YALEPIC^® Novalign Long-Range Flash HiFi MasterMix/（Dye）

YALEPIC^® Novalign Long-Range Flash HiFi MasterMix包含了通过基因改造技术实现快速扩增的热启动高保真DNA聚合酶、dNTPs和优化的PCR扩增反应缓冲液，扩增时只需加入模板、引物和水。该产品具有PCR抑制物耐受性高、模板兼容性强、延伸速度快、扩增特异性高、扩增效率高等特点，可高效扩增40 kb以内的基因组片段，尤其擅长10 kb及以上大片段片段的快速扩增，扩增速度可达10 sec/kb。该产品具有 5’→3′ DNA聚合酶活性和 3’→5′ 核酸外切酶活性，扩增产物为平末端，其保真度是普通Taq酶的108倍。

1. 超快速扩增：独特的酶工程改造，使其扩增速度高达 10 sec/kb，极大缩短了实验周期。
2. 长片段扩增能力：可高效扩增长达 40 kb 的基因组DNA片段，尤其擅长 10 kb 及以上 的大片段扩增。
3. 超高保真性：具备极强的3’→5’核酸外切酶校正活性，保真度约为普通Taq DNA聚合酶的 108倍，确保序列的高度准确性。
4. 高模板兼容性：对PCR抑制物具有高耐受性，模板兼容性强，对复杂模板（如高GC含量、含二级结构的模板）也有出色的扩增效果。
5. 方便快捷：提供含染料版本（Dye），PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，操作更加简便。

1. 长片段及超长片段 PCR 扩增。
2. 高通量测序（NGS）文库扩增。
3. 基因克隆、定点突变等对序列保真度要求极高的分子克隆实验。
4. CRISPR 模板制备、突变体构建等。

-20℃ 保存，＜ 0℃ 运输。

Q1：该产品的保真度有多高？与普通Taq酶相比有何优势？

A：本产品的保真度约为普通Taq DNA聚合酶的 108倍。高保真性源于其聚合酶具备强大的 3’→5’核酸外切酶活性（即“校正功能”） ，能够切除错误掺入的核苷酸，从而保证扩增序列的高度准确，错误率远低于常规Taq酶。

Q2：该产品的延伸速度是多少？最短可缩短至多少时间？

A：本产品使用的DNA聚合酶经过了基因工程改造，其持续合成能力得到了极大增强。这使得其延伸速度可达 10 sec/kb，即可在100秒内完成一个10 kb片段的延伸，显著快于传统高保真酶（通常需要30-60 sec/kb）。

Q3：该产品是否含有染料？Dye版和非Dye版有什么区别？

A：本产品提供两种版本：

Q4：该产品能否扩增高GC含量模板？是否需要额外添加增强剂？

A：可以。本产品配方经过优化，具有较强的复杂模板兼容性，可直接扩增一定范围内的高GC含量片段。对于GC含量极高的困难模板，建议可尝试以下优化策略：1）适当提高变性温度或延长变性时间；2）使用梯度退火温度测试最佳条件。如需进一步优化，建议联系雅礼生物技术支持团队获取专业指导。

Q5: 这个MasterMix可以扩增的最大片段是多大？对长片段扩增有什么建议？
A：本产品可高效扩增长达 40 kb 的基因组片段。对于长片段PCR（特别是>10 kb的片段），成功的关键在于：

• 模板质量：使用高纯度、完整的基因组DNA至关重要，应避免模板降解或含有抑制剂。
• 引物设计：对于超过20 kb的扩增子，建议引物的GC含量高于50%，Tm值高于60°C，且长度至少24个核苷酸。
• 实验操作：配制反应体系时动作应轻柔，避免对长链DNA模板造成物理剪切。

Q6：PCR反应出现非特异性条带或弥散条带（smear），如何解决？

A：可能原因及解决方案：

若弥散条带问题持续存在，建议使用新鲜提取的高质量模板DNA，并检查所有试剂的储存状态。

Q7：MasterMix中出现沉淀是否影响使用？

A：不影响。MasterMix在低温储存或反复冻融后可能出现少量沉淀，这是正常现象。使用前请将MasterMix取出置于室温解冻，每隔10–15分钟轻柔颠倒混匀数次，直至沉淀完全溶解，然后瞬时离心收集即可正常使用。性能测试表明，多次冻融循环（最多30次）对MasterMix的PCR扩增性能无显著影响。如需长期保存，建议首次使用后分装冻存，减少反复冻融–。

Q8：如何进行PCR反应的污染防控？

建议遵循以下规范以最大程度降低PCR污染风险：

1. 分区操作：在实验室内划定专门的PCR体系配制区域，与模板处理和PCR产物分析区域严格分开；

2. 专用器具：配制区配备专用移液器、一次性带滤芯吸头及PCR管，避免交叉使用；

3. 规范操作：打开PCR试剂管前短暂离心，使液体沉降至管底，减少对手套和移液器的污染；

4. 模板管控：在自己的实验台上稀释DNA模板，仅将所需稀释液带入配制区；

5. 产物隔离：PCR完成后，切勿将含有扩增产物的PCR管带入配制区，在指定区域进行后续电泳检测等操作；

6. 设置对照：每次PCR反应均应设置无模板阴性对照（NTC），以监测是否存在DNA污染。