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预混专用颜色指示剂，可通过液体颜色变化直观判断细胞裂解、中和反应是否完全，实现操作可视化，有效避免实验操作不当导致提取失败。

50T 规格可完成 50 次标准 1-5ml 菌液质粒提取实验，试剂配比充足，性价比高，适合实验室常规批量实验使用。

经本试剂盒纯化的无内毒素质粒，纯度高无杂质污染，可常规分装后 – 20℃长期保存，不易降解，重复实验稳定性好。

普通大提试剂盒仅保证质粒纯度和去除蛋白、RNA，但残留的细菌内毒素（脂多糖）在转染时会引起细胞应激、炎症反应甚至凋亡，显著降低转染效率和细胞活性。雅礼生物YALEPIC^®无内毒素质粒大量提取试剂盒专为去内毒素设计，最终质粒内毒素含量<1EU/μg DNA，可确保敏感哺乳动物细胞、原代细胞的转染成功率，并适用于AAV包装、基因治疗等高标准下游。

产量取决于质粒拷贝数、菌株、培养基及培养条件。在标准高拷贝质粒、LB培养基条件下，处理100ml菌液通常可收获0.5-1mg高纯度无内毒素质粒DNA，500ml制备量成比例扩增。低拷贝及大型载体产量相应降低，但柱结合载量高达2.5mg，充分保证稳定回收。建议优化培养与质粒提取前确认OD值。

优化后提取的质粒DNA A260/A280典型比值在1.8-2.0之间。低于1.8可能残余蛋白质或酚类污染，高于2.0则可能存在RNA污染。本试剂盒经过严格去蛋白、去RNA优化，洗脱产物核酸纯度可稳定达到理想范围，适合直接转染、酶切及测序等应用。

可以。该试剂盒针对低拷贝质粒优化了裂解缓冲体系与结合条件，推荐增加菌液体积至300-500ml，并在洗脱前延长吸附时间或进行二次上柱，能够获得满足转染需求的无内毒素质粒DNA。配套技术指南提供详细操作建议。

建议将洗脱的质粒DNA使用试剂盒提供的洗脱液溶解，分装后于-20℃或-80℃避光保存。可在1年内保持高度稳定，内毒素含量不会随保存时间增加。避免反复冻融，长期保存建议使用低吸附EP管，并监测完整度与浓度。

Buffer类溶液可能因低温盐析出现沉淀或结晶，属于正常现象。使用前将溶液置于37℃水浴或烘箱中温和加热，间歇摇动直至完全溶解澄清，混匀后冷却至室温即可使用。沉淀溶解后完全不影响去内毒素效果与质粒提取性能。

YALEPIC^®无内毒素质粒DNA Pro Maxi大量提取试剂盒在关键指标——内毒素残留控制、产量、纯度以及转染效率上与进口主流品牌高度一致，且批次间一致性经过严格验证。已帮助众多国内生物医药企业及高校实验室替代进口方案，在细胞转染、病毒包装与体内研究中均表现优异，且兼具现货优势和性价比，是国产高品质无内毒素质粒提取的可靠选择。

本试剂盒单次处理上限为500ml菌液。若需要处理超过500ml的菌液（如1L或以上），建议分批次提取，对于超低拷贝质粒或长片段大质粒（>10kb），可在300-500ml范围内按比例适当加大菌液使用量，并同步等比增加裂解缓冲液和中和液用量，以保证菌体充分裂解和质粒高效释放。

本试剂盒通过YER去内毒素溶液与FC2过滤器双重净化机制，所得质粒内毒素残留极低（＜0.1 EU/μg），符合转染级质粒的国际通用标准。内毒素是E.coli细胞壁的主要成分，对真核细胞具有明显的细胞毒性，即使微量残留也会显著降低转染效率甚至导致细胞死亡。本试剂盒提取的质粒可直接用于原代细胞、干细胞、免疫细胞等内毒素敏感型细胞系的转染实验，也兼容HEK293、CHO、Hela等常规细胞系，实验结果表明转染效率和细胞存活率均表现优异。

低拷贝质粒（如pBR322、pACYC及其衍生载体）和大质粒（>10kb）因每个细菌的质粒拷贝数较低，需要更高的菌液处理量和优化的裂解条件。建议采取以下措施：（1）菌液使用量上调至300-500ml；（2）按原比例等比增加裂解缓冲液（PB/裂解液）和中和液用量，确保菌体完全裂解；（3）洗脱缓冲液在使用前预热至65-70℃，以提高洗脱效率；（4）适当延长硅基质膜吸附时间（可延长至5-10分钟）和洗脱时间；（5）采用二次洗脱策略收集更多质粒。具体用量参考产品说明书的优化建议。

基因组DNA污染通常由以下原因引起：（1）加入裂解液后混匀过于剧烈，打断了基因组DNA使其与质粒共纯化；（2）裂解时间过长（超过5分钟），导致基因组DNA释放增加。解决方案：加入裂解液后应温和地上下颠倒混匀4-6次，避免涡旋震荡或剧烈摇动；裂解步骤严格控制在3-5分钟内完成，切勿超时；中和后应立即进行后续过滤/离心步骤，防止基因组DNA进一步释放。

产量低的常见原因及对应解决方案包括：

• 质粒拷贝数低：低拷贝载体（如pBR322、pACYC系列）每ml菌液产量仅为0.5-2μg，需加大菌液使用量至300-500ml
• 菌体裂解不充分：确保菌体在重悬液中完全悬浮无团块，裂解液加入后充分但温和混匀
• 试剂沉淀：若裂解液或中和液出现沉淀，使用前37℃水浴加热至澄清方可使用
• 乙醇残留：漂洗后应充分离心去除残留液体，确保硅基质膜完全干燥后再加入洗脱缓冲液
• 洗脱效率低：洗脱缓冲液预热至65-70℃，可采用二次洗脱法
• 菌液新鲜度：建议使用新鲜过夜培养的菌液（培养时间12-16小时），4℃保存超过48小时的菌液产量会显著下降

本试剂盒的裂解液（含蓝色指示剂）和中和液经过专门优化设计。加入裂解液后菌悬液应呈现均匀的蓝色，表明菌体已被充分裂解；加入中和液后，若蓝色完全消失、溶液变为澄清的浅黄色或无色，表明中和反应已彻底完成。若中和后仍残留蓝色，则提示中和不充分，需要补加中和液。这一可视化设计有效降低了实验者对操作时机的判断难度，尤其适合新手使用和高通量操作场景，确保批次间提取质量的稳定性。

本试剂盒专为大肠杆菌（E.coli）宿主系统设计。酵母作为真核生物，其细胞壁比细菌细胞壁更厚、更难裂解，直接使用本试剂盒提取酵母质粒效果不理想。如需提取酵母质粒，可联系客服咨询。

本试剂盒常温运输（10-30℃），收到后可在10-30℃室温干燥条件下保存18个月。若实验室环境温度较高或湿度较大，建议将试剂盒置于2-8℃冷藏保存以延长使用寿命。需特别注意：（1）首次使用时将RNase A全部加入重悬缓冲液（Buffer PA），混匀后2-8℃保存；（2）裂解液和中和液若出现沉淀，37℃水浴加热并温和混匀至澄清后使用；（3）漂洗液若需添加乙醇，应严格按照说明书要求准确添加体积。

本试剂盒提取的质粒DNA纯度高、内毒素残留极低，适用范围广泛。具体包括：

• 细胞转染：瞬时转染、稳定转染、脂质体转染、电转染等，涵盖HEK293、CHO、Hela、干细胞、原代细胞等多种细胞类型
• 分子克隆：酶切鉴定、连接转化、TA克隆、Gateway克隆等
• 核酸扩增与检测：PCR、qPCR、测序（Sanger测序和NGS均可）
• 蛋白表达：体外转录与翻译、哺乳动物细胞表达、昆虫细胞表达
• 基因功能研究：CRISPR/Cas9基因编辑载体构建、RNA干扰、基因过表达等
• 病毒包装：慢病毒、腺病毒、AAV等病毒载体制备
• 基因治疗研究：临床前研究的质粒原料制备

相比市售主流竞品，YALEPIC^® PLUS系列的核心差异化优势体现在：（1）可视化操作系统——颜色指示剂全程指导操作，降低人为误差；（2）50分钟无需冰浴——显著短于多数竞品的60-90分钟操作时间；（3）双重去内毒素机制——YER溶液+FC2过滤器，确保转染级纯度；（4）处理范围灵活——100-500ml覆盖中量到超大量提取需求；（5）性价比优越——在保证与进口品牌同等质量的前提下，价格更具竞争力。同时雅礼生物提供完善的技术支持和售后服务，确保用户的实验顺利开展。