YALEPIC^® All-in-RT RedMix (gDNA off)

YALEPIC^® All-in-RT RedMix (gDNA off) 是第一链cDNA合成及gDNA一步法去除的红色示踪法逆转录试剂盒。该试剂盒采用新一代高温逆转录酶YALEPIC^® Script Reverse Transcriptase Plus及优化的逆转录缓冲液，反应温度反应温度45-60℃，可在30 min内高效地制备cDNA的逆转录反应，同时热敏型dsDNase能够特异性去除双链DNA，保证cDNA的完整性，实现去除基因组污染与逆转录反应的同步进行。只需加入模板RNA和水即可迅速进行反应，合成的第一链cDNA适用于文库构建、PCR、qPCR、杂交等分子实验。

• 一步到位，省时省力：逆转录与gDNA去除同步进行，无需分步操作，避免了传统两步法因复杂加样造成的样品污染和RNA降解风险。
• 红色示踪，加样无忧：预混液中加入经过优化的红色示踪染料，加样过程可视化，有效降低多孔板操作中错加、漏加的概率，且染料不干扰下游染料法或探针法qPCR的荧光信号采集。
• 热敏型dsDNase，gDNA去除更彻底：热敏型双链DNA特异性核酸酶可选择性地消化双链DNA，对单链DNA及RNA无活性。在55℃条件下5分钟即可不可逆失活，不会对后续产生的cDNA造成任何影响。
• 高效逆转录，兼容性强：新一代逆转录酶具有出色的热稳定性（45–60℃）和复杂模板通读能力，适用于GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。合成的第一链cDNA可广泛应用于文库构建、PCR、qPCR、杂交等分子生物学实验。

本产品适用于各类物种样本的RNA逆转录反应，下游可进行染料法及探针法的qPCR实验、cDNA文库构建及RT-PCR扩增检测。尤其适用于对定量准确性要求较高的基因表达分析、低丰度基因检测以及高通量基因表达谱研究。

-20℃ 保存，＜0℃ 运输。

Q1：为什么要去除基因组DNA（gDNA）？不去除会怎样？

在RT-qPCR实验中，RNA样品中残留的基因组DNA是最隐蔽且最具破坏性的污染源。gDNA与cDNA序列高度同源，会被qPCR引物非特异性扩增，导致假阳性结果，特别是低表达量基因（Ct值较大）更容易受到gDNA污染的干扰。如果在不含逆转录酶的对照管中出现扩增产物，说明必须从RNA样品中去除残留的gDNA。

Q2：一步法去除gDNA与传统两步法相比有什么优势？

传统两步法需要先用DNase I处理RNA模板，然后进行85℃热失活，最后再加入反转录组分进行逆转录，步骤繁琐且耗时约30分钟。一步法则将gDNA去除与逆转录反应在同一管中同步完成，只需加入模板RNA和水即可迅速反应，极大简化了操作，避免了复杂加样过程中的样品污染和RNA降解风险-。

Q3：该产品中的热敏型dsDNase与普通DNase I有什么区别？

普通DNase I对单链DNA也具有明显的降解活性，可能会影响引物和探针的稳定性。而热敏型dsDNase可特异性消化双链DNA，对单链DNA、引物、探针和RNA均无活性，确保cDNA的完整性。同时，该酶在55℃条件下5分钟即可不可逆失活，无需额外热失活步骤。

Q4：红色示踪染料会影响下游qPCR的荧光信号吗？

不会。产品中的红色示踪染料经过精心优化，不会对下游染料法或探针法qPCR的荧光信号采集产生干扰，可保证扩增灵敏度和平台期不受影响。

Q5：该产品适合哪些类型的RNA模板？

本产品适用于各类物种样本的RNA模板。新一代逆转录酶具有出色的高温稳定性和复杂模板通读能力，特别适用于GC含量高、二级结构复杂的RNA模板，以及低浓度RNA样品的逆转录反应。

Q6：RNA模板的用量范围是多少？

建议RNA模板用量为500 ng–1 μg（总RNA）。经验证，本产品可稳定扩增10 pg–1 μg范围内的总RNA，适用于低丰度基因的检测。

Q7：如何验证gDNA已被彻底去除？

可通过设置“无逆转录酶对照”（No-RT Control）进行验证：在反应体系中不加入逆转录酶，其他组分正常加入，然后进行qPCR检测。如果No-RT对照管中无扩增信号出现，说明gDNA已被成功去除。

Q8：产品如何保存？反复冻融是否影响性能？

建议长期保存于-20℃，＜0℃运输。使用后请及时放回-20℃保存以保证酶活性。应避免反复冻融，建议分装保存。

Q9：合成的cDNA可以用于哪些下游实验？

合成的第一链cDNA可广泛应用于文库构建、普通PCR、qPCR（染料法及探针法）、杂交等分子生物学实验。

Q10：反应温度如何设置？

本产品可在45–60℃范围内进行逆转录反应。对于具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，建议适当提高反应温度（如55℃），有助于提升扩增效率和灵敏度