什么是 NT型粪便/土壤基因组DNA提取试剂盒？
YALEPIC® NT型粪便/土壤基因组DNA提取试剂盒（含RNase A，货号 YC22008-A）是一款专为粪便与土壤等复杂环境样本设计的基因组DNA提取产品。采用硅基质离心吸附柱技术，搭载优化裂解液与独特缓冲体系，全程无需苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，1小时即可完成全套提取，单批次最高可获得 20μg 高纯度基因组DNA。可最大限度剥离腐殖酸、胆红素、胆盐、杂蛋白、脂类等PCR抑制杂质，提取DNA直接适用于 PCR、qPCR、NGS测序、宏基因组文库构建等全场景下游实验。
🔥 粪便土壤DNA提取的四大痛点
粪便和土壤是分子生物学实验中公认的“最难提”样本类型。复杂基质中充斥着PCR抑制剂、降解酶和结构干扰物，传统方法往往顾此失彼——要么纯度上不去，要么得率掉下来。
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腐殖酸抑制PCR
土壤中的腐殖酸与DNA结构相似，难以分离。即便微量残留也会与Taq酶结合，导致qPCR Ct值延迟甚至扩增失败，是环境DNA检测的”头号杀手”。
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胆盐胆红素干扰
粪便中富含胆红素、胆盐和未消化多糖，与DNA共沉淀后严重干扰下游检测。样本常呈黄褐色，A260/280比值偏离，数据可信度大打折扣。
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微生物壁难破
土壤中革兰氏阳性菌（芽孢杆菌、放线菌）和真菌孢子细胞壁厚实，普通裂解难以充分破壁，导致微生物多样性数据失真，低估alpha多样性。
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酚氯仿毒性大
传统CTAB法依赖苯酚氯仿反复抽提，操作耗时长、毒性大、废液处理成本高。在GLP合规实验室和高校公共平台中越来越受限。
🔬 技术原理：四步流程如何剥离抑制剂
NT型试剂盒的核心设计理念是”先裂解、再去杂、后吸附“三阶段分离策略。通过物理研磨珠破壁 + 化学裂解液双重作用释放全部微生物DNA，再利用专有沉淀液使腐殖酸、胆盐等抑制剂形成不溶性复合物离心除去，最后通过硅膜柱高效吸附回收高纯度DNA。
STEP 1
研磨珠破壁裂解
样本加入含高密度研磨珠的 Lysis Tubes M，配合 YQL Buffer + RSL Buffer，水平涡旋5分钟。物理剪切 + 化学裂解双重作用，高效破碎革兰氏阳性菌、真菌孢子等厚壁微生物。
STEP 2
抑制剂沉淀去除
加入 YBL Buffer，专有配方使腐殖酸、胆红素、胆盐、多糖形成不溶性复合物。离心后抑制剂随沉淀去除，上清液中DNA不受影响——这是NT型去杂的关键一步。
STEP 3
硅膜吸附+RNase消化
上清转入 Pure Columns YM 硅膜柱，DNA特异性吸附于硅胶膜。加入 RNase A 去除RNA干扰，再用 Wash Buffer GA / GB 两步洗涤去除残留蛋白和盐离子。
STEP 4
洗脱回收高纯DNA
SEB Buffer 温和洗脱，获得 A260/280 ≈ 1.7-1.9 的高纯度基因组DNA。单批次最高20μg，可直接用于 PCR、qPCR、16S扩增、宏基因组建库等全场景下游实验。
💡 核心设计亮点：NT型的”NT”代表”No-Toxic / No-Trouble”——全程无苯酚氯仿，去杂无需额外氯仿抽提步骤。专有 YBL Buffer 沉淀体系已整合高效除杂功能，绝大多数粪便和土壤样本无需任何补充操作即可获得无抑制剂DNA。这是它与传统CTAB法和部分竞品的根本区别。
✨ 六大核心优势
🛡️
安全无毒·合规可用
全程无苯酚氯仿萃取，无需通风橱和废液处理。GLP合规实验室、高校公共平台、医院检验科均可安全使用，绿色实验操作。
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1小时·最高20μg
从样本到DNA全程1小时完成，单批次最高得率可达20μg。满足宏基因组shotgun测序对DNA起始量的高要求，无需多次提取合并。
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强效去杂·无抑制剂
专有沉淀液去除腐殖酸、胆盐、胆红素、多糖、杂蛋白及脂类。qPCR验证Ct值偏差不超过±0.5，无需稀释即可直接上机。
🌍
广谱适配·双场景通吃
兼容人/鼠/犬/猫/猪/鸡/牛粪便（新鲜/冻存/保存液）及农田/森林/草原/湿地/沉积物/堆肥/活性污泥全类型土壤，一盒搞定。
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全品类DNA一步回收
一次性提取样本中微生物（细菌+古菌+真菌）、寄生虫及病毒全品类总DNA，真实还原样本微生物群落结构，alpha多样性无偏差。
📦
储运便捷·有效期长
常温运输，仅RSL Buffer需2-8°C保存，其余组分10-30°C室温即可。组分分区保存稳定性强，有效期长，库存管理省心。
🚀 应用场景：从肠道菌群到土壤微生物组的前沿阵地
粪便和土壤是微生物组学研究的两大核心样本来源。随着16S rRNA扩增子测序、宏基因组shotgun测序和代谢组学联合分析的快速发展，对高质量环境DNA的需求呈爆发式增长。NT型试剂盒覆盖以下前沿应用方向：
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肠道菌群16S/ITS测序
人及动物粪便样本提取总DNA后，扩增16S rRNA V3-V4区进行细菌群落分析，或扩增ITS区进行真菌群落分析。NT型高效去除胆盐胆红素，确保扩增无偏倚，还原真实alpha和beta多样性。
▸ 典型场景：IBD/肥胖/糖尿病肠菌研究 · 婴儿肠道菌群定植追踪 · 益生菌干预评价
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宏基因组Shotgun测序
对粪便/土壤总DNA进行全基因组鸟枪法测序，实现物种注释、功能基因挖掘、抗生素抗性基因（ARG）分析和代谢通路重建。NT型提供≥1μg高质量DNA起始量，满足建库需求。
▸ 典型场景：肠道微生物组功能注释 · 土壤抗生素抗性组 · 碳氮循环功能基因
🌱
土壤微生物组与农业
从根际土、农田土中提取微生物总DNA，分析土壤健康、作物-微生物互作、生物肥料效果。NT型强力去除腐殖酸，即便高有机质黑土、泥炭土也能获得无抑制剂DNA。
▸ 典型场景：根际微生物组 · 连作障碍机制 · 生物菌肥评价 · 土壤健康评估
🏭
环境监测与生态修复
湿地底泥、活性污泥、河流沉积物等环境样本DNA提取，用于污染生物监测、污水处理工艺优化、重金属污染评估。NT型兼容高腐殖酸、高有机质样本，稳定输出可靠数据。
▸ 典型场景：污水处理厂活性污泥 · 湿地生态监测 · 堆肥发酵过程 · 生物修复评估
🦠
病原微生物检测
粪便中寄生虫（蛔虫、贾第鞭毛虫、隐孢子虫）、致病菌（沙门氏菌、志贺菌、艰难梭菌）及病毒DNA同步回收。一次提取覆盖细菌+寄生虫+病毒，qPCR检测Ct偏差≤±0.5。
▸ 典型场景：食源性病原检测 · 寄生虫筛查 · 艰难梭菌感染诊断 · 畜禽肠道病原监测
🍽️
营养代谢与畜禽研究
瘤胃内容物、肠道食糜等半固态样本（需预研磨）提取DNA，研究饲料转化效率、瘤胃发酵微生物组、益生菌添加效果。NT型兼容消化半固态样本，拓宽应用边界。
▸ 典型场景：反刍动物瘤胃微生物 · 饲料添加剂评价 · 宠物肠道健康 · 营养干预研究
📊 典型样本参考用量与预期产量
| 样本类型 | 推荐用量 | 预期产量 | 下游应用 |
|---|---|---|---|
| 新鲜人/动物粪便 | 200 mg | 5-20 μg | 16S/ITS/qPCR/宏基因组 |
| 冻存粪便 | 200 mg（避免反复冻融） | 3-15 μg | 16S/ITS/qPCR/宏基因组 |
| 农田/森林表土 | 250 mg | 5-15 μg | 16S/ITS/18S/宏基因组 |
| 湿地底泥/沉积物 | 200 mg | 3-10 μg | 16S/qPCR/功能基因 |
| 活性污泥/堆肥 | 200 mg | 5-15 μg | 16S/宏基因组/qPCR |
| 泥炭/腐叶土（极高腐殖酸） | 150 mg | 2-8 μg | 16S/qPCR |
| 瘤胃内容物/肠道食糜 | 200 mg（预研磨） | 5-15 μg | 16S/宏基因组 |
* 产量仅供参考，实际得率受样本微生物丰度、有机质含量、储存条件等因素影响。
📦 产品组分与规格
| 序号 | 产品组分 | YC22008-A（50T） |
|---|---|---|
| ① | YQL Buffer（裂解液） | 45 ml |
| ② | RSL Buffer（抑制剂去除液，2-8°C保存） | 11 ml |
| ③ | YBL Buffer（沉淀缓冲液） | 11 ml |
| ④ | Wash Buffer GA（洗涤液A） | 13 ml |
| ⑤ | Wash Buffer GB（洗涤液B） | 21 ml |
| ⑥ | SEB Buffer（洗脱液） | 12 ml |
| ⑦ | RNase A（100 mg/mL） | 230 μl |
| ⑧ | Pure Columns YM with Collection Tubes | 50 T |
| ⑨ | Lysis Tubes M（含研磨珠） | 50 T |
📋 基本信息：品牌 YALEPIC® ｜ 货号 YC22008-A ｜ 规格 50T ｜ 目录价 ¥900 ｜ 保存：常温运输，RSL Buffer 2-8°C保存，其余组分 10-30°C室温保存 ｜ 国家高新技术企业出品
⚖️ NT柱法 vs CTAB法 vs 磁珠法：10维度全对比
| 对比维度 | YALEPIC NT柱法 | 传统CTAB酚氯仿法 | 磁珠法 |
|---|---|---|---|
| 提取原理 | 硅膜吸附+专有沉淀去杂 | CTAB裂解+酚氯仿反复抽提 | 磁性微粒吸附+自动化 |
| 用时（单样本） | ~60 分钟 | 2-4 小时 | 40-60 分钟（需仪器） |
| 毒性试剂 | 无（绿色操作） | 苯酚+氯仿（高毒） | 无 |
| 腐殖酸去除 | 专有沉淀液·1步去除 | 依赖多次氯仿抽提 | IRT技术·1分钟去除 |
| 胆盐/胆红素去除 | ✓ YBL Buffer高效去除 | 部分去除·易残留 | ✓ 可去除 |
| DNA纯度（A260/280） | 1.7-1.9 | 1.6-1.9（波动大） | 1.7-1.9 |
| 单批最高产量 | 20 μg | 5-15 μg | 10-20 μg |
| qPCR Ct偏差 | ≤ ±0.5 | 常因抑制剂残留偏移 | ≤ ±0.5 |
| 高通量能力 | 中等（离心柱·手动） | 低（耗时费力） | 高（自动化48/96通量） |
| 设备依赖 | 仅需离心机+涡旋 | 通风橱+离心机 | 磁珠分离仪（成本高） |
💡 选择建议：NT柱法在纯度、去杂能力、安全性和设备门槛之间取得了最佳平衡，特别适合经费有限但对数据质量要求高的课题组。若需96通量自动化，可评估磁珠法方案。
❓ 常见问题（FAQ）
Q1：这款试剂盒能提取土壤中的哪些微生物DNA，包括真菌吗？
可以。提取的基因组DNA涵盖土壤中细菌（含芽孢杆菌、放线菌）、古菌和真菌的完整基因组。裂解过程采用物理和化学双重方法，配备高密度研磨珠，能够有效破壁霉菌丝体和厚垣孢子，保证真菌DNA得率。常用于细菌16S rDNA、真菌ITS及18S rDNA扩增与测序。
Q2：粪便样本在提取前需要特殊的预处理或保存条件吗？
推荐采集后立即冻存于-80°C或使用商业粪便保存液稳定核酸。若新鲜样本直接提取，取200 mg即可；冻存样本避免反复冻融，称取后直接加入裂解管。液态或半液态粪便（如腹泻便）可用无菌棉拭子蘸取后直接浸入裂解液起始提取，无需冷冻干燥，操作友好。
Q3：提取的DNA电泳条带弥散或得率低是怎么回事？
弥散常见于腐殖酸残留或过度机械剪切。本试剂盒优化了涡旋时间（水平涡旋适配器最高速5分钟），如出现弥散可将涡旋转速调整为中等强度，避免过度打断。得率低多见于土壤样本过少或高沙质土，建议增加样本量并延长裂解时间。
Q4：获得的DNA溶液出现褐色或黄色，会影响下游实验吗？
轻微着色往往源于残留腐殖酸或粪胆素，少量色素对常规PCR和qPCR无影响。若颜色深且比值低，建议将洗脱液升温至65°C洗脱，或在结合步骤前增加一次等体积氯仿抽提的替代步骤（但NT型本身已整合高效沉淀，多数样本无需此步）。
Q5：提取的DNA是否含有抑制剂？下游qPCR出现Ct延迟怎么办？
本试剂盒核心设计就是去除抑制剂，采用专有沉淀液使腐殖酸、胆盐和多糖形成不溶性复合物离心除去。若仍出现Ct延迟，可将DNA用洗脱缓冲液做1:2稀释后重新扩增，稀释可消除微量抑制剂干扰。正常操作下，提取的粪便与土壤DNA在qPCR中Ct值与理论值偏差不超过±0.5。
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