YALEPIC^® 无内毒素质粒DNA中量提取试剂盒（30-50ml）

YALEPIC^®无内毒素质粒 DNA 中量提取试剂盒（30~50ml ）依托经典碱裂解法实现菌体高效裂解，搭配新型硅基质膜可特异性高亲和结合质粒 DNA，精准分离去除基因组 DNA、RNA、杂蛋白等干扰杂质。试剂盒预混蓝色指示剂组分，让裂解、中和、过滤全过程可视化，降低实验操作误差。采用进口特制吸附膜与专用除内毒素过滤器双重纯化工艺，有效过滤去除内毒素污染，质粒内毒素残留严格控制在≤1EU/μg，品质稳定达标细胞转染级别。产品适配多种敏感细胞转染实验，同时兼容酶切鉴定、基因测序、PCR 扩增、体外转录等各类下游分子生物学实验，操作流程简化，全程仅需 30 分钟即可完成提取，新手也能轻松上手，是科研实验室质粒中量纯化的优选试剂。

• 高产量高纯度：单份提取最高产量可达 300μg，硅基质膜特异性吸附 DNA，有效剔除基因组 DNA、RNA 及蛋白杂质。
• 超低内毒素残留：专属过滤去内毒素工艺，质粒内毒素含量低于 1EU/µg，适配原代细胞、敏感细胞转染等高端实验。
• 快速简易操作：标准化精简步骤，全程 30 分钟完成提取，无需复杂有机物抽提，省时高效。
• 可视化实验把控：蓝指示剂组分，实验反应进程清晰可见，降低操作失误率。

• 常规30~50ml 大肠杆菌过夜培养菌液质粒中量提取
• 各类哺乳动物细胞、敏感细胞、原代细胞转染实验专用无内毒素质粒制备
• 分子生物学实验：质粒酶切、基因测序、PCR 扩增、体外转录、载体构建
• 科研实验室、生物药企、高校实验室对内毒素指标有严格要求的质粒纯化实验

常温运输；10~30℃ 室温保存一年。

Q1：本试剂盒适用于从多少毫升的菌液中提取质粒？

A：本试剂盒推荐使用 30–50ml 过夜培养的菌液（大肠杆菌，如 DH5α、TOP10 等）。对于低拷贝质粒，建议适当增加菌液量以提升产量；对于高拷贝质粒，可适当减少菌液量以确保提取效率。

Q2：提取的质粒 DNA 内毒素残留量是多少？能否直接用于敏感细胞转染？

A：本试剂盒通过专用除内毒素过滤器和优化的缓冲液体系，可将内毒素残留控制在 ≤1EU/μg 质粒DNA。该指标达到转染级别标准，提取产物可直接用于哺乳动物细胞（如HEK293、CHO等）及原代细胞的瞬时转染和稳定转染实验。若需更低内毒素水平（如<0.1EU/μg），可选择YC47015（100~300ml）,YC47018（100~500ml）两款质粒提取试剂。

Q3：试剂盒中溶液为什么是蓝色，有什么作用？

A：在细胞裂解和中和步骤中，指示剂可因 pH 变化而呈现从深蓝→淡紫→无色的颜色变化过程，帮助操作者直观判断裂解是否充分、中和是否到位，尤其适合操作不熟练的实验人员，可有效降低因中和不彻底或裂解过度导致的 DNA 损失或 RNA/蛋白质残留风险。

Q4：提取的质粒 DNA 可以用于哪些下游实验？

A：本试剂盒提取的高纯度无内毒素质粒 DNA 已通过多家实验室实际验证，适用于以下场景：

哺乳动物细胞及敏感细胞株的瞬时转染与稳定转染；

限制性内切酶消化与连接转化；

Sanger 测序及高通量二代测序建库；

PCR、qPCR、RT-PCR 及多重 PCR 扩增；

体外转录与 RNA 合成；

原核细胞的质粒转化与遗传改造。

Q5：试剂盒在室温下能保存多久？运输过程中有特殊要求吗？

A：本试剂盒在 10–30℃ 室温条件下避光密封保存，有效期为 18 个月。运输过程中支持常温运输（建议环境温度控制在 4–35℃ 范围内），无需冷链条件，极大降低了仓储和物流成本。请务必按标签标注的生产日期计算有效期，过期请勿使用以保证提取效果。

Q6：提取过程中遇到质粒产量偏低，可能是什么原因？

A：质粒产量受多种因素影响，常见原因包括：

• 质粒拷贝数：低拷贝质粒（如 pBR322 衍生载体）产量天然低于高拷贝质粒（如 pUC 系列）；
• 菌液状态：培养时间不足（OD600<2.0）或菌液老化（OD600>6.0）均影响得率；
• 裂解不充分：裂解时间不足或裂解液添加量不足，导致质粒未能完全释放；
• 洗涤过度：漂洗步骤中未按说明添加乙醇或漂洗次数过多可能导致质粒从膜上被洗脱；
• 洗脱温度：建议将洗脱液预热至 65℃ 再使用，低温洗脱会降低产量；

建议检查以上环节，按照说明书规范操作。

Q7：可以用本试剂盒提取其他菌株（如革兰氏阳性菌）中的质粒吗？

A：本试剂盒基于碱裂解法设计，专门用于革兰氏阴性菌（大肠杆菌为主）的质粒提取。对于革兰氏阳性菌（如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等），由于细胞壁结构不同，裂解条件需要额外调整（如添加溶菌酶），本试剂盒未针对此类场景专门优化，不推荐直接使用。

Q8：试剂盒中是否包含 RNase A？提取产物中是否有 RNA 残留？

A：本试剂盒的裂解液中已预混 RNase A，在裂解步骤中可有效降解菌液中的 RNA。产物经琼脂糖凝胶电泳检测时，通常不会出现明显的 RNA 拖尾带。若实验室对 RNA 残留极为敏感，可在重悬步骤后额外加入 RNase A（自备）进行加强处理。

Q9：本试剂盒与雅礼生物的小提试剂盒相比，主要区别是什么？

A：雅礼生物提供完整的

• 小提：（1–5ml 菌液）、
• 中量提：（1–5ml 菌液）、（30–50ml 菌液）
• 大提：（100–300ml 菌液）、（100–500ml 菌液）

产品线以满足不同实验规模需求。本中量提试剂盒与小提试剂盒的主要区别包括：

处理规模：中量提支持更大样本量（30–50ml vs 1–5ml）；

产量：中量提产量最高可达 300μg，小提通常为 ＜45μg；
建议根据实验规模和下游应用需求选择合适规格。