YALEPIC^® Novalign Ultra HiFi MasterMix/（Dye）

YALEPIC^® Novalign Ultra HiFi MasterMix包含了通过基因改造的热启动超高保真DNA聚合酶、dNTPs和优化的PCR扩增反应缓冲液，扩增时只需加入模板、引物和水。该产品具有PCR抑制物耐受性高、模板兼容性强、扩增特异性高、扩增效率高等特点。其保真度是普通Taq酶的220倍，可高效扩增15 kb以内的基因组片段及20 kb以内的质粒。DNA该产品具有 5’→3′ DNA聚合酶活性和 3’→5′ 核酸外切酶活性，扩增产物为平末端。

• 高保真PCR扩增：适用于需要高序列准确度的基因扩增实验

• 分子克隆：平末端产物可直接用于平末端克隆载体

• 定点突变：高保真酶确保突变位点准确引入

• NGS文库扩增：适用于高通量测序文库的PCR扩增步骤

• 高GC含量模板扩增：经优化的缓冲体系可有效扩增高GC含量的复杂模板

• 长片段PCR：可扩增30kb以内基因组片段及40kb以内质粒片段

• 复杂样本扩增：对PCR抑制物具有良好的耐受性

-20℃ 保存，＜ 0℃ 运输。

Q1：该产品是否支持高GC含量模板的扩增？

A: 支持。经优化的反应缓冲体系可有效增强对高GC含量模板的扩增能力。该产品对复杂模板和含抑制物的样本具有良好的耐受性。

Q2：PCR扩增没有产物或产量很低，如何解决？

可按照以下步骤进行排查：

1. 检查模板质量：确认模板DNA是否降解或纯度不足。可通过电泳检测模板质量，使用试剂盒提取的高质量模板。

2. 检查引物设计：确保引物自身无二级结构，引物之间无二聚体形成。推荐引物长度22-35mer，Tm值>60℃，GC含量45-60%之间。扩增长片段时，推荐引物长度25-35mer，Tm值≥65℃。

3. 检查反应体系配制：确保所有组分已正确加入并充分混匀；试剂应完全溶解后使用，防止离子浓度不均匀。

4. 优化退火温度：可尝试设置退火温度梯度（从55℃到68℃），寻找最佳退火温度。

5. 增加循环数：适当增加5-10个循环；延伸时间不足时，复杂模板可适当增加延伸速度。

6. 检查热循环仪：确认PCR仪程序运行正常，热盖温度和模块温度设置正确。

Q3：出现非特异性扩增条带或弥散带如何处理？

非特异性扩增通常由以下原因引起，可按对应方法优化：

Q4：该产品的扩增产物是什么末端？能否用于TA克隆？

YALEPIC® NovaAlign Ultra HiFi MasterMix扩增得到的PCR产物为平末端，因为该酶具有3’→5’核酸外切酶（校正）活性，不会像Taq酶那样在产物3’端添加A碱基。

平末端产物可直接用于平末端克隆载体；如需用于TA克隆，建议对PCR产物进行加A处理后再与T载体连接。

Q5：含染料版本和不含染料版本有什么区别？如何选择？

• 不含染料版本（YEM51008-A）：预混液中不含电泳指示染料，适合对PCR产物需要进一步纯化处理（如酶切、连接、测序）的实验。
• 含染料版本（YEM51008-B）：预混液中预加有电泳指示染料，PCR扩增结束后可直接上样进行琼脂糖凝胶电泳分析，无需额外添加Loading Buffer，简化操作流程，适合高通量筛选和快速检测。

选择建议：如果PCR产物后续需要进行下游实验（如克隆、测序），推荐使用不含染料版本，以避免染料对下游反应的影响；如果仅用于PCR产物的快速检测和鉴定，推荐使用含染料版本，更加便捷高效。

Q6：如何储存和运输？反复冻融是否影响性能？

储存条件：-20℃长期保存。

运输条件：＜0℃（干冰或冰袋）运输。

反复冻融：建议避免反复冻融，该产品测试反复冻融30次没有显著影响产品性能，如果在短期内需要频繁使用，可在2-8℃短期暂存。首次使用后建议分装保存，以减少冻融次数。

Q7：能否直接用于血液样本的PCR扩增？

YALEPIC^® NovaAlign Ultra HiFi MasterMix对PCR抑制物具有良好的耐受性。与普通Taq酶相比，该产品对血液中常见PCR抑制剂的耐受能力更强，可直接以粗样本裂解液为模板进行PCR扩增，简化样本前处理步骤。对于含抑制物较多的样本，建议适当减少样本加入量或进行简单稀释处理。