YALEPIC^® DNA/RNA通用型转染试剂-LFDR

YALEPIC^® DNA/RNA Transfection Reagent-LFDR是一款高效便捷的DNA/RNA通用型转染试剂，对于常用贴壁细胞株，如HeLa、B16F10、A549、HepG2、MRC-5，以及一些较难转染细胞株，如L929、NIH3T3、LLC、U14、M38等，均可获得较高的转染效率。本产品兼具与DNA或RNA的高效复合及转染后快速释放的能力，确保优异的转染性能和极低的细胞毒性，转染复合物形成后，可直接加入完全培养基，不受血清和抗生素影响，转染前后无需更换培养基。具有不受血清影响、毒性低、稳定性好、操作便捷、重复性高等优点。

• 广谱通用：全能型DNA/RNA 共转染试剂，适配常规贴壁细胞与各类难转染细胞，适用分子类型广，普适性拉满。
• 转染高效：快速将 DNA、siRNA 等核酸分子同步递送至细胞内部，转染效率稳定，满足高通量实验要求。
• 超低毒性：配方温和，对细胞损伤极小，有效避免细胞凋亡、飘死，保障细胞正常生理状态。
• 操作极简：支持血清、抗生素共存，全程无需更换培养基，仅用无血清培养基稀释质粒即可开展实验。
• 稳定可重复：试剂受环境、温度影响小，批次差异低，瞬转实验结果稳定，平行实验数据一致性高。

▸ **核酸类型**：
  - 质粒DNA单独转染（含瞬时转染和稳定转染）
  - siRNA/miRNA单独转染（RNA干扰基因沉默实验）
  - 质粒DNA与siRNA高效共转染（基因过表达+基因沉默同步进行）

▸ **适用细胞类型**（已验证细胞系）：

  | 细胞类型     | 代表细胞系                      |
  | 常用贴壁细胞 | HeLa、B16F10、A549、HepG2、MRC-5 |
  | 难转染细胞 | L929、NIH3T3、MCF-7、LLC、U14、M38 |
  | 其他细胞系 | 经预实验验证后可扩大适用范围 |

▸ **典型应用场景**：
  - 基因功能研究：同时过表达靶基因并沉默相关调控基因
  - RNA干扰效率验证：共转染GFP报告质粒与靶向GFP的siRNA
  - 信号通路研究：同时调控通路中多个关键基因的表达
  - 蛋白质-蛋白质相互作用分析：共转染编码不同蛋白的两个载体
  - 病毒包装：共转染包装质粒和表达质粒以生产病毒颗粒
  - CRISPR-Cas9基因编辑：共转染Cas9表达质粒与sgRNA载体

▸ **不适用场景**：
  - 悬浮细胞及原代神经元、干细胞等极难转染细胞建议预实验评估效果
  - 大于6000 bp的大质粒DNA建议选用雅礼生物大质粒专用转染试剂
  - mRNA转染推荐选用雅礼生物专用mRNA转染试剂产品

常温运输，2 ~ 8℃ 保存，不可冷冻。

Q1：YALEPIC DNA/RNA通用型转染试剂-LFDR可以转染哪些类型的核酸？支持共转染吗？

A： 本产品是一款DNA/RNA通用型转染试剂，支持以下使用方式：

• 质粒DNA单独转染：适用于基因过表达、报告基因检测等实验

• siRNA/miRNA单独转染：适用于RNA干扰基因沉默实验

• 质粒DNA与siRNA共转染：可同时将DNA和siRNA递送至同一细胞中，实现基因过表达和基因沉默的同步进行

对于需要同时评估基因过表达效果和基因敲减效率的研究场景，共转染功能可显著提升实验效率和数据可比性。

Q2：本产品与YALEPIC DNA转染试剂-LFD有什么区别？如何选择？

A： 两款产品均具备血清兼容、低毒性、操作便捷等核心特性，主要区别如下：

选择建议：仅需进行质粒DNA转染实验，推荐LFD；需要进行RNA干扰实验，或同时进行DNA转染和RNA干扰实验（共转染），推荐LFDR。

Q3：转染时是否需要使用无血清培养基？是否受抗生素影响？

A： 不需要。YALEPIC  LFDR与LFD一样，具有不受血清和抗生素影响的特性。转染复合物形成后可直接加入含血清和抗生素的完全培养基中，转染前后均无需更换培养基。这一特性与许多传统转染试剂（如Lipofectamine 2000等）形成鲜明对比，简化了实验操作流程。

Q4：DNA/siRNA共转染时，如何优化转染试剂与核酸的最佳比例？

A： 本产品为DNA和siRNA分别设定了比例优化范围：

• LFDR（μl）：DNA（μg）：建议在1:1至5:1之间进行梯度优化

• LFDR（μl）：siRNA（pmol）：建议在0.02:1至0.15:1之间进行梯度优化

进行DNA-siRNA共转染时，建议采用“分别复合法”：即使用LFDR分别与DNA和siRNA形成复合物（各自按优化比例配制），再将两个复合物体系分两次分别加入同一个装有细胞的实验孔中-1。分别配制的策略可以确保两种核酸都能获得最优的结合效率。

Q5：本产品可以用于哪些难转染细胞？效果如何？

A： YALEPIC LFDR专门针对难转染细胞进行了优化验证，已验证可高效转染的难转染细胞株包括：

• 小鼠成纤维细胞：L929、NIH3T3

• 乳腺癌细胞：MCF-7

• 肺癌细胞：LLC

• 小鼠宫颈癌细胞：U14

• 小鼠黑色素瘤细胞：M38

此外，对于HeLa、B16F10、A549、HepG2、MRC-5等常用贴壁细胞同样可获得较高的转染效率。对于原代神经元、悬浮细胞等极难转染细胞，建议预实验评估效果。

Q6：转染效率偏低可能是什么原因？如何解决？

A： 常见原因及解决方案如下：

Q7：转染后细胞死亡较多是什么原因？如何降低细胞毒性？

A： 细胞死亡通常与以下因素相关：

• 转染试剂用量过高 → 减少LFDR用量并在推荐比例范围内重新优化

• 细胞密度过低 → 转染前确保细胞融合度达到60%-70%

• DNA纯度不足 → 内毒素会显著增加细胞毒性，务必使用去内毒素级别的质粒DNA

• 核酸用量过大 → 合理设置DNA/siRNA用量梯度，从较低浓度开始优化

YALEPIC  LFDR本身具有极低的细胞毒性设计，在优化条件后通常可获得理想的细胞存活率。

Q8：共转染时，siRNA的基因沉默效果不如单独转染时明显，为什么？

A： 共转染时siRNA沉默效率低于单独转染是较为常见的现象，主要原因包括：

• DNA与siRNA竞争转染试剂：在同一体系中，DNA和siRNA可能竞争结合转染试剂，影响各自的复合效率

• 转染时间窗口差异：DNA和siRNA进入细胞后的作用和降解动力学不同，最佳检测时间窗口可能存在差异

优化建议：

1. 按照说明书推荐方法，采用“分别复合再混合添加”的方式进行共转染

2. 增加siRNA用量，同时保持转染试剂用量相应增加

3. 分别优化DNA和siRNA单独转染的最佳条件后，再进行共转染的比例梯度优化

4. 适当延长检测时间（siRNA沉默效果通常在转染后48-72小时达到峰值）

Q9：转染后多久可以检测基因表达？DNA和siRNA的检测时间是否相同？

A： DNA转染和siRNA转染的推荐检测时间有所不同：

共转染时，建议在转染后48小时同时检测DNA和siRNA的效应。最佳检测时间取决于具体细胞类型和目的基因的表达特性，建议根据预实验结果确定。

Q10：YALEPIC  LFDR的保存条件是什么？有效期多长？

A： 本产品常温运输，收货后请于2-8℃冷藏保存，严禁冷冻（-20℃及以下会破坏脂质体结构，导致活性丧失）。有效期自生产之日起12个月。使用后请及时盖紧瓶盖并放回2-8℃保存，避免反复开盖导致污染或活性下降。首次使用前请将产品恢复至室温并轻轻混匀，请勿涡旋振荡或剧烈摇晃。

Q11：本产品可以用于mRNA转染吗？

A： YALEPIC  LFDR主要针对质粒DNA和siRNA转染进行了优化。对于mRNA转染，由于其分子结构和递送要求的特殊性，建议选用雅礼生物专用mRNA转染试剂产品。如需进行mRNA转染实验，欢迎联系雅礼生物技术支持获取针对性推荐。