YALEPIC^® 无内毒素质粒DNA超大量提取试剂盒（PLUS）（100-500ml）

YALEPIC^® 无内毒素质粒DNA超大量提取（PLUS）（100-500ml）试剂盒在碱裂解法裂解细胞的基础上，通过新型硅基质膜高效专一的结合质粒DNA，同时采用去内毒素溶液YER和过滤器FC2，可更便捷高效提取无内毒素质粒，并有效地去除基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。内毒素含量严格控制在<0.1 EU/μg，避免细胞毒性干扰，提升转染实验可靠性与重复性。溶液包含指示剂，通过颜色的变化，指示裂解、中和是否完全，从而保证质粒提取的质量，实现操作的可视化。本试剂盒每次可处理 100 ~ 500 ml 菌液，整个提取过程只需 50 min。所得质粒内毒素残留极低、纯度高、质量稳定，特别适用于多种细胞转染，同时也适用于酶切、测序、PCR、体外转录等下游实验。

• 极致去内毒素｜转染级纯度保障：采用YER去内毒素溶液+FC2过滤器双重去除体系，内毒素残留达到转染级标准（＜0.1 EU/μg），特别适合原代细胞、干细胞、免疫细胞等内毒素敏感型细胞的转染实验，有效避免内毒素诱导的细胞毒性、假阳性信号等干扰。
• 可视化操作｜提取过程全程可控：裂解液与中和液中含颜色指示剂，通过颜色变化清晰指示每一步操作是否完全到位，即使是新手也能轻松掌握提取节奏，避免因裂解不足或过度裂解导致的产量不稳定问题。
• 超大规模处理｜50分钟完成：每批次可处理100~500ml菌液，高拷贝质粒得率可达毫克级；整个提取流程仅需50分钟，比传统离子交换法（>3小时）节省大量时间。
• 多场景兼容｜即用型转染级质粒：提取产物可直接用于细胞转染、酶切、PCR、测序、体外转录、连接转化等下游实验，无需额外纯化步骤，一盒覆盖核心实验需求。

• 菌液处理量： 100 ~ 500 ml 过夜培养的E.coli菌液（推荐OD600≥2）
• 质粒类型兼容： 高拷贝质粒（如pUC、pBS系列）推荐100-300ml，得率3mg；低拷贝质粒（如pBR322、pACYC系列）及＞10kb大质粒推荐400-500ml，建议按比例增加裂解缓冲液用量
• 适用实验类型： 哺乳动物细胞转染（含HEK293、CHO、Hela、干细胞等）、基因编辑载体构建、病毒包装、酶切鉴定、DNA测序、PCR扩增、体外转录、连接转化等

常温运输；10 ~ 30℃ 室温保存。

Q1：该试剂盒的菌液处理范围是100-500ml，如何处理超过500ml的超大量菌液？

A：本试剂盒单次处理上限为500ml菌液。若需要处理超过500ml的菌液（如1L或以上），建议分批次提取，对于超低拷贝质粒或长片段大质粒（>10kb），可在300-500ml范围内按比例适当加大菌液使用量，并同步等比增加裂解缓冲液和中和液用量，以保证菌体充分裂解和质粒高效释放。

Q2：提取的质粒DNA内毒素含量是多少？能否满足敏感细胞转染需求？

A：本试剂盒通过YER去内毒素溶液与FC2过滤器双重净化机制，所得质粒内毒素残留极低（＜0.1 EU/μg），符合转染级质粒的国际通用标准。内毒素是E.coli细胞壁的主要成分，对真核细胞具有明显的细胞毒性，即使微量残留也会显著降低转染效率甚至导致细胞死亡。本试剂盒提取的质粒可直接用于原代细胞、干细胞、免疫细胞等内毒素敏感型细胞系的转染实验，也兼容HEK293、CHO、Hela等常规细胞系，实验结果表明转染效率和细胞存活率均表现优异。

Q3：低拷贝质粒或大于10kb的大质粒如何使用本试剂盒提取？

A：低拷贝质粒（如pBR322、pACYC及其衍生载体）和大质粒（>10kb）因每个细菌的质粒拷贝数较低，需要更高的菌液处理量和优化的裂解条件。建议采取以下措施：（1）菌液使用量上调至300-500ml；（2）按原比例等比增加裂解缓冲液（PB/裂解液）和中和液用量，确保菌体完全裂解；（3）洗脱缓冲液在使用前预热至65-70℃，以提高洗脱效率；（4）适当延长硅基质膜吸附时间（可延长至5-10分钟）和洗脱时间；（5）采用二次洗脱策略收集更多质粒。具体用量参考产品说明书的优化建议。

Q4：提取的质粒DNA中有基因组DNA污染，如何解决？

A：基因组DNA污染通常由以下原因引起：（1）加入裂解液后混匀过于剧烈，打断了基因组DNA使其与质粒共纯化；（2）裂解时间过长（超过5分钟），导致基因组DNA释放增加。解决方案：加入裂解液后应温和地上下颠倒混匀4-6次，避免涡旋震荡或剧烈摇动；裂解步骤严格控制在3-5分钟内完成，切勿超时；中和后应立即进行后续过滤/离心步骤，防止基因组DNA进一步释放。

Q5：质粒提取产量低，可能的原因是什么？

A：产量低的常见原因及对应解决方案包括：

• 质粒拷贝数低：低拷贝载体（如pBR322、pACYC系列）每ml菌液产量仅为0.5-2μg，需加大菌液使用量至300-500ml
• 菌体裂解不充分：确保菌体在重悬液中完全悬浮无团块，裂解液加入后充分但温和混匀
• 试剂沉淀：若裂解液或中和液出现沉淀，使用前37℃水浴加热至澄清方可使用
• 乙醇残留：漂洗后应充分离心去除残留液体，确保硅基质膜完全干燥后再加入洗脱缓冲液
• 洗脱效率低：洗脱缓冲液预热至65-70℃，可采用二次洗脱法
• 菌液新鲜度：建议使用新鲜过夜培养的菌液（培养时间12-16小时），4℃保存超过48小时的菌液产量会显著下降

Q6：试剂盒中的颜色指示剂如何帮助我们判断操作是否到位？

A：本试剂盒的裂解液（含蓝色指示剂）和中和液经过专门优化设计。加入裂解液后菌悬液应呈现均匀的蓝色，表明菌体已被充分裂解；加入中和液后，若蓝色完全消失、溶液变为澄清的浅黄色或无色，表明中和反应已彻底完成。若中和后仍残留蓝色，则提示中和不充分，需要补加中和液。这一可视化设计有效降低了实验者对操作时机的判断难度，尤其适合新手使用和高通量操作场景，确保批次间提取质量的稳定性。

Q7：该试剂盒可以用于酵母质粒提取吗？

A：本试剂盒专为大肠杆菌（E.coli）宿主系统设计。酵母作为真核生物，其细胞壁比细菌细胞壁更厚、更难裂解，直接使用本试剂盒提取酵母质粒效果不理想。如需提取酵母质粒，可联系客服咨询。

Q8：试剂盒的保存条件和有效期如何？

A：本试剂盒常温运输（10-30℃），收到后可在10-30℃室温干燥条件下保存18个月。若实验室环境温度较高或湿度较大，建议将试剂盒置于2-8℃冷藏保存以延长使用寿命。需特别注意：（1）首次使用时将RNase A全部加入重悬缓冲液（Buffer PA），混匀后2-8℃保存；（2）裂解液和中和液若出现沉淀，37℃水浴加热并温和混匀至澄清后使用；（3）漂洗液若需添加乙醇，应严格按照说明书要求准确添加体积。

Q9：提取的质粒可以用于哪些下游实验？

A：本试剂盒提取的质粒DNA纯度高、内毒素残留极低，适用范围广泛。具体包括：

• 细胞转染：瞬时转染、稳定转染、脂质体转染、电转染等，涵盖HEK293、CHO、Hela、干细胞、原代细胞等多种细胞类型
• 分子克隆：酶切鉴定、连接转化、TA克隆、Gateway克隆等
• 核酸扩增与检测：PCR、qPCR、测序（Sanger测序和NGS均可）
• 蛋白表达：体外转录与翻译、哺乳动物细胞表达、昆虫细胞表达
• 基因功能研究：CRISPR/Cas9基因编辑载体构建、RNA干扰、基因过表达等
• 病毒包装：慢病毒、腺病毒、AAV等病毒载体制备
• 基因治疗研究：临床前研究的质粒原料制备

Q10：与其他品牌的无内毒素质粒大提试剂盒相比，本产品有何优势？

A：相比市售主流竞品，YALEPIC^® PLUS系列的核心差异化优势体现在：（1）可视化操作系统——颜色指示剂全程指导操作，降低人为误差；（2）50分钟无需冰浴——显著短于多数竞品的60-90分钟操作时间；（3）双重去内毒素机制——YER溶液+FC2过滤器，确保转染级纯度；（4）处理范围灵活——100-500ml覆盖中量到超大量提取需求；（5）性价比优越——在保证与进口品牌同等质量的前提下，价格更具竞争力。同时雅礼生物提供完善的技术支持和售后服务，确保用户的实验顺利开展。