YALEPIC^® 一步gDNA去除及第一链cDNA合成试剂盒

YALEPIC^® One-Step gDNA Off and 1st Strand cDNA Synthesis Kit是雅礼生物自研一步法同步去除基因组 DNA + 第一链 cDNA 合成逆转录试剂盒，采用新一代无 RNase H 活性 YALEPIC^® Script 逆转录酶，热稳定性优异，最佳反应温度 55℃，区间可在 50~60℃灵活调控，针对含复杂二级结构 RNA 模板反转录场景优化，最长可合成≤15kb 大片段 cDNA。

试剂盒内置预混新型 dsDNase 双链 DNA 酶，可与逆转录同步反应去除 RNA 样本内源 gDNA 污染，55℃即可快速失活 DNase，无需单独除基因组步骤，规避分步操作 RNA 降解风险；配套独立分装 Oligo (dT)₂₀锚定引物与 Random Hexamers 随机六聚体引物，科研人员可按需自由切换引物类型，合成后的 cDNA 产物稳定性强，直接适配 RT-PCR、荧光定量 RT-qPCR、基因表达谱分析、cDNA 文库构建等全流程分子实验。

• 动植物组织、细胞总 RNA 的第一链 cDNA 合成；
• RT-PCR 半定量基因表达检测、荧光定量 RT-qPCR 定量分析；
• 原核 / 真核样本 cDNA 文库前期构建；
• 微量 RNA 样本反转录（低丰度基因扩增实验）；
• 需去除内源 gDNA 污染的全转录组小样本制备实验。

随机引物、锚定引物独立，去gDNA，双Mix形式!

-20℃ 保存，＜ 0℃ 运输。

Q1：什么是“一步法gDNA去除及第一链cDNA合成试剂盒”？与传统两步法相比有何优势？

A1：一步法gDNA去除及第一链cDNA合成试剂盒是在同一反应体系中同时完成基因组DNA（gDNA）去除和第一链cDNA合成两大步骤的创新产品。传统两步法需要先用DNase I处理去除gDNA，再进行RNA纯化和cDNA合成，操作繁琐且容易造成RNA降解和损失。本产品采用具有DNA分解活性的特殊gDNA Remover（热敏dsDNase），与新一代逆转录酶协同工作，一步加样即可同步完成gDNA去除与cDNA合成，极大简化了操作流程，避免了多次加样带来的样品交叉污染和RNA降解风险，尤其适合高通量基因表达分析和微量RNA样品的处理。

Q2：本试剂盒可以合成多长的cDNA片段？对复杂RNA模板的效果如何？

A2：本试剂盒采用新一代YALEPIC^® Script逆转录酶，可在50~60℃（最佳55℃）温度范围内合成最长15 kb的第一链cDNA。高温逆转录条件可有效打开RNA模板的二级结构，因此特别适合GC含量高、富含二级结构的复杂RNA模板（如具有发夹结构、高级折叠的RNA）的逆转录实验。相比在37℃或42℃条件下反应的常规逆转录酶，本产品的耐热性更优，复杂模板的cDNA得率和全长比例显著提升。

Q3：gDNA去除组分会不会影响后续的cDNA合成或qPCR检测？

A3：不会。本试剂盒采用的热敏dsDNase具有特异性降解双链DNA（即基因组DNA）的能力，而对单链RNA和单链cDNA无活性影响。该酶在55℃反应条件下可快速不可逆失活，完成gDNA去除任务后自动失去活性。反应结束后仅需85℃加热2~5分钟即可彻底灭活所有酶组分，不会对cDNA产物的稳定性和后续qPCR检测产生任何干扰。经本产品处理的cDNA可长久稳定保存，qPCR定量结果可靠，引物设计也无需跨外显子设计，简化了实验设计流程–。

Q4：试剂盒中包含哪些逆转录引物？能否使用基因特异性引物（GSP）？

A4：本试剂盒以单组分形式分别提供Oligo(dT)20和Random Hexamers（N6随机引物） 两种逆转录引物，用户可根据实验需求灵活选择或组合使用：

• Oligo(dT)20：特异性结合mRNA的poly(A)尾，适合检测具有poly(A)结构的真核生物mRNA；
• Random Hexamers：随机结合RNA模板各区域，适合总RNA、原核生物RNA、病毒RNA及非编码RNA（lncRNA、ncRNA）的逆转录。
• 此外，用户也可以根据实验设计使用基因特异性引物（GSP） 替代上述引物，进行靶向基因的逆转录反应。如进行qPCR检测，建议将Oligo(dT)与Random引物混合使用，可获得更全面的cDNA覆盖率。

Q5：本产品的RNA模板推荐用量是多少？微量RNA样品能否使用？

A5：本产品推荐的RNA模板用量最佳范围为50 ng ~ 2 μg总RNA（20 μL反应体系）。若总RNA量超过2 μg，请按比例扩大反应体系。由于试剂盒中采用的gDNA Remover和逆转录酶具有高效的工作性能，产品对低浓度RNA模板具有极好的兼容性——即使RNA模板体积可加到总反应体积的75%~80%，仍能保证稳定有效的逆转录效率。因此，本试剂盒特别适合微量RNA样品（如激光显微切割获得的少量细胞、稀有组织样本）的基因表达分析。

Q6：合成的cDNA可以用于哪些下游实验？能否同时用于PCR和qPCR？

A6：合成的第一链cDNA适用范围广泛：

• RT-qPCR：兼容SYBR Green染料法和TaqMan探针法定量PCR，结果准确可靠；
• RT-PCR：可用于常规PCR扩增目的基因片段；
• cDNA文库构建：可合成长达15 kb的全长cDNA，适合文库构建；
• 基因表达分析：适用于高拷贝和低拷贝基因检测；
• 引物延伸：用于转录起始位点分析；
• SAGE：用于基因表达连续分析。

本产品合成的cDNA可同时用于常规PCR和qPCR检测，尤其推荐用于需要高灵敏度定量分析的qPCR。

Q7：产品应该如何保存和运输？反复冻融会影响产品性能吗？

A7：本产品建议在-20℃条件下长期保存，避免反复冻融。初次使用前请将各组分充分解冻、混匀并离心收集至管底后分装使用。反复冻融会导致酶活性下降，影响反应效率，因此建议将试剂盒分装为小份（如按10次反应分装），每次取用一份。产品运输条件为干冰/冰袋运输（＜0℃），确保产品在运输过程中保持低温状态。在推荐保存条件下，产品有效期为12个月。

Q8：如果qPCR检测结果出现Ct值偏高或无信号，可能是什么原因？

A8：qPCR检测出现Ct值偏高或无信号通常有以下几种可能原因及解决方案：

若问题持续存在，建议设置不含逆转录酶的阴性对照（No-RT Control），以排除基因组DNA残留污染引起的假阳性信号–。

Q9：本产品与市场上其他品牌的区别是什么？

A9：与主要竞品相比，雅礼的核心差异化在于：引物以单组分形式独立提供，用户可以自由搭配Oligo(dT)和Random引物的比例，甚至替换为基因特异性引物（GSP），灵活度远高于竞品的预混模式。这一设计尤其适合需要精准调控引物配比的专业研究场景。

Q10：产品中含有RNase抑制剂吗？如何确保RNA不被降解？

A10：是的，本产品的逆转录MasterMix中已预加了高效的RNase抑制剂（RNase Inhibitor），可在整个反应过程中有效保护RNA模板不被降解，确保cDNA合成的完整性和产量。为进一步确保RNA稳定性，建议用户在实验操作中注意以下几点：

• 全程在冰上操作，低温条件可抑制RNase活性；
• 使用RNase-free的枪头、离心管等耗材；
• 操作过程中佩戴口罩和手套，避免RNase污染；
• RNA样品应避免反复冻融，建议分装保存。