低浓度微量 RNA（ng 级）能用本试剂盒吗？

试剂盒配方优化，低至几十 ng 总 RNA 即可高效合成 cDNA，适配单细胞微量 RNA 反转录、低丰度基因 qPCR 检测。

运输途中冷链断裂，试剂解冻后还能正常使用吗？

短期常温解冻，及时放回 – 20℃不影响活性；长时间室温放置超过 12h 建议小样做预实验验证酶活。

YPM51341 适用于哪些样本类型？

本产品适用于动物组织、植物组织、培养细胞、血液、病毒样本等多种来源的总RNA或mRNA模板，覆盖了基因表达定量、RNA病毒检测等主流应用场景-1。

本试剂盒的gDNA去除原理是什么？

产品中预混了热敏型dsDNase，该酶能够特异性识别并降解双链DNA（dsDNA），包括基因组DNA污染，但对单链DNA（ssDNA）和RNA无作用。热敏特性使得该酶在后续高温反应中快速失活，不影响cDNA产物的完整性。

本试剂盒与“两步法”逆转录试剂相比有何优势？

本产品是“一步法”All-in-Mix试剂盒，基因组去除和cDNA合成在同一反应管内同步完成，无需分步操作，大幅缩短实验时间、减少移液步骤，从而降低样品污染风险和操作误差。而传统两步法需先完成gDNA去除，再单独进行逆转录反应，流程更繁琐。

反应温度为什么选择55℃？

本产品配套的新一代高温逆转录酶YALEPIC® Script Reverse Transcriptase Plus在50~60℃范围内均具有活性，其中55℃为其最佳反应温度。高温条件下有助于解开RNA模板的复杂二级结构，提升逆转录效率和cDNA长度完整性。

合成cDNA可以存放多久？如何保存？

合成的cDNA建议短期保存于-20℃，长期保存推荐-80℃。应避免反复冻融，以免影响qPCR定量结果的稳定性和重复性。

使用本试剂盒时需要额外添加引物吗？

不需要额外添加逆转录引物。本产品为All-in-Mix预混液，已预混了逆转录所需的关键引物组分（如Oligo(dT)和随机引物等）。

本产品对RNA模板的纯度要求高吗？

本产品的缓冲体系经过优化，对常见PCR抑制剂具有一定的耐受能力。但仍建议使用高质量的RNA模板（如OD260/280比值在1.8~2.0之间），以保证最佳的逆转录效率和cDNA产率。

本试剂盒能否用于探针法多重qPCR检测？

可以。本产品合成的cDNA同时适用于染料法和探针法qPCR检测。对于探针法多重qPCR，建议根据具体的qPCR仪器配置和探针标记要求，合理设计多重反应体系并进行优化。

产品运输时是否有温度要求？室温下会失效吗？

产品要求≤0℃冷链运输。长期保存需置于-20℃，应尽量避免反复冻融和长时间室温放置，以保证酶活性和产品稳定性。

产品质保期是多久？

在-20℃严格保存且避免反复冻融的条件下，具体有效期请以产品外包装标识为准。

为什么要去除基因组DNA（gDNA）？不去除会怎样？

在RT-qPCR实验中，RNA样品中残留的基因组DNA是最隐蔽且最具破坏性的污染源。gDNA与cDNA序列高度同源，会被qPCR引物非特异性扩增，导致假阳性结果，特别是低表达量基因（Ct值较大）更容易受到gDNA污染的干扰。如果在不含逆转录酶的对照管中出现扩增产物，说明必须从RNA样品中去除残留的gDNA。

一步法去除gDNA与传统两步法相比有什么优势？

传统两步法需要先用DNase I处理RNA模板，然后进行85℃热失活，最后再加入反转录组分进行逆转录，步骤繁琐且耗时约30分钟。一步法则将gDNA去除与逆转录反应在同一管中同步完成，只需加入模板RNA和水即可迅速反应，极大简化了操作，避免了复杂加样过程中的样品污染和RNA降解风险-。

该产品中的热敏型dsDNase与普通DNase I有什么区别？

普通DNase I对单链DNA也具有明显的降解活性，可能会影响引物和探针的稳定性。而热敏型dsDNase可特异性消化双链DNA，对单链DNA、引物、探针和RNA均无活性，确保cDNA的完整性。同时，该酶在55℃条件下5分钟即可不可逆失活，无需额外热失活步骤。

红色示踪染料会影响下游qPCR的荧光信号吗？

不会。产品中的红色示踪染料经过精心优化，不会对下游染料法或探针法qPCR的荧光信号采集产生干扰，可保证扩增灵敏度和平台期不受影响。

该产品适合哪些类型的RNA模板？

本产品适用于各类物种样本的RNA模板。新一代逆转录酶具有出色的高温稳定性和复杂模板通读能力，特别适用于GC含量高、二级结构复杂的RNA模板，以及低浓度RNA样品的逆转录反应。

RNA模板的用量范围是多少？

建议RNA模板用量为500 ng–1 μg（总RNA）。经验证，本产品可稳定扩增10 pg–1 μg范围内的总RNA，适用于低丰度基因的检测。

如何验证gDNA已被彻底去除？

可通过设置“无逆转录酶对照”（No-RT Control）进行验证：在反应体系中不加入逆转录酶，其他组分正常加入，然后进行qPCR检测。如果No-RT对照管中无扩增信号出现，说明gDNA已被成功去除。

产品如何保存？反复冻融是否影响性能？

建议长期保存于-20℃，＜0℃运输。使用后请及时放回-20℃保存以保证酶活性。应避免反复冻融，建议分装保存。

资源支持

Q: 运输途中冷链断裂，试剂解冻后还能正常使用吗？

短期常温解冻 ，及时放回 – 20℃不影响活性；长时间室温放置超过 12h 建议小样做预实验验证酶活。

雅礼生物FAQ中心汇集了用户在使用核酸提取、PCR纯化、磁珠法DNA/RNA提取等产品的常见问题。您可以按产品类型浏览，或直接搜索关键词快速定位所需答案。

共 1132 条FAQ，分 57 页显示，当前第 7 页

产品FAQ

以下FAQ来源于各产品详情页，涵盖样本保存、核酸提取、PCR/qPCR、转染、血清、耗材等品类。点击产品名称可跳转至产品详情页。

YALEPIC® All-in-Mix cDNA 第一链合成试剂盒（gDNA off）

低浓度微量 RNA（ng 级）能用本试剂盒吗？: 试剂盒配方优化，低至几十 ng 总 RNA 即可高效合成 cDNA，适配单细胞微量 RNA 反转录、低丰度基因 qPCR 检测。

运输途中冷链断裂，试剂解冻后还能正常使用吗？: 短期常温解冻，及时放回 – 20℃不影响活性；长时间室温放置超过 12h 建议小样做预实验验证酶活。

YALEPIC® All-in-RT MasterMix for qPCR (gDNA off)

YPM51341 适用于哪些样本类型？: 本产品适用于动物组织、植物组织、培养细胞、血液、病毒样本等多种来源的总RNA或mRNA模板，覆盖了基因表达定量、RNA病毒检测等主流应用场景-1。

本试剂盒的gDNA去除原理是什么？: 产品中预混了热敏型dsDNase，该酶能够特异性识别并降解双链DNA（dsDNA），包括基因组DNA污染，但对单链DNA（ssDNA）和RNA无作用。热敏特性使得该酶在后续高温反应中快速失活，不影响cDNA产物的完整性。

本试剂盒与“两步法”逆转录试剂相比有何优势？: 本产品是“一步法”All-in-Mix试剂盒，基因组去除和cDNA合成在同一反应管内同步完成，无需分步操作，大幅缩短实验时间、减少移液步骤，从而降低样品污染风险和操作误差。而传统两步法需先完成gDNA去除，再单独进行逆转录反应，流程更繁琐。

反应温度为什么选择55℃？: 本产品配套的新一代高温逆转录酶YALEPIC^® Script Reverse Transcriptase Plus在50~60℃范围内均具有活性，其中55℃为其最佳反应温度。高温条件下有助于解开RNA模板的复杂二级结构，提升逆转录效率和cDNA长度完整性。

合成cDNA可以存放多久？如何保存？: 合成的cDNA建议短期保存于-20℃，长期保存推荐-80℃。应避免反复冻融，以免影响qPCR定量结果的稳定性和重复性。

使用本试剂盒时需要额外添加引物吗？: 不需要额外添加逆转录引物。本产品为All-in-Mix预混液，已预混了逆转录所需的关键引物组分（如Oligo(dT)和随机引物等）。

本产品对RNA模板的纯度要求高吗？: 本产品的缓冲体系经过优化，对常见PCR抑制剂具有一定的耐受能力。但仍建议使用高质量的RNA模板（如OD260/280比值在1.8~2.0之间），以保证最佳的逆转录效率和cDNA产率。

本试剂盒能否用于探针法多重qPCR检测？: 可以。本产品合成的cDNA同时适用于染料法和探针法qPCR检测。对于探针法多重qPCR，建议根据具体的qPCR仪器配置和探针标记要求，合理设计多重反应体系并进行优化。

产品运输时是否有温度要求？室温下会失效吗？: 产品要求≤0℃冷链运输。长期保存需置于-20℃，应尽量避免反复冻融和长时间室温放置，以保证酶活性和产品稳定性。

产品质保期是多久？: 在-20℃严格保存且避免反复冻融的条件下，具体有效期请以产品外包装标识为准。

YALEPIC® All-in-RT RedMix (gDNA off)

为什么要去除基因组DNA（gDNA）？不去除会怎样？: 在RT-qPCR实验中，RNA样品中残留的基因组DNA是最隐蔽且最具破坏性的污染源。gDNA与cDNA序列高度同源，会被qPCR引物非特异性扩增，导致假阳性结果，特别是低表达量基因（Ct值较大）更容易受到gDNA污染的干扰。如果在不含逆转录酶的对照管中出现扩增产物，说明必须从RNA样品中去除残留的gDNA。

一步法去除gDNA与传统两步法相比有什么优势？: 传统两步法需要先用DNase I处理RNA模板，然后进行85℃热失活，最后再加入反转录组分进行逆转录，步骤繁琐且耗时约30分钟。一步法则将gDNA去除与逆转录反应在同一管中同步完成，只需加入模板RNA和水即可迅速反应，极大简化了操作，避免了复杂加样过程中的样品污染和RNA降解风险-。

该产品中的热敏型dsDNase与普通DNase I有什么区别？: 普通DNase I对单链DNA也具有明显的降解活性，可能会影响引物和探针的稳定性。而热敏型dsDNase可特异性消化双链DNA，对单链DNA、引物、探针和RNA均无活性，确保cDNA的完整性。同时，该酶在55℃条件下5分钟即可不可逆失活，无需额外热失活步骤。

红色示踪染料会影响下游qPCR的荧光信号吗？: 不会。产品中的红色示踪染料经过精心优化，不会对下游染料法或探针法qPCR的荧光信号采集产生干扰，可保证扩增灵敏度和平台期不受影响。

该产品适合哪些类型的RNA模板？: 本产品适用于各类物种样本的RNA模板。新一代逆转录酶具有出色的高温稳定性和复杂模板通读能力，特别适用于GC含量高、二级结构复杂的RNA模板，以及低浓度RNA样品的逆转录反应。

RNA模板的用量范围是多少？: 建议RNA模板用量为500 ng–1 μg（总RNA）。经验证，本产品可稳定扩增10 pg–1 μg范围内的总RNA，适用于低丰度基因的检测。

如何验证gDNA已被彻底去除？: 可通过设置“无逆转录酶对照”（No-RT Control）进行验证：在反应体系中不加入逆转录酶，其他组分正常加入，然后进行qPCR检测。如果No-RT对照管中无扩增信号出现，说明gDNA已被成功去除。

产品如何保存？反复冻融是否影响性能？: 建议长期保存于-20℃，＜0℃运输。使用后请及时放回-20℃保存以保证酶活性。应避免反复冻融，建议分装保存。

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