反转录试剂FAQ

这款试剂盒一步去 gDNA 原理是什么？处理后的 RNA 还需要单独 DNase I 消化吗？

试剂盒 Mix 内置优化型 gDNA 去除组分，在逆转录预孵育阶段原位降解基因组 DNA，常规总 RNA 样本无需额外 DNase 单独处理；高 gDNA 污染粗提 RNA 可适当延长预孵育时间，即可彻底除杂，规避 qPCR 基因组非特异扩增。

试剂盒合成 cDNA 最长片段能达到多少？适合长片段基因克隆吗？

搭配自研无 RNase H 逆转录酶，最优条件下可合成15kb 全长 cDNA，常规条件下可合成8~10kb，无 RNA 水解副作用，适配大片段目的基因克隆、全长 cDNA 文库构建实验。

试剂盒自带引物是什么类型？可以替换基因特异性 GSP 引物吗？

试剂盒预混 Oligo dT + 随机六聚体混合引物，通用绝大多数 mRNA 反转录；如需做特异性基因反转录，可替换自备基因特异性引物，不影响 gDNA 去除与逆转录酶活性。

产物 cDNA 可以同时用于普通 PCR 和荧光定量 qPCR 吗？

可以，本试剂盒产物经过 gDNA 彻底去除，兼容常规琼脂糖 PCR 扩增与 SYBR Green 法 qPCR 定量，是一管 cDNA 多用的科研反转录试剂。

试剂盒 100rxns 规格的单反应体系是多少 μL？

标准单反应体系为 20μL，100rxns 可完成 100 次标准 20μL 反转录实验，可按实验需求按比例放大反应体系。

RNA 样本降解还能用这款试剂盒做逆转录吗？

产品逆转录酶热稳定性强，对轻微降解 RNA 仍有不错反转录效率；严重降解 RNA 建议重新提取合格总 RNA，保障 cDNA 得率与 qPCR 重复性。

试剂盒 – 20℃保存有效期多久？反复冻融会失效吗？

原装未开封 – 20℃避光保存有效期 12 个月；试剂反复冻融会造成酶活下降，建议收到后分装小规格冻存，减少冻融次数。

可以用于细菌、真菌原核生物 RNA 反转录吗？

适配动植物细胞、细菌、真菌、昆虫等多物种总 RNA，原核 RNA 无 polyA 尾样本依靠预混随机引物高效完成 cDNA 合成。

做完逆转录的 cDNA 如何保存？

新鲜产物短期 4℃存放 1–3 天，长期分装后 – 20℃或 – 80℃冷冻保存，避免反复冻融降解。

低浓度微量 RNA（ng 级）能用本试剂盒吗？

试剂盒配方优化，低至几十 ng 总 RNA 即可高效合成 cDNA，适配单细胞微量 RNA 反转录、低丰度基因 qPCR 检测。

运输途中冷链断裂，试剂解冻后还能正常使用吗？

短期常温解冻 ，及时放回 – 20℃不影响活性；长时间室温放置超过 12h 建议小样做预实验验证酶活。

YPM51341 适用于哪些样本类型？

本产品适用于动物组织、植物组织、培养细胞、血液、病毒样本等多种来源的总RNA或mRNA模板，覆盖了基因表达定量、RNA病毒检测等主流应用场景-1。

本试剂盒的gDNA去除原理是什么？

产品中预混了热敏型dsDNase，该酶能够特异性识别并降解双链DNA（dsDNA），包括基因组DNA污染，但对单链DNA（ssDNA）和RNA无作用。热敏特性使得该酶在后续高温反应中快速失活，不影响cDNA产物的完整性。

本试剂盒与“两步法”逆转录试剂相比有何优势？

本产品是“一步法”All-in-Mix试剂盒，基因组去除和cDNA合成在同一反应管内同步完成，无需分步操作，大幅缩短实验时间、减少移液步骤，从而降低样品污染风险和操作误差。而传统两步法需先完成gDNA去除，再单独进行逆转录反应，流程更繁琐。

反应温度为什么选择55℃？

本产品配套的新一代高温逆转录酶YALEPIC^® Script Reverse Transcriptase Plus在50~60℃范围内均具有活性，其中55℃为其最佳反应温度。高温条件下有助于解开RNA模板的复杂二级结构，提升逆转录效率和cDNA长度完整性。

合成cDNA可以存放多久？如何保存？

合成的cDNA建议短期保存于-20℃，长期保存推荐-80℃。应避免反复冻融，以免影响qPCR定量结果的稳定性和重复性。

使用本试剂盒时需要额外添加引物吗？

不需要额外添加逆转录引物。本产品为All-in-Mix预混液，已预混了逆转录所需的关键引物组分（如Oligo(dT)和随机引物等）。

本产品对RNA模板的纯度要求高吗？

本产品的缓冲体系经过优化，对常见PCR抑制剂具有一定的耐受能力。但仍建议使用高质量的RNA模板（如OD260/280比值在1.8~2.0之间），以保证最佳的逆转录效率和cDNA产率。

本试剂盒能否用于探针法多重qPCR检测？

可以。本产品合成的cDNA同时适用于染料法和探针法qPCR检测。对于探针法多重qPCR，建议根据具体的qPCR仪器配置和探针标记要求，合理设计多重反应体系并进行优化。

产品运输时是否有温度要求？室温下会失效吗？

产品要求≤0℃冷链运输。长期保存需置于-20℃，应尽量避免反复冻融和长时间室温放置，以保证酶活性和产品稳定性。

产品质保期是多久？

在-20℃严格保存且避免反复冻融的条件下，具体有效期请以产品外包装标识为准。

为什么要去除基因组DNA（gDNA）？不去除会怎样？

在RT-qPCR实验中，RNA样品中残留的基因组DNA是最隐蔽且最具破坏性的污染源。gDNA与cDNA序列高度同源，会被qPCR引物非特异性扩增，导致假阳性结果，特别是低表达量基因（Ct值较大）更容易受到gDNA污染的干扰。如果在不含逆转录酶的对照管中出现扩增产物，说明必须从RNA样品中去除残留的gDNA。

一步法去除gDNA与传统两步法相比有什么优势？

传统两步法需要先用DNase I处理RNA模板，然后进行85℃热失活，最后再加入反转录组分进行逆转录，步骤繁琐且耗时约30分钟。一步法则将gDNA去除与逆转录反应在同一管中同步完成，只需加入模板RNA和水即可迅速反应，极大简化了操作，避免了复杂加样过程中的样品污染和RNA降解风险-。

该产品中的热敏型dsDNase与普通DNase I有什么区别？

普通DNase I对单链DNA也具有明显的降解活性，可能会影响引物和探针的稳定性。而热敏型dsDNase可特异性消化双链DNA，对单链DNA、引物、探针和RNA均无活性，确保cDNA的完整性。同时，该酶在55℃条件下5分钟即可不可逆失活，无需额外热失活步骤。

红色示踪染料会影响下游qPCR的荧光信号吗？

不会。产品中的红色示踪染料经过精心优化，不会对下游染料法或探针法qPCR的荧光信号采集产生干扰，可保证扩增灵敏度和平台期不受影响。

该产品适合哪些类型的RNA模板？

本产品适用于各类物种样本的RNA模板。新一代逆转录酶具有出色的高温稳定性和复杂模板通读能力，特别适用于GC含量高、二级结构复杂的RNA模板，以及低浓度RNA样品的逆转录反应。

RNA模板的用量范围是多少？

建议RNA模板用量为500 ng–1 μg（总RNA）。经验证，本产品可稳定扩增10 pg–1 μg范围内的总RNA，适用于低丰度基因的检测。

如何验证gDNA已被彻底去除？

可通过设置“无逆转录酶对照”（No-RT Control）进行验证：在反应体系中不加入逆转录酶，其他组分正常加入，然后进行qPCR检测。如果No-RT对照管中无扩增信号出现，说明gDNA已被成功去除。

产品如何保存？反复冻融是否影响性能？

建议长期保存于-20℃，＜0℃运输。使用后请及时放回-20℃保存以保证酶活性。应避免反复冻融，建议分装保存。

合成的cDNA可以用于哪些下游实验？

合成的第一链cDNA可广泛应用于文库构建、普通PCR、qPCR（染料法及探针法）、杂交等分子生物学实验。

反应温度如何设置？

本产品可在45–60℃范围内进行逆转录反应。对于具有复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，建议适当提高反应温度（如55℃），有助于提升扩增效率和灵敏度

YALEPIC®

Script X cDNA第一链合成试剂盒适用于哪些实验？

适用于RT-PCR、RT-qPCR基因表达分析、全长cDNA克隆、RNA-seq文库构建、杂交等多种下游应用。特别适合具有复杂二级结构的RNA模板及低丰度基因的逆转录。

该试剂盒的逆转录酶与普通M-MLV逆转录酶有何区别？

Script X Reverse Transcriptase是在M-MLV（RNase H-）基础上经分子改造的全新变体，大幅提高了热稳定性，可在较高反应温度下有效打开RNA复杂二级结构，增强模板亲和力和行进性，同时具有更高的杂质耐受度。全长cDNA合成能力可达15 kb，远优于传统M-MLV酶。

使用该试剂盒时RNA模板的起始量是多少？

宽泛的模板起始范围：1 pg ~ 5 μg总RNA。无论是微量样本还是常规RNA样本均可兼容，尤其适合低丰度基因的表达分析。

能否直接使用cDNA合成产物进行qPCR？

可以。第一链cDNA合成反应液无需纯化，可直接作为PCR或qPCR模板使用。建议合成反应液的加入量不超过PCR总反应体系的1/10，以保证最佳扩增效率。

RNA样本中含有杂质时是否可以使用该试剂盒？

可以。Script X Reverse Transcriptase对常见逆转录抑制物（如乙醇、胍盐、肝素等）具有较高的耐受度，即便RNA样本中含有少量杂质，仍能保持高效逆转录性能，可减少RNA纯化步骤，节约时间和成本。

如何选择逆转录引物？Oligo(dT)20和随机引物有何区别？

Oligo(dT)20：特异性结合mRNA的poly(A)尾，适用于分析mRNA表达及全长cDNA合成

随机引物：随机结合RNA模板上的多个位点，适用于无poly(A)尾的RNA（如细菌RNA）或分析RNA所有区域

试剂盒中的Oligo(dT)20和随机引物独立提供，用户可根据实验需求灵活选择或混合使用。

该试剂盒的最大cDNA合成长度是多少？

通过优化的Script X Reverse Transcriptase，最高可合成长达15 kb的全长cDNA，适用于长链基因的克隆和全长转录本分析。

试剂盒应如何保存和运输？

保存：-20℃长期保存，建议分装保存，避免反复冻融

运输：<0℃冰袋或干冰运输

取用时请在冰上操作，防止酶活性下降。

该试剂盒与雅礼生物其他cDNA合成试剂盒有何区别？

YALEPIC^® Script X系列为高性价比通用型cDNA第一链合成试剂盒，侧重于宽范围RNA模板的兼容性和复杂二级结构RNA的高效逆转录。公司另有一步gDNA去除及第一链cDNA合成试剂盒，适用于需同步去除基因组DNA污染的实验需求。用户可根据下游应用需求选择合适产品。

什么是“一步法gDNA去除及第一链cDNA合成试剂盒”？与传统两步法相比有何优势？

一步法gDNA去除及第一链cDNA合成试剂盒是在同一反应体系中同时完成基因组DNA（gDNA）去除和第一链cDNA合成两大步骤的创新产品。传统两步法需要先用DNase I处理去除gDNA，再进行RNA纯化和cDNA合成，操作繁琐且容易造成RNA降解和损失。本产品采用具有DNA分解活性的特殊gDNA Remover（热敏dsDNase），与新一代逆转录酶协同工作，一步加样即可同步完成gDNA去除与cDNA合成，极大简化了操作流程，避免了多次加样带来的样品交叉污染和RNA降解风险，尤其适合高通量基因表达分析和微量RNA样品的处理。

本试剂盒可以合成多长的cDNA片段？对复杂RNA模板的效果如何？

本试剂盒采用新一代YALEPIC^® Script逆转录酶，可在50~60℃（最佳55℃）温度范围内合成最长8 kb的第一链cDNA。高温逆转录条件可有效打开RNA模板的二级结构，因此特别适合GC含量高、富含二级结构的复杂RNA模板（如具有发夹结构、高级折叠的RNA）的逆转录实验。相比在37℃或42℃条件下反应的常规逆转录酶，本产品的耐热性更优，复杂模板的cDNA得率和全长比例显著提升。

gDNA去除组分会不会影响后续的cDNA合成或qPCR检测？

不会。本试剂盒采用的热敏dsDNase具有特异性降解双链DNA（即基因组DNA）的能力，而对单链RNA和单链cDNA无活性影响。该酶在55℃反应条件下可快速不可逆失活，完成gDNA去除任务后自动失去活性。反应结束后仅需85℃加热2~5分钟即可彻底灭活所有酶组分，不会对cDNA产物的稳定性和后续qPCR检测产生任何干扰。经本产品处理的cDNA可长久稳定保存，qPCR定量结果可靠，引物设计也无需跨外显子设计，简化了实验设计流程–。

试剂盒中包含哪些逆转录引物？能否使用基因特异性引物（GSP）？

本试剂盒以单组分形式分别提供Oligo(dT)20和Random Hexamers（N6随机引物） 两种逆转录引物，用户可根据实验需求灵活选择或组合使用：

• Oligo(dT)20：特异性结合mRNA的poly(A)尾，适合检测具有poly(A)结构的真核生物mRNA；
• Random Hexamers：随机结合RNA模板各区域，适合总RNA、原核生物RNA、病毒RNA及非编码RNA（lncRNA、ncRNA）的逆转录。
• 此外，用户也可以根据实验设计使用基因特异性引物（GSP） 替代上述引物，进行靶向基因的逆转录反应。如进行qPCR检测，建议将Oligo(dT)与Random引物混合使用，可获得更全面的cDNA覆盖率。

本产品的RNA模板推荐用量是多少？微量RNA样品能否使用？

本产品推荐的RNA模板用量最佳范围为50 ng ~ 2 μg总RNA（20 μL反应体系）。若总RNA量超过2 μg，请按比例扩大反应体系。由于试剂盒中采用的gDNA Remover和逆转录酶具有高效的工作性能，产品对低浓度RNA模板具有极好的兼容性——即使RNA模板体积可加到总反应体积的75%~80%，仍能保证稳定有效的逆转录效率。因此，本试剂盒特别适合微量RNA样品（如激光显微切割获得的少量细胞、稀有组织样本）的基因表达分析。

合成的cDNA可以用于哪些下游实验？能否同时用于PCR和qPCR？

合成的第一链cDNA适用范围广泛：

• RT-qPCR：兼容SYBR Green染料法和TaqMan探针法定量PCR，结果准确可靠；
• RT-PCR：可用于常规PCR扩增目的基因片段；
• cDNA文库构建：可合成长达15 kb的全长cDNA，适合文库构建；
• 基因表达分析：适用于高拷贝和低拷贝基因检测；
• 引物延伸：用于转录起始位点分析；
• SAGE：用于基因表达连续分析。

本产品合成的cDNA可同时用于常规PCR和qPCR检测，尤其推荐用于需要高灵敏度定量分析的qPCR。

产品应该如何保存和运输？反复冻融会影响产品性能吗？

本产品建议在-20℃条件下长期保存，避免反复冻融。初次使用前请将各组分充分解冻、混匀并离心收集至管底后分装使用。反复冻融会导致酶活性下降，影响反应效率，因此建议将试剂盒分装为小份（如按10次反应分装），每次取用一份。产品运输条件为干冰/冰袋运输（＜0℃），确保产品在运输过程中保持低温状态。在推荐保存条件下，产品有效期为12个月。

如果qPCR检测结果出现Ct值偏高或无信号，可能是什么原因？

qPCR检测出现Ct值偏高或无信号通常有以下几种可能原因及解决方案：

可能原因	解决方案
RNA模板质量不佳（降解或纯度低）	使用高质量的RNA样品，检测A260/A280和A260/A230比值，确保完整性
RNA模板用量过低	将RNA投入量调整至50 ng ~ 2 μg范围内
RNA模板用量过高（＞2 μg）	按比例扩大反应体系，或适当稀释RNA模板
逆转录反应温度/时间不当	确保采用推荐反应条件：55℃孵育15~30分钟（qPCR）或30~60分钟（PCR）
qPCR引物设计问题	引物特异性不足或Tm值不匹配，建议重新设计或验证引物特异性
反应体系未充分混匀	配制体系后轻弹混匀或短时涡旋，短暂离心收集反应液

若问题持续存在，建议设置不含逆转录酶的阴性对照（No-RT Control），以排除基因组DNA残留污染引起的假阳性信号–。

本产品与市场上其他品牌的区别是什么？

与主要竞品相比，雅礼的核心差异化在于：引物以单组分形式独立提供，用户可以自由搭配Oligo(dT)和Random引物的比例，甚至替换为基因特异性引物（GSP），灵活度远高于竞品的预混模式。这一设计尤其适合需要精准调控引物配比的专业研究场景。

产品中含有RNase抑制剂吗？如何确保RNA不被降解？

是的，本产品的逆转录MasterMix中已预加了高效的RNase抑制剂（RNase Inhibitor），可在整个反应过程中有效保护RNA模板不被降解，确保cDNA合成的完整性和产量。为进一步确保RNA稳定性，建议用户在实验操作中注意以下几点：

• 全程在冰上操作，低温条件可抑制RNase活性；
• 使用RNase-free的枪头、离心管等耗材；
• 操作过程中佩戴口罩和手套，避免RNase污染；
• RNA样品应避免反复冻融，建议分装保存。

这款试剂盒和通用款（YPM51311）有什么区别？我该选哪一款？

两者都是一步法同步去gDNA + 第一链cDNA合成试剂盒。本款（YPM51811）为 PCR 专用款，缓冲体系与酶配比针对常规PCR与RT-PCR场景深度优化，可合成 ≤15 kb 的第一链cDNA，适合以基因片段扩增、半定量表达分析为主要目的的实验；通用款（YPM51311）则在 PCR 与 qPCR（荧光定量）之间做了双向兼容。若你的下游主要是 RT-PCR 扩增目的基因，选本款即可，性价比更高。

什么是”一步法”？与传统两步法相比优势在哪？

传统两步法需先用 DNase I 处理去除 gDNA，再纯化 RNA，最后单独做逆转录——三次操作、三次移液，RNA 反复暴露极易降解和交叉污染。本产品采用具 DNA 分解活性的热敏 dsDNase 与新一代逆转录酶协同工作，一步加样即可在同一反应管内同步完成 gDNA 去除与 cDNA 合成，大幅缩短流程、降低污染风险，尤其适合微量样本和高通量实验。

本试剂盒最长能合成多长的cDNA片段？

本试剂盒采用新一代 YALEPIC^® Script Reverse Transcriptase Plus 逆转录酶，在 50~60℃（最佳 55℃）温度区间内，最长可合成 ≤15 kb 的第一链cDNA，能够满足绝大多数全长基因克隆与文库构建对片段长度的需求。相比常规 37℃/42℃ 逆转录酶，高温反应条件可有效打开 RNA 二级结构，复杂模板的全长比例更高。

gDNA去除组分会不会干扰后续的cDNA合成或PCR？

不会。热敏 dsDNase 特异性降解双链 DNA（即基因组 DNA），对单链 RNA 和单链 cDNA 无活性影响，且该酶在 55℃ 反应条件下会快速不可逆失活，完成去 gDNA 任务后自动失去活性。反应结束仅需 85℃ 加热 2~5 分钟即可彻底灭活全部酶组分，不会对 cDNA 产物稳定性与后续 PCR 检测产生任何干扰。经本产品处理的 cDNA 可长久稳定保存，因此 PCR 引物设计也无需跨外显子设计，简化了实验设计流程。

试剂盒提供哪些逆转录引物？可以自己搭配或换成GSP吗？

可以。本试剂盒以单组分形式独立提供 Oligo(dT)₂₀ 与 Random Hexamers（N6 随机引物），你可根据实验需求灵活选择、自由搭配比例，甚至替换为基因特异性引物（GSP） 进行靶向逆转录——灵活度显著高于竞品的预混模式。

• Oligo(dT)₂₀：特异性结合 mRNA 的 poly(A) 尾，适合真核生物 mRNA 检测；

• Random Hexamers：随机结合 RNA 各区域，适合总RNA、原核RNA、病毒RNA及非编码RNA 逆转录。

若用于 RT-PCR 扩增，推荐 Oligo(dT) 与 Random 引物混合使用，可获得更全面的 cDNA 覆盖率。

RNA模板的推荐用量是多少？微量样本能用吗？

20 μl 反应体系中，推荐总RNA 用量为 50 ng ~ 2 μg；若投入量超过 2 μg，请按比例扩大反应体系。本产品对低浓度 RNA 模板兼容性极佳——RNA 模板体积可加至总反应体积的 75%~80%，仍能保持稳定的逆转录效率，因此特别适合激光显微切割样本、稀有组织、少量细胞等微量 RNA 的基因表达分析。

哪些下游实验可以使用本产品合成的cDNA？

合成的第一链cDNA 适用范围广泛：

• RT-PCR：常规 PCR 扩增目的基因片段、半定量基因表达检测；

• 基因表达分析：高拷贝与低拷贝基因检测；

• cDNA文库构建：合成长达 15 kb 的片段，适合文库前期构建；

• 引物延伸 / SAGE：转录起始位点分析、基因表达连续分析。

如何保存和运输？反复冻融有影响吗？

产品在 -20℃ 条件下长期保存，运输条件为 ＜0℃（干冰/冰袋）。反复冻融会降低酶活性，建议初次解冻后充分混匀离心，并按次分装为小份（如按 10 次反应用量分装），每次取用一份，避免整管反复冻融。

PCR/RT-PCR 结果不理想（Ct偏高、条带弱或无扩增）怎么排查？

常见原因及解决方案：

可能原因	解决方案
RNA模板质量差（降解或纯度低）	检测 A260/A280、A260/A230 比值，确保RNA完整性
RNA模板用量过低	调整至 50 ng ~ 2 μg 推荐范围
RNA模板用量过高（＞2 μg）	按比例扩大反应体系，或适当稀释模板
逆转录温度/时间不当	采用推荐条件：55℃ 孵育 30min
引物特异性不足或Tm不匹配	重新设计或验证引物特异性
反应体系未充分混匀	轻弹混匀或短时涡旋，短暂离心收集反应液

若问题持续，建议设置 不含逆转录酶的阴性对照（No-RT Control），排除 gDNA 残留导致的假阳性。

产品含RNase抑制剂吗？如何确保RNA不被降解？

含。 本产品逆转录 MasterMix 中已预加高效 RNase 抑制剂，可在整个反应过程保护 RNA 模板不被降解，确保 cDNA 合成的完整性与产量。为进一步保障 RNA 稳定性，建议：

• 全程冰上操作，低温抑制 RNase 活性；

• 使用 RNase-free 枪头、离心管等耗材；

• 操作时佩戴口罩与手套，避免外源 RNase 污染；

• RNA 样品避免反复冻融，建议分装保存。

YALEPIC®

MagEVO 磁珠法唾液DNA提取试剂盒适用于哪些类型的样本？

本试剂盒适用于新鲜唾液样本、含保存液的唾液样本以及口腔拭子样本。样本收集过程无痛、无创，受试者仅需吐取适量唾液即可完成采样，既适用于医院检验科和第三方医学检验所的批量检测，也适用于科研院校的遗传学研究及法医鉴定机构的人员筛查。

YALEPIC®

血液直扩裂解液可以用于哪些类型的血液样本？

本裂解液兼容广泛的血液样本类型，包括：新鲜采集的抗凝血（EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝均可）、4°C短期储存的血液、-20°C或-80°C长期冻存的血液，以及Whatman 903、FTA卡等商用血卡上的干血渍样本。不同类型的血液样本在裂解效果和下游扩增性能上均表现稳定。

YALEPIC®

血液直扩裂解液是否通过相关质量认证？是否可以用于临床诊断？

本产品严格按照医疗器械生产管理体系生产，每一批次均经过严格的质检放行。但根据中国医疗器械监管法规，本产品仅供科研使用，不可直接用于临床诊断。如需临床诊断用途，客户需自行完成相关注册和验证工作。雅礼生物可根据客户需求提供OEM定制和临床报证技术支持。