体液样本DNA提取FAQ

适用于RT-PCR、RT-qPCR基因表达分析、全长cDNA克隆、RNA-seq文库构建、杂交等多种下游应用。特别适合具有复杂二级结构的RNA模板及低丰度基因的逆转录。

1. 采集前30分钟内避免进食、饮水、吸烟或咀嚼口香糖，以免影响DNA质量；

2. 采集前可用清水轻轻漱口，去除口腔中的食物残渣；

3. 建议采集200~500 μL新鲜唾液作为起始样本量（可根据实验需求适当调整）；

4. 采集后如无法立即提取，可将唾液与唾液保存液按推荐比例混合（通常为1:1），室温保存可达数周至数月而不影响DNA质量；

5. 避免唾液中混入过多气泡，气泡可能导致样本体积计量不准。

1. 部分下游应用（如同时分析DNA和RNA、RNA干扰研究等）需要在提取过程中保留RNA组分；

2. 不含RNase A的试剂盒可为用户提供更大的实验灵活性，用户可根据实际需求选择是否添加RNase A。

如需获取总RNA： 用户可在裂解步骤后向样本中加入适量RNase A溶液（试剂盒未提供，需自备或另购），37℃孵育15~20分钟后继续后续操作。如需在提取DNA的同时保留RNA用于后续检测，建议使用专门为DNA/RNA共提取设计的试剂盒。

1. 内参扩增对照法： 将已知浓度的标准DNA模板与等量提取的DNA混合后进行PCR扩增，比较扩增效率；

2. A260/A230比值法： A260/A230比值＜1.8提示可能存在胍盐、多糖或其他抑制物残留；

3. 浓度梯度稀释法： 将提取的DNA进行梯度稀释后进行PCR，观察扩增曲线是否呈线性关系。

• -20℃保存： 溶解于洗脱液或无核酸酶水中，可保存6~12个月，适合中短期存储；

• -80℃保存： 可长期保存（数年以上），建议分装为小管以避免反复冻融导致的DNA降解；

• 4℃短期保存： 提取后3~5天内使用的DNA可暂存于4℃。

1. 增加样本起始量： 在不超出离心柱载量（通常≤30 μg DNA）的前提下，适当增加唾液样本体积至600~800 μL；

2. 优化裂解时间： 将裂解步骤延长至15~20分钟，必要时提高裂解温度至65℃；

3. 减少洗脱体积： 采用50 μL（而非100 μL）洗脱液洗脱，提高DNA浓度；

4. 两次洗脱合并： 用30~40 μL洗脱液洗脱两次，合并收集管中的DNA溶液；

5. 洗脱液预热： 将洗脱液预热至65~70℃后再加入吸附柱，可提升洗脱效率；

6. 延长洗脱孵育时间： 加入洗脱液后室温放置2~5分钟再离心，确保DNA充分溶解。

本试剂盒适用于新鲜唾液样本、含保存液的唾液样本以及口腔拭子样本。样本收集过程无痛、无创，受试者仅需吐取适量唾液即可完成采样，既适用于医院检验科和第三方医学检验所的批量检测，也适用于科研院校的遗传学研究及法医鉴定机构的人员筛查。

1. 立即处理：采集后应尽快进行核酸提取，最好在4小时内完成。
2. 使用稳定剂：若无法及时处理，建议使用商业化的尿液稳定剂（如YALEPIC 尿液cfDNA保存等），可在常温下稳定cfDNA长达7-14天，有效防止DNase降解和细胞基因组DNA污染。
3. 离心去细胞：提取前建议以1,600 × g离心10分钟去除细胞和碎片。
4. 避免反复冻融：样本应避免反复冻融，以免导致DNA降解。

• 大体积投入：最大支持20ml尿液样本，而许多竞品仅支持0.5-10ml；
• 自动化兼容：优化的磁珠法流程完美适配自动化工作站，节省人工操作时间；
• 高纯度：纳米磁珠+特制缓冲液系统有效去除尿液中的尿素、结晶体等抑制剂；
• 成本效益：在保证高质量提取效果的同时，提供更具竞争力的价格；
• 可提供备案版：支持医疗器械备案版本，满足临床转化需求。

1. 紫外分光光度法：检测A260/A280比值，应在1.7-2.0之间；
2. 琼脂糖凝胶电泳：尿液cfDNA通常以弥散条带形式出现在50-300 bp区域；
3. qPCR检测：使用内参基因（如GAPDH、RNase P）进行扩增，通过Ct值评估产量和纯度；
4. 片段分析仪：使用Agilent Bioanalyzer或类似设备精确分析cfDNA的片段大小分布。
5. 对于极低丰度的cfDNA样本，传统的紫外分光光度法可能因灵敏度不足而无法准确检测，建议优先使用荧光定量法（如Qubit）或qPCR法进行定量评估。

• 完全无创：样本采集无痛、无风险，患者接受度高；
• 可重复采样：方便进行纵向研究和疾病动态监测；
• 样本量大：尿液可获取大体积样本，弥补cfDNA丰度低的不足；
• 背景干净：尿液蛋白浓度仅为血液的约1/1000，提取更容易，PCR抑制剂干扰较少；
• 感染风险低：尿液对HIV等病原体的传染性远低于血液。

本裂解液兼容广泛的血液样本类型，包括：新鲜采集的抗凝血（EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝均可）、4°C短期储存的血液、-20°C或-80°C长期冻存的血液，以及Whatman 903、FTA卡等商用血卡上的干血渍样本。不同类型的血液样本在裂解效果和下游扩增性能上均表现稳定。

本产品严格按照医疗器械生产管理体系生产，每一批次均经过严格的质检放行。但根据中国医疗器械监管法规，本产品仅供科研使用，不可直接用于临床诊断。如需临床诊断用途，客户需自行完成相关注册和验证工作。雅礼生物可根据客户需求提供OEM定制和临床报证技术支持。