YALEPIC^® 无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒（PLUS）（100-300ml）

YALEPIC^® 无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒（PLUS）100-300ml 试剂盒 采用优化的碱裂解法裂解细胞，结合新型硅基质膜吸附技术，高效专一捕获质粒DNA。试剂盒内置专用去内毒素溶液YER和过滤器FC2，在提取过程中同步去除内毒素（LPS），有效消除基因组DNA、RNA及蛋白等杂质干扰。蓝色裂解和中和步骤伴随明确颜色变化，操作状态一目了然，大幅降低因操作手法差异导致的批间误差风险，尤其适合新人上手和多批次平行提取场景。试剂盒单次可处理100~300ml大肠杆菌菌液（推荐DH5α、TOP10等endA⁻菌株），完整提取流程约50分钟，高拷贝质粒得率可达2~3mg，内毒素残留量控制在<0.1EU/μg，显著优于行业常规标准（<1EU/μg即可满足一般转染要求），产物质粒可直接用于细胞转染，无需额外纯化。无需酚/氯仿等有毒有机试剂抽提，无需乙醇沉淀步骤，实验操作更安全环保。纯化产物适用于HEK293、HeLa、CHO等常用细胞系转染，以及内毒素敏感型细胞系、原代细胞的高效转染，亦兼容酶切、测序、PCR、连接、转化、体外转录等常规分子生物学实验。

• 极低内毒素残留：内毒素水平＜0.1EU/μg，低于行业标准（常规产品＜1EU/μg即可），确保在敏感型细胞系中实现高效转染。

• 超快提取：完整流程约50分钟，大幅缩短实验周期，提升通量效率。

• 高产稳定：100~300mL菌液体系，高拷贝质粒得率可达2~3mg，支持大规模制备需求。

• 可视化操作保障：蓝指示剂，裂解与中和步骤颜色变化直观，降低操作失误风险，确保批间一致性。

• 广泛的下游兼容性：纯化产物可直接用于多种细胞（含原代细胞、敏感细胞系）的转染，以及酶切、测序、PCR、连接、转化、体外转录等分子生物学实验。

• 无需酚/氯仿抽提：避免使用有毒有机试剂，实验更安全环保，操作更便捷。

• 细胞转染实验：适用于HEK293、HeLa、CHO等常用细胞系及内毒素敏感型细胞、原代细胞的高效转染。

• 基因治疗与疫苗研发：支持临床前研究中转染级质粒的大规模制备需求。

• 常规分子生物学实验：酶切、连接、转化、PCR、测序、体外转录等。

常温运输；10 ~ 30℃ 室温保存。

Q1：为什么提取的质粒DNA产量偏低？

A1：质粒产量偏低的常见原因及解决方案包括：

① 质粒拷贝数低：不同载体拷贝数差异显著。低拷贝质粒（如pET系列、pBR322、pACYC等）应加大菌液使用量，并等比例增加裂解液用量；洗脱液可预热至65℃，以提升洗脱效率。

② 菌体量不足：确保使用足够体积的过夜培养菌液，并保证菌体处于对数生长期（OD₆₀₀ ≈ 1.0~1.5），培养时间建议12~16小时，不宜超过16小时。

③ 菌种保存不当：甘油菌长期保存可能存在质粒丢失现象，建议提取前先划线或涂布平板活化菌种，以稳定产量。

④ 裂解不充分：加入重悬液后需涡旋振荡至菌体彻底悬浮，无可见菌块；裂解后应温和颠倒混匀，确保充分裂解但避免基因组DNA断裂。

⑤ 洗脱条件不当：洗脱缓冲液预热至65~70℃可显著提高洗脱效率；加入洗脱液后可静置2~5分钟使其与膜充分作用；可进行二次洗脱以提高总回收率。

⑥ 测浓度误差：NanoDrop等仪器测浓度时，需用洗脱缓冲液（而非水）作为空白对照进行调零。

Q2：提取的质粒中内毒素含量过高怎么办？

A2：内毒素含量高的常见原因及解决方案：

① 菌液量过多：菌体过量会导致裂解不完全，内毒素释放不充分且去除效率下降，应严格按照试剂盒推荐的菌液量操作。

② 去内毒素溶液未充分混匀：加入去内毒素溶液后应充分上下颠倒混匀（建议≥15次），确保内毒素被有效结合和去除。

③ 操作不当：吸取上清时应避免吸入下层含内毒素结合物的溶液层，离心温度不应低于23℃，低温会导致相分离不彻底。

Q3：提取的质粒中有基因组DNA污染怎么办？

A3：基因组DNA污染主要由裂解步骤操作不当引起：

① 加入裂解液后，必须温和颠倒混匀（不可剧烈震荡或涡旋），避免机械剪切力将基因组DNA打断成小片段与质粒共纯化。

② 裂解时间应严格控制在5分钟以内，处理多个样本时注意控制总时间，避免过度裂解。

③ 中和步骤应充分但温和地混匀，确保基因组DNA与蛋白、细胞碎片一同沉淀去除。

Q4：提取的质粒中有RNA污染怎么办？

A4：

① 确认RNase A是否已加入Buffer PA中并充分混匀；已加入RNase A的Buffer P1应于2~8℃保存，长时间室温放置会导致酶活下降。

② 菌液量过多时，菌体中RNA总量可能超出RNase A的消化能力，应适当减少菌液体积。

③ 确保RNase A在有效期内且保存条件符合要求。

Q5：缓冲液出现沉淀怎么办？

A5：Buffer PB等含SDS的缓冲液在低温条件下易析出结晶或沉淀，37℃水浴加热至完全溶解，混匀后即可正常使用，不影响提取效果。

Q6：低拷贝质粒或大质粒（>10kb）该如何优化提取？

A6：

① 加大菌体使用量，并按比例同步增加裂解液各组分的用量，确保菌体被完全裂解。

② 洗脱缓冲液预热至65~70℃，以提高大质粒从硅胶膜上的洗脱效率。

③ 吸附和洗脱步骤可适当延长孵育时间（如吸附步骤延长至5分钟，洗脱步骤延长至5~10分钟），以增加提取效率。

Q7：提取的质粒DNA如何保存？

A7：短期保存（1~2周）可置于2~8℃；长期保存建议置于-20℃或-70℃，避免反复冻融。质粒DNA应溶解在低盐缓冲液（如试剂盒配套的Elution Buffer）中。

Q8：该试剂盒提取的质粒能否直接用于细胞转染？

A8：可以。本试剂盒提取的质粒内毒素残留量极低（＜0.1EU/μg），纯度高，质量稳定，适用于大多数细胞株（包括内毒素敏感型细胞系和原代细胞）的高级转染实验，无需额外纯化步骤。

Q9：能否使用丰富培养基（如TB培养基）培养细菌用于无内毒素质粒提取？

A9：不建议。使用TB等丰富培养基培养细菌可能导致内毒素水平升高，超出试剂盒的去除能力范围，建议使用标准LB培养基进行培养以确保内毒素残留达标。

Q10：该试剂盒适用于哪些宿主菌株？

A10：推荐使用endA⁻（核酸内切酶I缺陷型）大肠杆菌菌株，如DH5α、TOP10、XL10-Blue等，此类菌株可避免质粒DNA被核酸内切酶降解，获得更高质量和产量的质粒。

Q11：Buffer PB和Buffer ER使用时有哪些注意事项？

A11：

① Buffer PB使用后应立即盖紧瓶盖，避免空气中的CO₂与NaOH反应，降低裂解效率。

② 加入Buffer PB后应温和颠倒混匀（不可涡旋），裂解时间不宜超过5分钟。

③ ER（中和液）加入后应立即温和颠倒混匀至出现白色絮状沉淀，确保中和完全。

④ 蓝指示剂存在时：裂解完全时溶液呈均匀蓝色，中和完全时蓝色消失、白色沉淀形成——此颜色变化是判断操作是否到位的关键指标。

Q12：该试剂盒与其他品牌无内毒素质粒大提试剂盒相比有哪些优势？

A12：本试剂盒具备以下差异化优势：

① 内毒素残留更低：＜0.1EU/μg，处于行业领先水平（主流竞品多为＜0.1~1EU/μg），满足更高标准的转染需求。

② 提取速度更快：完整流程约50分钟，无需冰浴，较多数竞品的60~90分钟更为高效。

③ 可视化蓝指示剂：帮助用户直观判断裂解与中和是否完全，减少经验性判断偏差，保障批间一致性。

④ 得率高：100~300mL菌液体系可获高达2~3mg质粒DNA，优于多数同规格竞品。

⑤ 无需酚/氯仿抽提：操作更安全环保，且无需乙醇沉淀，流程更简化。