病原核酸提取FAQ
病原微生物(病毒/细菌/真菌)核酸提取强调灵敏度与核酸共提取能力。本专题涵盖拭子、BALF 与病原体 DNA/RNA 共提取要点。
雅礼官方解答(88 条)
口腔拭子/咽拭子提取的DNA能直接用于PCR实验吗?
完全可以。YALEPIC拭子基因组DNA分离试剂盒专为PCR应用优化,去除抑制物效果显著。提取的DNA可直接作为模板用于常规PCR、qPCR及多重PCR。通常1-2支口腔拭子可获得足够进行100次PCR反应的基因组DNA。如果扩增Ct值偏高,建议检查拭子采样量是否充分,或在洗脱时适当减少洗脱体积以提高DNA浓度。
这个试剂盒是否适用于含有保存液的商业化拭子?
适用。本试剂盒兼容含异硫氰酸胍或非胍盐类病毒保存液、细胞保存液的各类拭子样本。处理含保存液的咽拭子或鼻拭子时,只需取200-400 µL保存液(离心取沉淀),按标准流程操作即可获得高纯度DNA。特别适合新冠、流感病毒检测中,阳性样本复查人基因组DNA的场景。
提取的DNA浓度低或者OD260/280比值不佳怎么办?
DNA得率低常见于拭子采集细胞量不足、消化时间过短或洗脱效率低。建议:① 口腔拭子采样时充分刮擦颊黏膜,确保细胞数;② 蛋白酶K 56℃消化延长至1小时;③ 洗脱前将Elution Buffer预热至60℃,并孵育膜3-5分钟。若OD260/280偏低(<1.7),可能为蛋白残留,可增加一步洗涤或重新纯化。
这个试剂盒能同时提取病毒DNA和人的基因组DNA吗?
可以。对于鼻咽拭子等可能同时存在病原体DNA(如EB病毒、腺病毒)和宿主细胞的样本,本试剂盒能无偏向地共提取总DNA。提取产物可直接用于病毒DNA定量和人类看家基因检测,满足“同管提取、多重检测”的需求,非常适合病原微生物联合筛查。
法医或微量接触性拭子样本能用这个试剂盒吗?
可以。本试剂盒对痕量DNA有良好回收能力,适用于法医生物检材、指纹擦拭拭子、脱落细胞提取。对于极低拷贝数的样本,推荐使用20-30 µL洗脱体积,并配合载体RNA(Carrier RNA)使用,可显著提高微量DNA回收效率,产物满足STR分型需要。
一次提取需要多长时间?是否必须低温离心?
单次提取流程约25-30分钟(不含消化时间),全程可在室温下完成,无需低温离心。标准操作包括:蛋白酶K消化(可预热加速)、结合、两次洗涤和洗脱。所有步骤均为室温,离心最大转速仅需~13,000 rpm,常规台式离心机即可胜任,非常适合现场快速检测车或基层实验室使用。
本试剂盒适用于哪些样本类型的病原微生物核酸提取?
本试剂盒适用于血液(新鲜或冻存抗凝全血,≤400 μl)、体液(肺泡灌洗液、脑脊液、胸腹水、痰液等,2-3 ml)、拭子液(鼻拭子、咽拭子、口腔拭子等,2-2 ml)、细菌及真菌培养物(≤1×10⁹个细胞)等生物样本中病毒、细菌和真菌的DNA及RNA提取。
提取的核酸可以用于哪些下游实验?
提取的核酸纯度高、完整性好,可直接用于RT-PCR、实时荧光定量PCR(Real Time PCR)、Northern blot、SNP基因分型、STR基因分型、体外翻译、cDNA文库构建、药物基因组学研究及宏基因组测序等多种分子生物学实验。
本试剂盒采用什么技术原理?
本试剂盒采用硅胶质离心吸附柱技术。在独特的缓冲体系下,裂解液中的微生物核酸高效特异地结合在硅胶膜上,通过离心洗涤去除蛋白、细胞代谢物等杂质后,用低盐洗脱液将高纯度核酸从吸附柱上洗脱下来。该技术操作便捷,无需使用酚氯仿等有毒试剂。
试剂盒能否同时提取DNA和RNA?
可以。本试剂盒专门设计用于同时提取样本中的病原微生物DNA和RNA,无需分别使用不同的提取试剂盒,有效节省试剂成本与操作时间。
试剂盒能否有效裂解细胞壁较厚的细菌和真菌?
可以。本试剂盒采用优化的裂解缓冲体系,能够高效裂解革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及细胞壁较厚的真菌,提高低丰度病原微生物的检出率。
试剂盒如何保存?有效期多长?
GBA Buffer需在-20℃条件下冷冻保存,建议避免反复冻融;其他组分可在10-30℃室温条件下保存。各组分在推荐的保存条件下,有效期为18个月。各溶液使用后应及时盖紧盖子,避免挥发或pH值变化。
试剂盒如何运输?
GBA Buffer需低温运输(建议冰袋或干冰运输);其他组分可在常温条件下运输。
样本采集后如何保存和运输?
建议新鲜采集的样本若能在48小时内送至实验室处理,可在4℃条件下保存和运输;若需长期保存或运输时间较长,建议将样本冷冻保存(-20℃或-80℃)。拭子样本建议在保存液中保存运输。为保证下游RNA提取质量,应避免样本反复冻融。
提取的核酸得率低,可能是什么原因?
可能原因包括:(1)样本起始量不足或样本保存不当导致核酸降解;(2)裂解不充分,特别是对于细胞壁较厚的细菌或真菌样本;(3)洗涤或洗脱步骤操作不当。建议按照使用说明书规范操作,并确保样本新鲜或在适当条件下保存。
能否与自动化核酸提取仪配套使用?
本试剂盒当前采用硅胶柱法,设计用于手动提取操作。若需要自动化提取方案,可参考雅礼生物的YALEPIC MagEVO系列磁珠法病原微生物DNA/RNA提取试剂盒,该系列产品兼容手动提取及自动提取程序。
试剂盒中是否含有RNase抑制剂?
本试剂盒的组分经过RNase-free处理,确保RNA提取过程中不受RNase降解影响,保证RNA的完整性和纯度。
货号YB25004产品的目录价是多少?
YALEPIC 病原微生物DNA/RNA提取试剂盒,货号YB25004,规格50T,目录价为1250.00元。如需大批量采购或有其他规格需求,请联系雅礼生物销售团队获取定制化报价。
YALEPIC®柱式法和MagEVO磁珠法试剂盒有什么区别?如何选择?
柱式法试剂盒(本产品,货号YB25004)采用硅胶柱离心技术,适合手动操作和小通量样本处理,无需特殊设备;磁珠法试剂盒(YALEPIC® MagEVO系列)采用磁珠纯化技术,兼容自动核酸提取仪,适合高通量样本处理和自动化实验室。用户可根据样本通量和实验室设备条件选择适合的产品。
本试剂盒可以提取哪些样本类型中的病毒DNA/RNA?
YALEPIC 病毒DNA/RNA提取试剂盒适用于多种样本类型,包括全血、血清、血浆、痰液、淋巴液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液及各种病毒保存液(如VTM保存液)。此外,也适用于鼻咽拭子、口咽拭子、肺泡灌洗液等呼吸道样本中病毒核酸的提取。
单个样本提取需要多长时间?是否可以同时处理多个样本?
单个样本的手动操作流程约15分钟即可完成。本试剂盒采用离心柱法,支持同时对多个样本进行操作,具体处理数量取决于实验者使用的离心机容量。如需高通量样本处理,雅礼生物还提供磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒,适配自动化提取设备。
试剂盒中是否含有酚、氯仿等毒性成分?操作是否安全?
本试剂盒不含酚、氯仿等有毒有机溶剂,全程无需接触有毒化学品,操作安全便捷。提取过程可在常规实验台进行,无需通风橱(但提取潜在传染性样本时仍建议在生物安全柜中操作),废液处理符合常规实验室废液处理流程,极大降低了操作人员的健康风险。
提取的病毒DNA/RNA可以用于哪些下游实验?
提取的病毒DNA和RNA纯度高、抑制剂去除彻底,可直接用于以下分子生物学下游实验:RT-PCR、荧光定量PCR(Real Time PCR/qPCR)、Northern Blot、SNP基因分型、STR基因分型、体外翻译、cDNA文库构建、药物基因组学研究、宏基因组测序等。我们建议客户根据具体下游实验要求评估提取产物的适配性。
对于低病毒载量的样本,试剂盒能否有效提取核酸?
本试剂盒的硅胶膜吸附技术对低浓度核酸仍具有良好的结合效率。对于病毒载量极低的样本,建议适当增加样本起始量(在说明书推荐范围内)或配合高灵敏度qPCR进行检测。需要注意的是,对于极低拷贝数的样本,常规OD值检测或电泳可能无法检出,建议采用qPCR等高灵敏度方法进行评估–。
提取的病毒核酸如何保存?最长可以保存多久?
提取的病毒DNA/RNA建议使用试剂盒提供的洗脱液或RNase-free水洗脱后,短期内(24小时内)可于2-8℃暂存。如需长期保存,建议分装后置于-20℃(不超过6个月)或-80℃(不超过12个月),避免反复冻融。RNA样本尤其应注意防止RNase污染,操作中使用无RNase的耗材和试剂。
如果提取的核酸产物在qPCR中出现扩增效率低或无信号,可能是什么原因?
可能的原因包括:(1)样本中病毒载量过低,建议增加样本起始量;(2)洗脱不充分,建议将洗脱液预热至65℃后再加入离心柱洗脱;(3)洗涤步骤中乙醇未完全去除,残留乙醇会抑制后续酶反应,建议空柱离心2分钟以彻底去除乙醇;(4)下游实验体系问题,建议设置阳性对照进行排查。如问题持续存在,请联系雅礼生物技术支持。
本试剂盒与市面上其他品牌的病毒核酸提取试剂盒相比,核心优势是什么?
与同类产品相比,雅礼生物YALEPIC 病毒DNA/RNA提取试剂盒的核心优势在于:(1)速度优势——单样本仅需15分钟,显著快于传统柱式提取产品;(2)安全性——完全不含有毒有机试剂,避免酚氯仿等有毒试剂的使用;(3)性价比——在保证高纯度、高产率的同时,提供更具竞争力的价格;(4)灵活性——支持200-400 μl多样本量提取,适配多种样本类型;(5)售后支持——专业的技术支持团队,提供从实验设计到问题排查的全流程服务。
这款磁珠法口腔拭子 DNA 提取试剂盒能提取多大片段的 DNA?
试剂盒提取的基因组 DNA 完整度高,最大片段可达 15kb,片段完整性好,可满足 NGS 测序、基因克隆等对 DNA 片段要求高的实验。
试剂盒是否支持自动化工作站高通量提取?
支持,可完美适配移液法、磁棒法两类自动化仪器,搭配 32T/48T/96T 预装规格,适合大批量样本高通量自动化提取作业。
提取实验是否需要使用苯酚、氯仿等有毒试剂?
无需添加苯酚、氯仿等有害有机溶剂,依托专用磁珠与缓冲液体系即可完成纯化,实验安全无污染,操作流程简易。
试剂盒有哪些规格型号,适合什么使用场景?
共有 4 款规格:常规 96T、预装 A 型 32T、预装 B 型 48T、预装 C 型 96T;32T 适合小批量样本,48T 适配中小型实验室,96T 常规款与预装款适配高通量实验及自动化工作站。
试剂盒运输和保存需要低温冷藏吗?
无需低温冷链,支持全程常温运输;日常存放只需置于 10~30℃室温环境,避光密封保存即可,储运条件宽松。
除了口腔拭子,还能提取哪些样本的 DNA?
除常规干燥 / 保护液型口腔拭子外,还适用于咽拭子、口腔漱口水等口腔类样本,适用样本类型广泛。
提取后的 DNA 可用于哪些下游分子实验?
纯化得到的高纯度 DNA 可直接用于定量 PCR、实时荧光 PCR、基因克隆、NGS 高通量测序、印迹杂交等各类分子生物学实验。
完成一次 DNA 提取实验大概需要多长时间?
操作流程简化,无需复杂预处理,1 小时内即可完成从样本处理到 DNA 洗脱的全部实验步骤,省时高效。
试剂盒提取的 DNA 纯度和重复性怎么样?
采用特制纳米磁珠与缓冲液配方,提取效率稳定,批次间重复性强,DNA 纯度达标、无杂质污染,实验数据可靠。
MagEVO病原微生物DNA/RNA提取试剂盒可以用于哪些样本类型?
本试剂盒适用于多种临床及环境样本,包括:新鲜或冻存抗凝全血(≤400μl)、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液、脑脊液、胸腹水等体液样本(2~3ml,≤5×10⁶个细胞),以及细菌(≤1×10⁹个细胞)和真菌(≤1×10⁹个细胞)等微生物培养物,同时也支持粪便样本(100mg固态或200μl保存液中的粪便样本)的DNA/RNA提取。
该试剂盒能否同时提取DNA和RNA?
可以。试剂盒专门针对病原微生物的DNA和RNA共提取场景进行了优化设计,能够在同一份样本中同时提取并纯化病毒、细菌和真菌的DNA和RNA。这一特性尤其适用于需同时进行DNA病毒和RNA病毒检测的宏基因组测序及病原体共检测应用。
对于难破壁的真菌或革兰氏阳性细菌,提取效果如何?
本试剂盒采用化学裂解与机械研磨相结合的裂解体系,针对细胞壁较厚的真菌(如酵母菌、念珠菌)和革兰氏阳性菌等难破壁微生物进行了裂解优化,能够高效释放核酸,显著提高此类微生物的检出率,适用于临床样本中的低丰度病原体检测。
提取后的核酸产物可以用于哪些下游实验?
纯化得到的DNA/RNA产物纯度高、完整性好,无蛋白及核酸酶残留,适用于多种下游分子生物学应用,包括:常规PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)、宏基因组文库构建(mNGS)、全基因组测序(WGS)、基于16S rDNA的微生物组分析以及鸟枪法宏基因组测序分析。
试剂盒支持自动化提取吗?
支持。本试剂盒采用磁珠法技术路线,既可配合磁力架进行手动提取,也完全兼容各类磁棒法和移液法自动化核酸提取仪进行高通量提取,适用于临床检验中心、疾控中心和科研实验室的大规模样本处理需求。
试剂盒是否含有苯酚/氯仿等有毒试剂?
不含。本试剂盒采用纳米磁珠纯化技术,全程无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂,提取过程中不涉及有机试剂抽提步骤,不仅对实验人员更加安全,也符合绿色环保的实验室操作规范。
试剂盒的保存及运输条件是什么?有效期是多久?
本试剂盒支持常温运输,全程无需冷链;所有组分在10~30℃室温条件下保存即可,有效期12个月。这一保存条件极大地降低了产品在运输和存储过程中的冷链成本,便于实验室备货和日常使用。
本试剂盒的提取产率如何?纯度能达到什么水平?
MagEVO试剂盒经优化设计,提取产物得率高、重复性好,纯化后的DNA/RNA产物A260/A280比值一般在1.8~2.0之间,蛋白残留低。纯化产物不含PCR抑制剂和核酸酶,可直接用于下游扩增和测序反应,无需额外纯化。
能否用于痰液等富含黏蛋白和抑制物的样本?
可以。本试剂盒针对痰液、肺泡灌洗液等富含黏蛋白和多种PCR抑制物的复杂体液样本进行了缓冲体系的专门优化,配合高效洗涤步骤,能够有效去除样本中的抑制物,确保提取核酸的纯度满足下游检测要求。
宏基因组测序(mNGS)实验对核酸提取有什么特殊要求?
mNGS对核酸提取的纯度、完整性和背景菌污染控制要求较高。本试剂盒采用高效洗涤体系,能够最大限度地去除宿主核酸干扰和背景菌污染,纯化产物适用于mNGS文库构建。建议在mNGS实验中使用NGS级别的水和无核酸酶耗材,并在提取过程中设置阴性对照以监控背景污染。
YALEPIC MagEVO磁珠法病原微生物DNA提取试剂盒适用于哪些样本类型?
本试剂盒样本兼容性广泛,适用于全血、血浆/血清、拭子(咽拭子、鼻拭子、宫颈拭子等)、痰液、肺泡灌洗液、脑脊液、尿液、粪便悬液及组织匀浆等多种临床样本。独特的裂解缓冲液体系能够有效处理粘稠样本(如痰液)和低细胞数量样本,确保各类样本中病原微生物DNA的高效提取。
本试剂盒提取的DNA纯度和产量如何?适用于哪些下游实验?
本试剂盒提取的DNA产物纯度高,OD260/280比值在1.7-1.9之间,OD260/230比值≥1.8,能够有效去除蛋白、核酸酶及PCR抑制剂。提取的DNA片段完整,可直接用于荧光定量PCR(qPCR)、常规PCR、二代测序(NGS)、宏基因组文库构建、全基因组测序及微生物群落分析等下游分子生物学实验,无需额外纯化步骤。
试剂盒是否支持自动化核酸提取?适配哪些设备?
支持。本试剂盒提供预装板规格(YM26013-A预装A型32T、YM26013-B预装B型48T、YM26013-C预装C型96T),可直接适配KingFisher系列(如KingFisher Flex、KingFisher Duo)、YALEPIC 系列等主流自动化核酸提取仪。手动版本(YM26013管装96T)同样可用于手动操作流程,操作时间控制在40min内。
试剂盒的保存条件和运输要求是什么?有效期多长?
试剂盒整体应在室温(<30℃)条件下保存,磁珠组分严禁冷冻,以免冻融影响磁珠分散性能及核酸结合效率。运输时可采用常温运输,确保各组分密封完好,避免阳光直射。本试剂盒有效期为18个月(自生产之日起),建议在有效期内使用以获得最佳提取效果。
本试剂盒相比其他品牌同类产品有何优势?
本试剂盒的核心优势包括:(1)独特的超顺磁性硅基磁珠技术,结合效率高、分散性好;(2)广泛的样本兼容性,覆盖血液、拭子、痰液、肺泡灌洗液等复杂样本;(3)操作安全便捷,全程无需苯酚/氯仿等有毒有机溶剂;(4)提供手动及自动化多规格选择,适配不同通量需求;(5)符合国家医药行业标准YY/T 1717-2020,质量有保障;(6)提取产物纯度优异,能够有效去除PCR抑制剂,确保下游实验结果可靠。
提取过程中磁珠残留或洗脱液中带磁珠怎么办?
如出现磁珠残留或洗脱液中带有磁珠的情况,建议检查:(1)磁吸时间是否充足,可适当延长吸磁时间(如增加至2-3分钟);(2)若使用自动化设备,检查设备程序设置是否正确,确保吸磁步骤充分;(3)样本初始裂解液是否过于粘稠,必要时可增加预处理步骤;(4)若问题持续存在,可尝试将洗脱液以12000rpm离心3分钟后取上清用于下游实验。
本试剂盒是否可用于高GC含量病原微生物的DNA提取?
可以。试剂盒优化的裂解缓冲液体系针对不同细胞壁结构的病原微生物进行了专门优化,包括革兰阳性菌、革兰阴性菌、分枝杆菌、真菌以及包膜/无包膜病毒等多种病原体。对于高GC含量的革兰阳性菌(如结核分枝杆菌),建议适当延长蛋白酶K消化时间或增加样本起始量,以确保裂解充分,获得高质量DNA。
试剂盒有相关的技术支持或使用培训吗?
雅礼生物提供全面的技术支持服务。客户可通过以下方式联系我们:(1)电话:0512-66256010;(2)邮箱:info@yalibiotech.com。我们提供产品使用咨询、实验方案优化建议、自动化设备适配指导等技术支持。对于批量采购或长期合作客户,可协商提供现场或远程操作培训服务。
YALEPIC 磁珠法病毒 DNA/RNA 提取试剂盒可以同时提取 DNA 和 RNA 吗?
可以,本试剂盒采用共提缓冲配方,单份样本一次提取同步获得病毒 DNA 与 RNA,不用分两次裂解,节约样本和实验时间,是呼吸道病毒、混合病原样本优选提取试剂。
YG28002-A/B/C 三款预装型号有什么区别,该怎么选型?
A 型 32T 小通量,适合小型实验室零星拭子样本;B 型 48T 适配中小型常规检测;C 型 96T 预装孔板,适配全自动核酸提取仪高通量批量上机,预装款无需手动分装试剂。
试剂盒常温 10-30℃保存,夏天高温环境会失效吗?
产品配方经过高温稳定性验证,10~30℃常温避光存放即可,夏季室温≤30℃无需冷藏,避免阳光暴晒即可正常保质,常温运输不会影响试剂活性。
痰液、粪便这类杂质多的样本,能用这款试剂盒提取核酸吗?
可以,优化裂解缓冲可破除粘液、粪便杂质干扰;浓痰建议提前用生理盐水稀释,粪便样本取上清提取,可显著提升核酸得率与纯度。或建议使用雅礼生物的唾液专用核酸提取,粪便专用核酸提取试剂盒。
提取完的核酸能直接做荧光定量 qPCR 和 NGS 全基因组测序吗?
纯化核酸去除了蛋白、盐类抑制剂,产物可直接用于 qPCR、RT-PCR、全基因组二代测序,无需二次纯化处理,满足科研与临床检测标准。
试剂盒既可以手动提取,又能搭配全自动核酸提取仪吗?
通用适配,基础款 96T 可手动分装试剂手动提取,A/B/C 预装款优先匹配全自动磁珠提取设备YALEPIC Pure 32,也可兼容市面主流国产 / 进口核酸提取仪。
单批次样本提取需要多久时间?最低 20 分钟能完成提取吗?
简单拭子样本最快 20min 即可完成裂解 – 结合 – 洗涤 – 洗脱全流程。
试剂盒适用的样本体积是多少?全血和血浆上样量一样吗?
常规推荐上样体积 100–200μL,血浆、血清可直接加样,全血样本建议优先分离血浆后提取,减少血红素杂质干扰。
预装 A 型、B 型、C 型试剂盒内含预分装试剂吗?
三款预装型号均预分装磁珠、裂解液、洗涤液、洗脱液,省去实验室试剂分装步骤,降低移液误差,缩短前处理时间。
提取核酸浓度偏低、得率差是什么原因?
多为样本反复冻融、样本病毒载量过低、裂解混匀不充分;新鲜样本提取、充分涡旋裂解可有效提升核酸回收率。
试剂盒可以用于动物疫病(猪瘟、禽流感)病毒核酸提取吗?
完全适配,大量验证用于畜禽血清、咽喉拭子、组织样本中动物病毒 DNA/RNA 提取,广泛用于养殖场疫病筛查。
整盒试剂盒开封后,剩余试剂怎么储存?
开封后原包装避光 10~30℃保存,分装后的磁珠溶液密封存放,避免环境 RNase 污染,1 个月内用完不影响提取效率。
YALEPIC 细菌RNA提取试剂盒适用于哪些类型的细菌?
本试剂盒适用于革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌等)和革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、链球菌等)的总RNA提取。对于细胞壁较厚的革兰氏阳性菌,可适当延长裂解时间或配合溶菌酶预处理,以获得最佳裂解效果和RNA产量。
提取的细菌RNA中是否会有基因组DNA残留?
本试剂盒采用优化的洗涤体系,提取过程中可有效去除绝大部分基因组DNA。同时试剂盒内含RNase-free DNase I,可在吸附柱上直接进行gDNA消化处理,经消化后的RNA产品经PCR检测通常无gDNA扩增条带,可满足RT-qPCR、RNA-Seq等对gDNA残留要求极为严格的下游实验需求。
提取过程中是否需要使用酚或氯仿等有毒试剂?
不需要。YALEPIC 细菌RNA提取试剂盒全程采用异硫氰酸胍裂解与硅基质膜柱纯化的技术方案,无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂进行抽提,实验操作更加安全环保,大幅降低了实验人员接触有毒化学品的风险,特别适合常规实验室和高通量提取场景使用。
单个样本提取细菌RNA大约需要多长时间?
在熟练操作的情况下,使用本试剂盒从细菌样本中提取总RNA,单个样本约需30分钟即可完成全部操作流程(包括裂解、吸附、洗涤、洗脱等步骤)。若进行DNase I柱上消化,需额外增加约15分钟。批量处理多个样本时,可同步操作,进一步提高实验效率。
提取的细菌RNA产量和纯度如何?
以大肠杆菌为例,从1×10⁸个菌体中通常可提取获得10~30 μg的高纯度总RNA。RNA纯度方面,A260/A280比值一般在1.9~2.1之间,A260/A230比值≥2.0,表明蛋白质及有机溶剂残留极低。琼脂糖凝胶电泳可清晰观察到23S和16S rRNA条带,23S/16S比值≥1.8,RNA完整性优良。
推荐的细菌样本用量是多少?样本量过多会有影响吗?
推荐的细菌用量为1×10⁶ ~ 1×10⁸个,最大不建议超过1×10⁹个。样本量过少可能导致RNA产量偏低;样本量过多则会导致裂解不充分、吸附柱超载,从而降低RNA的纯度和回收率。建议根据细菌种类和生长状态进行预实验,确定最佳样本用量。
提取的细菌RNA可以用于哪些下游实验?
本试剂盒提取的细菌总RNA品质优异,经验证可广泛应用于:RT-PCR、荧光定量RT-qPCR(基因表达分析)、Northern Blot / Dot Blot(RNA检测)、转录组测序(RNA-Seq)、基因芯片分析(Microarray)、Poly(A) mRNA筛选、体外翻译、RNase保护分析及分子克隆(cDNA文库构建) 等多种分子生物学下游实验。
试剂盒中的DNase I应该如何保存?可以反复冻融吗?
DNase I应在-20℃密封保存,避免反复冻融。建议收到产品后将DNase I进行小量分装(如每次使用量分装为一管),使用时取出一管,未使用的分装管继续-20℃保存。反复冻融会导致DNase I酶活性下降,影响gDNA消化效果。
提取的RNA出现降解,可能的原因有哪些?如何解决?
RNA降解常见原因及解决建议:
- RNase污染:确保使用RNase-free的枪头、离心管和操作台面,操作全程佩戴手套和口罩;
- 样本处理不及时:细菌收集后应立即进行裂解处理,或暂存于RNA保护液中-80℃保存;
- 裂解不充分:确保裂解液与菌体充分混匀,革兰氏阳性菌可延长裂解时间或增加溶菌酶处理步骤;
- 洗脱液问题:务必使用试剂盒提供的RNase-free Water进行洗脱,避免使用非无RNase水。
YALEPIC 细菌RNA提取试剂盒与同类产品相比有哪些优势?
与市面上同类产品相比,YALEPIC 细菌RNA提取试剂盒的核心优势包括:
- 安全无毒:全程无需酚/氯仿抽提,操作更安全;
- 配套DNase I:内含DNase I及专用缓冲液,无需额外购买,一步到位;
- RNA品质高:独特的硅基质膜材料确保RNA高纯度、高完整性;
- 菌种兼容性强:同时适用于革兰氏阴性菌和阳性菌;
- 性价比高:50T规格仅¥750,单次反应成本仅¥15,批量采购另有优惠;
- 厂家直供:雅礼生物自主研发生产,品质稳定,技术支持响应及时。
该试剂盒是否支持自动化操作或高通量提取?
本试剂盒为手动柱式操作设计。如需高通量自动化提取,雅礼生物提供配套的磁珠法细菌RNA提取试剂盒,可完美适配雅礼全自动核酸提取仪及其他主流自动化平台,实现96样本/批次的高通量提取。欢迎咨询我们的技术团队获取自动化方案推荐。
购买后如何获取技术支持?产品是否有质量保障?
雅礼生物为所有产品提供全程专业技术支持。如在使用过程中遇到任何问题,可通过以下方式获取帮助:
- 📞 技术服务热线:0512-66256010
- 📧 技术支持邮箱:info@yalibiotech.com
- 🌐 官网在线留言:www.yalibiotech.com
这款试剂盒能提取哪些细菌的基因组 DNA?
本试剂盒通用革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌所有常规科研菌株,适配绝大多数实验室常见细菌样本基因组 DNA 提取需求。
试剂盒不含 RNase A,会影响 DNA 提取纯度吗?
不会影响基础提取效果。试剂盒自带优化缓冲体系,可自然去除大部分 RNA 杂质;若实验需完全去除 RNA 残留,可自行搭配常规 RNase A 使用,灵活适配不同实验标准。
提取过程需要用到苯酚、氯仿有毒试剂吗?
不需要。采用改良硅胶膜离心柱法,全程规避苯酚、氯仿等有害有机溶剂,也无需乙醇沉淀步骤,实验安全无污染,操作流程更简洁。
一次最多能处理多少细菌菌体?
标准单次适配 10⁶~10⁸个 细菌细胞,最大可承载 2.0×10⁹个 革兰氏阴 / 阳性菌菌体,满足常规及中高浓度菌液样本提取。
提取的细菌 DNA 可做哪些下游实验?
提取高纯度完整基因组 DNA,可直接用于限制性酶切、普通 PCR 扩增、Real-Time PCR 荧光定量、印迹杂交、基因文库构建、菌种测序等分子生物学实验。
整套提取实验大概需要多长时间?
按照标准实验操作流程,1 小时内即可完成多组细菌样本的裂解、结合、洗涤、洗脱全套 DNA 提取流程,适合批量样本处理。
YC22013 试剂盒运输和存放有什么要求?
支持常温运输,不用冷链;日常存放置于 10~30℃室温干燥避光环境 即可,存放条件宽松,不易失效。
提取 DNA 出现纯度低、有蛋白残留怎么办?
试剂盒专属缓冲体系可最大限度去除杂蛋白、脂类及抑制杂质;建议严格按照说明书控制菌样投入量、充分裂解菌体,即可保障 DNA 高纯度,无实验抑制干扰。
可以提取真菌、酵母等其他微生物 DNA 吗?
不可以。本试剂盒专为细菌细胞壁裂解体系设计,不适配酵母、真菌等真核微生物,此类样本需选用专用真菌基因组 DNA 提取试剂盒。
试剂盒运输和保存需要低温冷藏吗?
无需低温冷链,支持全程常温运输;收到货品后置于 10~30℃室温密封保存即可,储存条件简单,不占用冰箱冷藏空间。
行业通用技术要点
以下内容为业界通用的技术原理与操作经验,用于补充理解,不构成对具体产品的指向。
病原微生物核酸提取为何强调 DNA/RNA 共提取?
临床与疾控场景常需同时覆盖病毒(RNA)、细菌与真菌(DNA),共提取可避免漏检并提高单管效率;需选择对两类核酸均有稳定回收的体系。
低拷贝病原体检出率低如何改善?
提高起始样本量、采用高特异性探针法、优化裂解与核酸富集,并严格分区操作与防污染(如 UDG 防污染体系)以降低气溶胶交叉污染。