爬行类、两栖类血液含成熟有核红细胞,常规人血试剂盒裂解不完全。YALEPIC® 专用裂解体系5~20μl禽血即可高效提取,适用于家禽品种鉴定、禽病原检测(如禽流感)、保护遗传学研究。

→ 适配:PCR / qPCR / 微卫星标记 / SSR

🧪

基础科研与建库

提取的基因组DNA可直接用于限制性酶切、Southern印迹杂交、基因文库构建、甲基化分析(MS-PCR/Bisulfite测序)、线粒体DNA全测序等。DNA片段完整(>30kb),满足酶切和建库对大片段的需求。

→ 适配:酶切 / Southern blot / NGS建库 / 亚硫酸盐测序

📋 典型样本类型与推荐用量

样本类型 推荐用量 典型DNA产量 下游应用建议
人EDTA抗凝全血 200μl 3~6μg PCR/qPCR/SNP分型/HLA
人冷冻全血 200~300μl 2~5μg STR分型/遗传筛查
血浆/血清 200μl~1ml 0.1~2μg 病毒DNA检测/ctDNA
血沉棕黄层(白膜层) 200μl 5~10μg NGS建库/全外显子测序
禽类/鸟类抗凝全血 5~20μl 2~8μg 品种鉴定/禽病原检测/SSR
两栖类抗凝全血 5~20μl 1~5μg 保护遗传学/线粒体分析
1×10⁷白细胞 200μl悬液 5~10μg 甲基化分析/酶切/Southern

📦 产品规格与组分明细

序号 组分名称 YC22004 (50T) 说明
① RCL Buffer 25 ml 红细胞裂解液,去除无核红细胞
② YR Buffer 15 ml 结合液,含离液盐促进DNA膜吸附
③ YG Buffer 15 ml 裂解结合缓冲液(高离液盐体系)
④ Wash Buffer GA 13 ml 洗涤液A(去蛋白、去脂质)
⑤ Wash Buffer GB 16 ml 洗涤液B(去盐、去色素)
⑥ YGE Buffer 15 ml 低盐洗脱液(TE体系),pH稳定
⑦ Proteinase K 1.2 ml 蛋白酶K,56℃消化蛋白质
⑧ Pure Columns YM + 收集管 50 T 高吸附硅胶膜离心柱

💾 保存条件:10~30℃室温保存,常温运输。

⏳ 保质期:未开封室温保存1年以上,蛋白酶K长期储存建议分装置-20℃。

💰 目录价:¥300.00 / 50T,雅礼生物YALEPIC品牌,国家高新技术企业。

⚖️ 柱式法 vs 酚氯仿法 vs 磁珠法:血液DNA提取方案对比

对比维度 🧪 酚氯仿法 🩸 YALEPIC 柱式法 🧲 磁珠法
提取用时 3~5小时 1小时 30~60分钟
毒性 ☠️ 有毒(苯酚/氯仿) ✅ 无毒 ✅ 无毒
DNA纯度(OD260/280) 1.6~1.9(波动大) 1.7~1.9(稳定) 1.7~1.9(稳定)
DNA片段大小 50kb 30~50kb 20~50kb
有核RBC兼容 ⚠️ 需额外优化 ✅ 原生支持 ⚠️ 视品牌而定
设备需求 离心机+通风橱 普通离心机 磁力架/自动化
操作复杂度 🔴 高 🟢 低 🟢 低
单样本成本 ~¥2 ~¥6 ~¥10~20
高通量兼容 ❌ 不适合 ⚠️ 勉强 ✅ 自动化
洗脱体积 50~500μl 50~200μl 50~200μl
推荐使用场景 超大片段需求 临床/科研常规使用 高通量/自动化

❓ 常见问题 FAQ

Q1:血液基因组DNA提取需要多长时间?

整个流程通常在30~40分钟内完成。具体步骤:样本裂解10分钟、结合2分钟、两次洗涤各1分钟、干燥膜1分钟、洗脱1分钟。若洗脱前将缓冲液60℃预温并孵育5分钟,得率可提升10%~15%,全程约45分钟。

Q2:提取的DNA能直接用于qPCR或测序吗?

完全可以。提取的基因组DNA纯度OD260/280通常在1.7~1.9之间,无血红素和蛋白残留,不含有机溶剂,可直接用于常规PCR、qPCR、多重PCR、NGS文库构建、甲基化分析等。对数字PCR建议洗脱后用TE缓冲液稀释后再加样,避免微量盐离子影响微滴生成。

Q3:DNA得率低怎么办?

常见原因及对策:①白细胞数量少(免疫缺陷样本),可增加采血量或离心富集白细胞层;②冻存血未充分混匀,取出后置冰上缓慢解冻并颠倒混匀;③蛋白酶K裂解不充分,确认试剂未过期、56℃孵育延长至20分钟;④洗脱液未垂直滴于膜中央,室温孵育2~5分钟后再离心。若仍无改善,建议荧光定量法(如Qubit)检测以排除单链DNA降解。

Q4:能用肝素抗凝全血提取吗?

可以使用肝素抗凝全血,但肝素对PCR有潜在抑制作用。建议裂解前用PBS洗涤细胞1~2次,或增加一次Wash Buffer洗涤以去除残余肝素。提取后应检测OD260/230比值确保>1.8。若仍出现扩增抑制,可将DNA用3M醋酸钠/乙醇沉淀重溶,或选用肝素耐受性更强的聚合酶。

Q5:柱式法和磁珠法血液DNA提取试剂盒怎么选?

柱式法无需磁力架,只需普通台式离心机,单次处理样本量灵活,洗脱体积小(可低至50μl),DNA浓度更高,更适合样本量有限的实验。柱式法成本仅为磁珠法的1/3~1/2。大部分科研和临床常规检测柱式法已完全满足需求,只有全自动大批量(>96样本/天)提取时磁珠法才有通量优势。

Q6:提取的DNA如何保存?反复冻融有影响吗?

纯化后基因组DNA建议分装后-20℃保存,可稳定保存2年以上;长期保存可置于-80℃。避免反复冻融——每次冻融会造成大片段DNA机械剪切断裂,导致平均长度降低。每管DNA溶液冻融次数应控制在3次以内。

Q7:能同时提取病毒DNA吗?和专门的病毒DNA试剂盒有什么区别?

YC22004的裂解体系可同时裂解白细胞、红细胞(有核/无核)以及血液中游离的病毒颗粒,因此一份血样可同时回收基因组DNA+线粒体DNA+病毒DNA。与专门的病毒DNA提取试剂盒相比,柱式法的洗涤步骤同样高效去除血红素等PCR抑制剂,提取的病毒DNA可直接用于qPCR检测。区别在于病毒DNA的丰度更低,若要专门做病毒载量检测且样本量<50μl时,建议使用专用病毒试剂盒。

Q8:禽类血液用量为什么只有5~20μl?与人血200μl差距这么大?

禽类、鸟类和两栖类血液含有成熟有核红细胞,每个红细胞中有一个细胞核,DNA含量远高于人血(无核红细胞)。5~20μl禽血所含的白细胞+有核红细胞DNA总量已接近甚至超过200μl人血,因此只需微量血样即可获得充足DNA,这是有核红细胞样本的天然优势。

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货号 YC22004 · 50T · ¥300.00 · 室温保存 · 现货供应 · 全国冷链/常温配送

📚 参考文献与延伸阅读

  1. Boom R, Sol CJ, Salimans MM, et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. Journal of Clinical Microbiology, 1990, 28(3): 495–503.
  2. QIAGEN. QIAamp DNA Blood Mini Kit Handbook. 2023. 硅胶膜离心柱法从血液中提取基因组DNA的标准参考方案。
  3. Miller SA, Dykes DD, Polesky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Research, 1988, 16(3): 1215.
  4. Butler JM. Forensic DNA Typing: Biology, Technology, and Genetics of STR Markers. 2nd ed. Elsevier Academic Press, 2005. 血液DNA在法医STR分型中的应用。
  5. Ghatak S, Muthukumaran RB, Nachimuthu SK. A simple method of genomic DNA extraction from human samples for PCR-RFLP analysis. Journal of Biomolecular Techniques, 2013, 24(4): 224–231. 血液DNA提取方法学比较。
  6. Mulero JJ, Chang CW, Lagacé RE, et al. Development and validation of the AmpFlSTR MiniFiler PCR Amplification Kit. Journal of Forensic Sciences, 2008, 53(4): 838–852. 血液/血痕样本在法医STR扩增中的应用验证。


常见问题

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