游离DNA核酸提取FAQ
血液与游离DNA提取常面临得率、纯度与片段完整性的权衡，磁珠法因通量与一致性成为主流。本专题汇总起始量、洗脱条件与下游建库适配要点。
雅礼官方解答（34 条）
试剂盒提取的 cfDNA 适合做 NGS 建库测序吗？
完全适配。产品针对短片段 cfDNA 定向优化，小片段占比高、无扩增偏好、核酸纯度高，无基因组 DNA 污染，可直接用于 NGS 文库构建、高通量测序及液体活检实验。
尿液、羊水样本可以用这款试剂盒提取 cfDNA 吗？
可以。试剂盒缓冲液体系兼容血浆、血清、羊水、尿液多种无细胞体液，能有效去除尿液杂质、羊水蛋白干扰，稳定纯化高质量游离 DNA。
提取 cfDNA 产量偏低是什么原因？如何提升得率？
① 建议采用cfDNA 专用采血管，采血后 尽快分离血浆，避免白细胞裂解释放 gDNA 污染；② 可适当提升样本起始体积至 3-5ml；③ 严格按照说明书裂解、结合步骤操作，磁珠充分混匀孵育，可小幅提升洗脱体积增加回收量。
洗脱后的 cfDNA 可以长期保存吗？
洗脱后的 cfDNA 建议短期 4℃保存，长期需放置 – 20℃分装冻存，避免反复冻融，可最大程度维持核酸完整性。
提取的 cfDNA 适合做哪些下游实验，是否有抑制剂残留？
纯化产物无蛋白、盐离子等抑制剂残留，可直接用于qPCR 荧光定量、NGS 二代测序、文库构建、无创产前筛查、肿瘤液态活检、甲基化分析等实验。
样本采集后如何保存，会影响 cfDNA 提取得率吗？
新鲜血浆建议分离后短期 4℃保存，长期需 – 20℃分装冻存，避免反复冻融；若无法及时处理血液样本，建议使用 cfDNA 专用稳定剂采血管，防止血细胞裂解释放基因组 DNA 污染。
试剂盒提取是否会造成短片段 cfDNA 丢失，有无片段偏好？
本试剂盒针对短片段 cfDNA 定向优化，自研纳米磁珠可高效捕获小片段核酸，片段覆盖度均匀，无筛选偏好，最大程度保留样本原始核酸信息。
洗脱后的 cfDNA 样品该如何保存，能存放多久？
洗脱后的 cfDNA 短期 4℃可保存 1~3 天，长期建议分装后 – 20℃或 – 80℃冻存，避免反复冻融，防止核酸降解影响下游实验结果。
磁珠法游离DNA大量提取试剂盒最大支持多少体积的样本起始量？
标准适配1~5ml血浆、血清、羊水、尿液等无细胞体液，是大体积 cfDNA 提取专用试剂盒，满足大样本量富集需求。
可以用于全自动核酸提取仪吗？有适配方案吗？
支持手动提取与全自动高通量工作站双模式；同时提供 A/B/C 三款预装型试剂，无需手动配置体系，直接适配主流自动化提取设备，批量处理更高效。
磁珠法游离DNA大量提取试剂盒运输和保存需要冷藏冷冻吗？
无需冷链。支持常温运输，日常 10~30℃室温避光即可保存，无需冷藏冷冻，仓储和使用更便捷。
预装型和普通款试剂盒有什么区别？
普通款为散装试剂，需自行配置体系；A/B/C 预装型为即用型预制试剂，孔板预分装，直接上机使用，节省实验准备时间，更适合高通量自动化实验。
提取过程会用到酚、氯仿等有毒试剂吗？
不会。试剂盒采用温和裂解磁珠纯化法，全程无酚、氯仿、β- 巯基乙醇等有毒有机溶剂，实验安全无污染。
尿液样本应该如何采集和保存以保证cfDNA质量？
尿液中的游离DNA（cfDNA）在采集后容易降解，因此建议：
- 立即处理：采集后应尽快进行核酸提取，最好在4小时内完成。
- 使用稳定剂：若无法及时处理，建议使用商业化的尿液稳定剂（如YALEPIC 尿液cfDNA保存等），可在常温下稳定cfDNA长达7-14天，有效防止DNase降解和细胞基因组DNA污染。
- 离心去细胞：提取前建议以1,600 × g离心10分钟去除细胞和碎片。
- 避免反复冻融：样本应避免反复冻融，以免导致DNA降解。
本试剂盒最低可以检测到多少cfDNA？回收率如何？
本试剂盒采用高效的纳米磁珠富集技术，针对低丰度cfDNA进行了深度优化，模拟样本回收率可达≥80%，纯化产物无PCR抑制剂残留。健康人尿液cfDNA产量因个体差异较大，本试剂盒的磁珠富集技术可有效回收这些低丰度核酸片段。
提取的cfDNA纯度和片段大小是多少？
本试剂盒提取的cfDNA产物A260/A280比值在1.7-2.0之间，纯度较高。尿液cfDNA通常以短片段形式存在，主要分布在50-300 bp之间（核心片段约150-200 bp），本试剂盒对低分子量核酸进行了定向优化，可高效回收这些短片段cfDNA。
磁珠法尿液游离DNA大量提取试剂盒是否适配自动化核酸提取仪？
可以。本试剂盒专为自动化提取场景优化，可适配市面主流的磁棒式自动化核酸提取仪，支持1-20ml大体积尿液样本的高通量自动化处理，尤其适合需要同时处理多个样本的实验室场景。
该试剂盒与同类产品（如 Q 牌、Z 牌等）相比有何优势？
本试剂盒具有以下突出优势：
- 大体积投入：最大支持20ml尿液样本，而许多竞品仅支持0.5-10ml；
- 自动化兼容：优化的磁珠法流程完美适配自动化工作站，节省人工操作时间；
- 高纯度：纳米磁珠+特制缓冲液系统有效去除尿液中的尿素、结晶体等抑制剂；
- 成本效益：在保证高质量提取效果的同时，提供更具竞争力的价格；
- 可提供备案版：支持医疗器械备案版本，满足临床转化需求。
试剂盒可以同时提取基因组DNA（gDNA）和游离DNA（cfDNA）吗？
本试剂盒专为游离DNA（cfDNA）提取设计，直接从尿液上清中纯化cfDNA。如需从同一尿液样本中同时提取gDNA和cfDNA，建议将样本离心分离后分别处理：细胞沉淀用于gDNA提取，上清用于cfDNA提取，可选择搭配专门的尿液基因组DNA提取试剂盒使用。
磁珠法尿液游离DNA大量提取试剂盒应该如何储存？有效期多长？
本试剂盒在10-30℃室温条件下保存即可，有效期12个月。蛋白酶K组分建议在-20℃长期保存，溶解后可短期室温储存。所有组分避免阳光直射和潮湿环境。常温储存和运输的设计大幅降低了冷链成本，方便实验室日常使用。
磁珠法尿液游离DNA大量提取试剂盒可以分多次使用吗？
可以。试剂盒按48次规格提供，组分可多次取用。使用时请保持操作环境的洁净，避免交叉污染。开启后的试剂瓶应及时盖紧，按照说明书推荐的储存条件存放。磁珠悬浮液在每次取用前需充分混匀以确保磁珠分布均匀。
提取的cfDNA可以用于哪些下游实验？
本试剂盒提取的cfDNA产物纯度高、无抑制剂残留，可直接用于多种下游分子生物学实验，包括但不限于：qPCR、dPCR（数字PCR）、NGS文库构建、全基因组测序、靶向测序、甲基化检测、基因芯片分析等。
cfDNA提取产物中会有基因组DNA（gDNA）污染吗？
本试剂盒针对cfDNA进行了定向富集设计，有效减少基因组DNA的共纯化。但为了最大程度避免gDNA污染，建议在cfDNA提取前对尿液样本进行充分离心（1,600 × g离心10分钟），以去除细胞和细胞碎片。
提取的cfDNA产量很低，可能是什么原因？应如何解决？
产量偏低可能由以下原因引起：
| 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|
| 样本中cfDNA本底含量低 | 增加起始样本量至最大允许量（20ml） |
| 尿液样本未经稳定处理，cfDNA已降解 | 采集后立即处理，或使用尿液稳定剂 |
| 磁珠未充分混匀或结合时间不足 | 使用前充分涡旋磁珠，确保结合时间充分 |
| 洗脱体积过小 | 适当增加洗脱体积以提高总回收率 |
| 样本中含有高浓度抑制剂 | 确保按照说明书步骤充分洗涤 |
如何评估提取的cfDNA质量？
建议通过以下方法评估提取的cfDNA质量：
- 紫外分光光度法：检测A260/A280比值，应在1.7-2.0之间；
- 琼脂糖凝胶电泳：尿液cfDNA通常以弥散条带形式出现在50-300 bp区域；
- qPCR检测：使用内参基因（如GAPDH、RNase P）进行扩增，通过Ct值评估产量和纯度；
- 片段分析仪：使用Agilent Bioanalyzer或类似设备精确分析cfDNA的片段大小分布。
- 对于极低丰度的cfDNA样本，传统的紫外分光光度法可能因灵敏度不足而无法准确检测，建议优先使用荧光定量法（如Qubit）或qPCR法进行定量评估。
磁珠法尿液游离DNA大量提取试剂盒是否有医疗器械备案？
是的，本产品可提供医疗器械备案版本。备案版试剂盒在组分和生产工艺上与科研版保持一致，但额外满足医疗器械相关的质量体系要求，适用于IVD试剂盒研发、临床检测方法开发等需要合规资质的应用场景。如有医疗器械备案版需求，请联系雅礼生物销售团队。
尿液作为液体活检样本相比血液有哪些优势？
尿液作为cfDNA来源具有以下显著优势：
- 完全无创：样本采集无痛、无风险，患者接受度高；
- 可重复采样：方便进行纵向研究和疾病动态监测；
- 样本量大：尿液可获取大体积样本，弥补cfDNA丰度低的不足；
- 背景干净：尿液蛋白浓度仅为血液的约1/1000，提取更容易，PCR抑制剂干扰较少；
- 感染风险低：尿液对HIV等病原体的传染性远低于血液。
该试剂盒可以提取尿液中的病毒DNA吗？
可以。本试剂盒的磁珠富集技术对多种来源的游离DNA具有广泛的捕获能力，包括尿液中的病毒DNA（如HPV、EBV、巨细胞病毒等），适用于尿液病原体核酸检测等应用。
磁珠法游离DNA小量提取试剂盒适配哪些样本类型，样本起始用量范围是多少？
适配血浆、血清、羊水等无细胞体液；标准起始样本量为0.2~1mL，兼容 EDTA 常规采血管、Streck 等 cfDNA 专用稳定剂采血管采集的血液样本。
磁珠法游离DNA小量提取试剂盒能否用于全自动核酸提取仪，适配哪些通道机型？
完全支持自动化提取，兼容32 通道、96 通道主流核酸提取仪，同时配套优化预装型试剂（A 型 / B 型 / C 型），无需手动配液，直接上机使用。
为什么提取后 Nanodrop 检测浓度偏低，是提取失败吗？
不是提取失败。cfDNA 本身在血浆中天然含量极低，属于微量核酸；Nanodrop 紫外检测灵敏度不足，易出现数值偏低偏差，推荐使用 Qubit 高灵敏荧光定量仪检测浓度，结果更精准。
磁珠法游离DNA小量提取试剂盒储运需要冷链吗，室温保存有效期多久？
无需冷链，支持常温运输；10~30℃室温密封避光保存，未开封状态下有效期稳定，避免放置阴冷潮湿或高于 35℃环境。
预装型和普通款试剂盒有什么区别，该如何选择？
普通款 YM26004 为标配试剂，可自行配置适配手动 / 仪器；YM26004-A/B/C 为预装型，提前分装适配仪器耗材，开盖即用，省去配液步骤，适合高通量批量实验，32T 选 A 型、48T 选 B 型、96T 选 C 型。
提取过程是否需要使用酚、氯仿等有毒试剂？
全程无需酚、氯仿、β- 巯基乙醇等有毒有机溶剂，依靠磁珠吸附 + 专属洗涤缓冲液纯化，操作安全，实验环境更友好。
