YALEPIC^® 高灵敏qPCR预混液UDG（探针法）VK

• YALEPIC^® Probe qPCR MasterMix (UDG) VK是雅礼生物专为探针法实时荧光定量PCR（qPCR）研发的高灵敏度预混液。本产品采用基于抗体修饰法改造的新一代热启动DNA聚合酶，配合针对低拷贝数模板优化的专用缓冲液体系，可有效抑制非特异性扩增与引物二聚体形成，极大提升qPCR扩增特异性、扩增效率与检测灵敏度，尤其适合高GC含量模板及cfDNA等低丰度样本的定量检测。
• 产品内置UDG尿嘧啶DNA糖基化酶 + dUTP防污染双系统，可在扩增前降解含dU的PCR产物，从根源杜绝气溶胶交叉污染，确保在宽广动态范围内对靶基因进行准确绝对定量与相对定量，检测重复性优异（CV＜5%）。
• 本品为2×浓缩预混液，使用时仅需加入模板DNA/cDNA、上下游探针引物、ROX Reference Dye（依仪器选配）及ddH₂O即可上机反应，操作简便，减少加样误差，特别适合高通量qPCR实验与临床检测场景。

-20℃ 保存，＜ 0℃ 运输。

 Q1：探针法qPCR预混液与染料法（SYBR Green法）有什么区别？如何选择？

A： 探针法qPCR（如TaqMan法）通过靶向特异性探针与目标序列的互补结合产生荧光信号，具有更高的特异性和多重检测能力，适用于SNP分型、等位基因鉴定等需要高分辨率的应用，但成本和引物探针设计要求较高。染料法（SYBR Green法）通过荧光染料与双链DNA结合检测信号，成本低且通用性强，但特异性相对较低，无法区分非特异性扩增产物。本产品为探针法专用预混液，适合对特异性要求较高的实验场景。

Q2：这款qPCR预混液的防污染系统是如何工作的？需要用户额外添加成分吗？

A： 本产品内置dUTP/UDG防污染系统，预混液中已包含dUTP和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）。在qPCR反应开始前的室温条件下，UDG可选择性地剪切含有dUTP的PCR污染物（气溶胶），使其无法作为扩增模板；而在PCR热循环启动后（通常＞50℃），热敏UDG会不可逆失活，不影响后续扩增效率。用户无需额外添加任何防污染组分，即开即用。

Q3：本产品适用于哪些qPCR仪器平台？ROX Reference Dye如何选择？

A： 本产品提供50× ROX Reference Dye 1和50× ROX Reference Dye 2两种版本。选择建议如下：ABI 7900HT/7300 Real-Time PCR System及StepOnePlus等仪器使用ROX Reference Dye 1；ABI 7500/7500 Fast/Stratagene Mx3000P等仪器使用ROX Reference Dye 2；Roche LightCycler系列及Bio-Rad CFX系列等不需要添加ROX的仪器可无需添加。不同机型对ROX参比荧光的需求不同，请确认仪器型号后正确选择。

相关长尾关键词：qPCR仪器ROX选择、ABI 7500 ROX设置、不同qPCR仪适配

Q4：本产品可以用于多重qPCR吗？最多支持几重？

A： 可以。本产品基于优化的缓冲液体系和热启动DNA聚合酶，适合进行多重荧光探针qPCR检测，最多可支持至少四重靶标的同时检测。产品在不同荧光通道（FAM/VIC/CY5等）中具有良好的信号分离度和扩增性能一致性。

Q5：这款预混液能检测低拷贝模板吗？灵敏度如何？

A： 可以。本产品针对低拷贝模板进行了专门的缓冲液优化，配合新一代热启动DNA聚合酶，可检测低至20μl体系中＜10个拷贝的核酸模板，在低丰度靶标的检测中表现出优异的扩增效率和线型，适用于稀有转录本检测、微量病原检测等应用。

Q6：本产品需要如何保存？反复冻融会影响性能吗？

A： 本产品推荐在-20℃条件下长期保存，运输及短期存储应保持在0℃以下。经冻融稳定性验证，产品在反复冻融50次后仍可保持扩增性能稳定（Ct值偏差在±0.5以内），但为避免不必要的性能波动，建议首次使用后进行分装保存，减少反复冻融次数。

Q7：产品出现扩增曲线异常（如“翘尾”、平台期低）怎么办？

A： 扩增曲线异常通常可从以下方面排查：（1）检查模板浓度，过高或过低均可能导致曲线异常，可尝试梯度稀释后重新检测；（2）确认引物和探针设计质量及浓度配比是否合理；（3）检查反应体系中是否存在气泡，上机前需离心去除；（4）确认荧光信号采集步骤是否正确设置，TaqMan探针法一般在退火结束或延伸结束时采集信号，不可与染料法混用；（5）排除耗材和仪器的孔间交叉干扰。如问题持续，建议使用阳性对照验证试剂性能。

Q8：这款产品支持快速qPCR程序吗？

A： 支持。本产品兼容快速qPCR扩增程序，可在缩短的循环时间内完成扩增检测，有助于提升实验室检测通量。在快速程序下，产品仍能保持良好的扩增效率（经测试可＞99%）和检测一致性。

Q9：产品出现非特异性扩增或NTC阴性对照有信号怎么办？

A： 非特异性扩增和NTC（无模板对照）出现信号通常由以下原因导致：（1）引物设计不够优化，存在二聚体或发夹结构；（2）退火温度过低，优化方式可尝试适当提高退火温度（通常2-5℃增幅）；（3）镁离子浓度过高，可适当降低或选择更匹配的预混液体系；（4）环境中存在气溶胶污染，本产品内置的dUTP/UDG防污染系统对此有有效抑制作用，但仍建议加强实验室规范操作。