YALEPIC ^® Novalign Flash HiFi MasterMix/（Dye）

YALEPIC^® Novalign Flash HiFi MasterMix包含了通过基因改造技术实现快速扩增的热启动高保真DNA聚合酶、dNTPs和优化的PCR扩增反应缓冲液，扩增时只需加入模板、引物和水。该产品具有PCR抑制物耐受性高、模板兼容性强、延伸速度快、扩增特异性高、扩增效率高等特点，3kb以内片段延伸速度可达1 sec/kb，10kb以内片段可达5 sec/kb延伸速度。该产品具有 5’→3′ DNA聚合酶活性和 3’→5′ 核酸外切酶活性，扩增产物为平末端，其保真度是普通Taq酶的108倍，可高效扩增15 kb以内的基因组片段及20 kb以内的质粒DNA。

本产品广泛适用于各类PCR扩增反应，包括但不限于：高保真PCR、基因克隆、定点突变、NGS文库扩增、菌落PCR、基因分型及SNP检测等。

-20℃ 避光保存，＜ 0℃ 运输。使用前请充分解冻并轻柔混匀。避免反复冻融，建议首次使用后按需分装保存。

Q1：该产品的保真度有多高？与普通Taq酶相比有何优势？

A：YALEPIC^® Novalign Flash HiFi MasterMix的保真度约为普通Taq DNA聚合酶的 108倍。其DNA聚合酶具有3‘→5’核酸外切酶（校正）活性，可在扩增过程中实时识别并切除错配的核苷酸，确保极高的复制准确性。这一特点使其特别适合基因克隆、定点突变分析及NGS文库构建等对序列保真度要求严苛的应用–。

Q2：该产品的延伸速度是多少？最短可缩短至多少时间？

A：本产品的延伸速度根据目标片段长度分为两档：≤3 kb的片段：延伸速度可达 1 sec/kb；≤10 kb的片段：延伸速度 5 sec/kb。相较于常规高保真聚合酶15–30 sec/kb的延伸速率，本产品可显著缩短PCR反应周期，实现“快速PCR”。对于难度较高的长片段扩增，建议根据实际情况适当延长延伸时间以保证产量。

Q3：该产品是否含有染料？Dye版和非Dye版有什么区别？

A：本产品提供两种版本：

Q4：该产品能否扩增高GC含量模板？是否需要额外添加增强剂？

A：可以。本产品配方经过优化，具有较强的复杂模板兼容性，可直接扩增一定范围内的高GC含量片段。对于GC含量极高的困难模板，建议可尝试以下优化策略：1）适当提高变性温度或延长变性时间；2）使用梯度退火温度测试最佳条件。如需进一步优化，建议联系雅礼生物技术支持团队获取专业指导。

Q5：该产品扩增产物是平末端还是粘末端？如何进行TA克隆？

A：YALEPIC^® Novalign Flash HiFi MasterMix的扩增产物为 平末端（Blunt End） ，因为其DNA聚合酶具有3’→5’校正活性，不会在产物3’端额外添加A碱基。推荐直接使用平末端克隆载体进行连接，效率最高。若必须进行TA克隆，可先纯化PCR产物以彻底去除高保真聚合酶，然后使用Taq DNA聚合酶在纯化后的平末端产物3’端添加A尾，再进行TA连接。

Q6：PCR反应出现非特异性条带或弥散条带（smear），如何解决？

A：可能原因及解决方案：

若弥散条带问题持续存在，建议使用新鲜提取的高质量模板DNA，并检查所有试剂的储存状态。

Q7：MasterMix中出现沉淀是否影响使用？

A：不影响。MasterMix在低温储存或反复冻融后可能出现少量沉淀，这是正常现象。使用前请将MasterMix取出置于室温解冻，每隔10–15分钟轻柔颠倒混匀数次，直至沉淀完全溶解，然后瞬时离心收集即可正常使用。性能测试表明，多次冻融循环（最多30次）对MasterMix的PCR扩增性能无显著影响。如需长期保存，建议首次使用后分装冻存，减少反复冻融–。

Q8：如何进行PCR反应的污染防控？

建议遵循以下规范以最大程度降低PCR污染风险：

1. 分区操作：在实验室内划定专门的PCR体系配制区域，与模板处理和PCR产物分析区域严格分开；

2. 专用器具：配制区配备专用移液器、一次性带滤芯吸头及PCR管，避免交叉使用；

3. 规范操作：打开PCR试剂管前短暂离心，使液体沉降至管底，减少对手套和移液器的污染；

4. 模板管控：在自己的实验台上稀释DNA模板，仅将所需稀释液带入配制区；

5. 产物隔离：PCR完成后，切勿将含有扩增产物的PCR管带入配制区，在指定区域进行后续电泳检测等操作；

6. 设置对照：每次PCR反应均应设置无模板阴性对照（NTC），以监测是否存在DNA污染。