YALEPIC^® UR高灵敏qPCR预混液（染料法）

• YALEPIC^® UR SYBR Green qPCR MasterMix  是2× 浓度染料法荧光定量 PCR 预混液，采用抗体封闭型热启动 DNA 聚合酶独家配方，专为低拷贝模板、高 GC 含量难扩增基因优化缓冲液体系，从源头抑制引物二聚体与非特异性扩增，显著提升 qPCR 扩增效率与样本检测灵敏度。
• 本款高灵敏 qPCR 预混液为即用型体系，常规实验仅需添加待测模板、上下游引物、ROX 参比染料（按需选配）、赠送无菌 ddH₂O即可配制反应体系，无需额外配制 dNTP、缓冲液、SYBR Green I 染料，大幅简化基因定量实验操作；广泛适配 ABI、罗氏、伯乐等全品牌 qPCR 仪，可落地基因表达定量、SNP 等位基因分型、药物靶点筛选、疾病致病基因研究等分子实验场景，是高校实验室、药企研发、第三方医学检测机构优选染料法 qPCR 试剂。

• 基因表达水平分析：mRNA、lncRNA等各类RNA转录本的相对定量与绝对定量分析
• SNP分型与等位基因鉴别：单核苷酸多态性分析、等位基因特异性定量
• 药物靶点验证与机制研究：药物作用候选靶基因的表达变化功能验证
• 疾病标志物与病理机制研究：低丰度疾病相关生物标志物的发现与验证
• 高GC含量复杂模板扩增：富含GC序列的特殊基因或启动子区域研究
• 低拷贝数基因检测：微量样本或低表达基因的稳定检出与定量分析
• 病毒载量与病原体检测：快速定量检测病毒核酸、病原微生物分布

-20℃ 避光保存。

Q1：YALEPIC^® UR SYBR Green qPCR MasterMix与普通SYBR Green qPCR预混液相比有什么核心优势？

A：YALEPIC^® UR采用双物种抗体法热启动DNA聚合酶，具有更严格的低温封闭性，搭配针对低拷贝模板优化的增强型缓冲液，能有效抑制非特异性扩增和引物二聚体生成。相比常规qPCR预混液，本产品尤其适合低丰度目标基因的准确定量以及高GC含量复杂模板的扩增，在高灵敏度和扩增特异性方面表现突出，数据结果重复性更佳。

Q2：什么是抗体法热启动DNA聚合酶？对qPCR实验有什么帮助？

A：抗体法热启动DNA聚合酶是通过特异性抗体与Taq酶结合，在低温（如室温至55℃）下封闭聚合酶活性，仅当PCR反应进入高温变性阶段（通常≥90℃）后抗体失活并释放活性的设计。这种机制能显著抑制反应体系在初始设定阶段可能产生的引物二聚体和非特异性扩增，明显提高检测特异性和扩增效率，尤其适用于低拷贝模板和高灵敏度检测实验，有效提升数据准确性和可信度。

Q3：这款qPCR预混液是否兼容不同品牌的qPCR仪器？ROX该如何选择添加？

A：YALEPIC^® UR SYBR Green qPCR MasterMix随货提供双管独立的ROX Reference Dye。用户可根据所用qPCR仪器的型号要求添加ROX—若仪器需要ROX校正（如ABI 7500、StepOnePlus等），按推荐量加入；若仪器无需ROX校正（如BIO RAD系列等），则直接添加ddH₂O即可。双管独立ROX设计保障了产品对不同品牌仪器的全面兼容能力。

Q4：本产品能否检测低拷贝数基因？低浓度模板下检测效果如何？

A：可以。YALEPIC^® UR专为低拷贝模板检测进行了缓冲体系和酶配方的深度优化，能够有效提升低丰度模板的扩增效率和检测灵敏度。在长达6个数量级的动态范围内保持良好的线性关系和重复性，即使面对Ct值较高的低表达样本，仍可获得稳定可靠的定量结果，特别适用于临床样本、稀有细胞以及病毒载量分析等低丰度检测场景。

Q5：如何优化qPCR实验的灵敏度，以获得更低的Ct值？

A：针对低丰度目标基因Ct值偏高（Ct > 32）的情况，建议采用以下优化策略：1）选择高灵敏度的qPCR预混液，如YALEPIC^® UR SYBR Green qPCR MasterMix；2）优化引物设计和反应条件，确保引物特异性和扩增效率；3）适当提高模板投入量；4）确保qPCR仪器的定期校准和温度准确性；5）使用无核酸酶的水和耗材，防止外源核酸污染–。本产品在抗体法热启动酶和低拷贝优化缓冲液的双重保障下，可有效提升低丰度靶标的检测灵敏度，配合上述策略可获得更为理想的定量数据。

Q6：使用本产品时，高GC含量模板扩增效果如何？

A：YALEPIC^® UR SYBR Green qPCR MasterMix针对高GC含量模板进行了专门的缓冲液配方优化，可有效减少因高GC含量导致的扩增困难、熔解曲线峰形异常等问题。本产品已成功应用于多种高GC含量特殊基因和启动子区域的qPCR检测，扩增产物的熔解曲线峰形单一尖锐，扩增效率和特异性均可满足研究需求。

Q7：本产品在SNP分型和等位基因鉴别实验中的表现如何？

A：YALEPIC^® UR SYBR Green qPCR MasterMix采用高特异性的抗体法热启动酶，能够有效抑制非特异性产物生成，对于依赖扩增特异性的SNP分型实验具有重要意义。配合高分辨率熔解曲线分析或等位基因特异性定量方法，可实现精确的SNP鉴别和等位基因频率分析。

Q8：产品应如何正确保存？4℃可以存放多久？

A：本产品长期保存应在-20℃避光环境中密封保存，有效期24个月。融解后如需短期使用，可在4℃避光条件下稳定存放1个月，但需注意避免反复冻融（建议分装保存以降低冻融次数）。因产品含有SYBR Green I荧光染料，保存和操作时应全程避光，以防荧光信号衰减。

Q9：qPCR预混液中SYBR Green I染料的检测原理是什么？实验中有哪些注意事项？

A：SYBR Green I是一种双链DNA嵌合荧光染料，在溶液中处于游离状态时基本不发射荧光，一旦与PCR扩增产物双链DNA结合后荧光信号增强数百倍。qPCR仪器通过实时监测每个循环的荧光强度实现对靶标DNA的准确定量。本产品已预混最适浓度的SYBR Green I，使用前请注意：1）充分轻柔混匀Mix（剧烈振荡会产生气泡导致反应体积不准确）；2）避光保存和操作以免荧光信号衰减；3）设计高特异性引物以减少非特异性扩增和引物二聚体对检测结果的影响–；4）实验完成后建议进行熔解曲线分析验证扩增产物的单一性。

Q10：如果扩增曲线异常（如扩增平台期偏低、熔解曲线多峰等），应如何排查？

A：出现扩增异常时建议按以下步骤排查：1）验证预混液是否充分融化并混匀（可短暂离心后轻柔吹吸混匀）；2）检查引物设计和浓度是否优化合格（推荐引物长度25 bp左右、Tm值60–65℃、扩增产物150 bp左右为宜）–；3）检查模板质量及投入量是否合适；4）确认qPCR仪温度校准和孔间一致性；5）使用新鲜配制的引物和无核酸酶水，排除外源污染。YALEPIC® UR经过多重配方优化，可有效降低非特异性背景并改善扩增曲线质量。